Infección por T. pallidum subespecie pallidum

Transcripción

1 Infección por T. pallidum subespecie pallidum Huésped produce anticuerpos: 1. contra material lipoidal liberado por las células dañadas (reaginas) 2. contra material lipoproteico y cardiolipina liberada por los treponemas (anticuerpos específicos)

2 Infección por T. pallidum subespecie Anticuerpos antilipídicos: pallidum Se detectan en etapa primaria Aumenta cantidad en etapa secundaria Disminuyen en etapas posteriores Se producen en otras enfermedades Treponémicas Se producen en respuesta a enfermedades No treponémicas agudas o crónicas

3 MICROSCOPÍA DIRECTA EX. TREPONÉMICOS (muestra de lesión o tejido) EX. SEROLÓGICOS (muestras de sangre y LCR) EX. NO TREPONÉMICOS OS EX. TREPONÉMICOS

4 Exámenes Antígeno Anticuerpo No treponémicos Cardiolipina Reagina Treponémicos T. pallidum Específicos

5 Exámenes serológicos No treponémicos (RPR, USR, VDRL) Treponémicos (MHA-TP, FTA-ABS, ABS, Inmunocromatografía, ELISA)

6 Exámenes No treponémicos VDRL en lámina USR RPR en Tarjeta (Venereral Disease Research Laboratory) (Unheated Serum Reagin) (Rapid Plasma Reagin)

7 Exámenes No treponémicos Emplean antígeno lipoidal (cardiolipina, lecitina, colesterol) Son exámenes de floculación (lámina o tarjeta) Fáciles de realizar Miden anticuerpos IgG e IgM Examen cualitativo de tamizaje (RPR) Examen cuantitativo de seguimiento (VDRL, USR)

8 Exámenes No treponémicos Nivel aceptable de especificidad Sensibilidad alta Costo relativamente barato Lectura macroscópica (RPR) Lectura microscópica (VDRL, USR) Tiempo de ejecución 40 a 90 minutos) Estabilidad ag. 12 hrs VDRL, 1 año RPR, USR

9 Exámenes No treponémicos El laboratorio debe estar a 23-29º 29º C Materiales y antígeno deben estar a 23-29º 29º C Emplea antígeno de cardiolipina, lecitina, colesterol Se realiza en anillos de 14 mm diám. (VDRL o USR) o 18 mm diám. (RPR) Se realiza en suero (RPR, VDRL, USR) o en LCR (VDRL)

10 % SENSIBILIDAD Y % DE ESPECIFICIDAD EXAMENES NO TREPONÉMICOS

11 NO TREPONÉMICAS RPR USR VDRL APLICACIÓN Descarte ráp. Descarte Rutina, monitor tto REACCIÓN Floculación Floculación Floculación EXAMEN Cualitativo Cuali-cuanti Cuali y cuantitativo LECTURA Macroscópica Microscópica Microscópica TIEMPO 40 min. 40 min 90 min. ESTAB. AG. 3 meses fecha expir. 12 horas MUESTRA Suero s/calentar Suero s/calentar Suero calentado ado y LCR sin calentar TÉCNICA Fácil Fácil Fácil MATERIAL Desechable No desechable No desechable

12 Anticuerpos anti-t. pallidum Se detectan en etapa primaria Aumenta cantidad en etapa secundaria Permanecen de por vida

13 EX. DE MICROSCOPÍA DIRECTA Microscopía de campo oscuro (CO) Anticuerpos Fluorescentes Directos para T. pallidum (DFA-TP)

14 MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO Lesiones húmedas Examen inmediato Observación de organismos móviles REQUISITOS Microscopio adecuado Capacitación Buena toma de muestra Perseverancia

15 ANTICUERPOS FLUORESCENTES DIRECTOS PARA T. PALLIDUM (DFA-TP) Remplaza al examen C.O. Lesiones húmedas Lesiones orales Líquidos corporales Macerado de tejidos Examen no inmediato Envío a Laboratorio de Referencia Emplea anticuerpos monoclonales

16 EXAMEN DE MICROSCOPÍA DIRECTA POSITIVA Demostración del T. pallidum: Morfología Movilidad Diagnóstico de sífilis: Primaria Secundaria Congénita precoz Recaída infecciosa

17 EXAMEN DE MICROSCOPÍA DIRECTA NEGATIVO No descarta sífilis Tiempo o condición de la lesión Tratamiento previo (local o sistémico) Mala toma de muestra Mala identificación del T. pallidum

18 Exámenes Treponémicos FTA-ABS ABS MHA-TP ELISA (Fluorescent Treponemal Antibody Absorption) (Micro Hemagglutination Assay for antibodies to T. pallidum Enzimoinmunoensayo

19 EXÁMENES TREPONÉMICOS Reacciones antígeno anticuerpo, de aglutinación Antígeno T. pallidump subespecie pallidum Detectan anticuerpos dirigidos contra componentes treponémicos celulares Son exámenes cualitativos Son exámenes confirmatorios Son sensibles Son específicos Permanecen reactivos de por vida

20 EXÁMEN TREPONÉMICO FTA-ABS ABS El laboratorio, materiales, reactivos y muestras deben estar a 23 ºC-29 ºC Estufa para incubación a ºC Frotis de T. pallidum en lámina 7 controles : R R PBS 1+ PBS SORB NE NE SORB

21 EXAMEN TREPONÉMICO FTA-ABS ABS Se diluyen las muestras en sorbente Se colocan controles y muestras sobre frotis identificados Se incuban en estufa a 36 ºC Se lavan con PBS, agua destilada y se secan Se agrega conjugado marcado Se incuban, lavan, secan Se agrega medio de montaje Se lee en microscopio de fluorescencia

22 EXAMEN TREPONÉMICO MHA-TP El kit,, muestras y materiales deben estar a 23 ºC- 29 ºC Se diluye las muestras en diluyente absorbente para eliminar reacciones cruzadas Se coloca en duplicado controles y muestras en pocillos de placas de microtitulación en U, previamente identificados Se agrega antígeno (glóbulos rojos sensibilizados con T.pallidum pallidum) ) a una fila

23 EXAMEN TREPONÉMICO MHA-TP Se agrega glóbulos rojos no sensibilizados a la otra fila Se incuba a 23 ºC-29 ºC Se lee con ayuda con ayuda de un espejo lector Muestras reactivas forman una malla suave de células aglutinadas Muestras no reactivas forman un botón compacto de células no aglutinadas

24 EXAMEN TREPONÉMICO ELISA Método indirecto para detectar para detectar anticuerpos El antígeno recubre los pocillos de la placa de microtitulación Se agrega una dilución de suero en pocillo para que los anticuerpos se unan al antígeno

25 EXAMEN TREPONÉMICO ELISA Inmunoglobulinas Antihumanas marcadas se usan para detectar anticuerpos del paciente Se lava el exceso de anticuerpos y se agrega un sustrato para la detección Si el paciente tiene anticuerpos a T. pallidum se produce una reacción de color

26 EXAMEN TREPONÉMICO ELISA La intensidad del color desarrollado es proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes El cambio de color se lee en un lector ELISA Ventaja de la técnica: elimina la interpretación subjetiva de los resultados

27 TÉCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFÍA Emplea combinación de Igs antihumanas y conjugado coloreado como fase móvil Emplea proteínas recombinantes de sífilis fijadas en las líneas de prueba y control La muestra fluye y las Igs humanas son capturadas por el conjugado Ig.. Antihumano coloreado formando un inmunocomplejo

28 TÉCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFÍA El inmunocomplejo se une a las proteínas recombinantes de sífilis en la línea de prueba y se produce una línea rojo-violeta Un exceso de conjugado reacciona en la línea de control formando una segunda línea La muestra y el kit deben estar a 23ºC ºC-29ºC

29 TÉCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFÍA Sacar el dispositivo o tira de prueba Identificar el dispositivo o tira Agregar muestra en el lugar indicado Si el kit lo requiere agregar diluyente Leer resultados a los minutos

30 USO DE TÉCNICAS TREPONÉMICAS Para distinguir reacciones debidas a sífilis de las falsas positivas en las pruebas No treponémicas. Para confirmar sífilis en etapa de incubación. Para confirmar sífilis tardía en aquellos casos con ex. No treponémico No reactivos.

31 USO DE TÉCNICAS TREPONÉMICAS Para resolver casos con evidencia epidemiológica de sífilis y la pareja presenta ex. No trep.. repetidamente No Reactivos. Si después de efectuar repetidos ex. No treponémicos el diagnóstico continúa siendo dudoso. Si el título de VDRL permanece estable con o sin tratamiento

32 USO DE TÉCNICAS TREPONÉMICAS Si el título de VDRL muestra una variación de solo una dilución (mayor o menor) en dos controles sucesivos con intervalo de más de un mes. Para ayudar al dg. de sífilis en una madre que es No Reactiva al VDRL y que no presenta síntomas clínicos de sífilis pero tiene un hijo con sífilis congénita

33 TÉCNICAS TREPONÉMICAS FTA-ABS ABS MHA-TP Aplicación confirmación dg. confirmación dg (excepto sífilis primaria) Examen cualitativo cualitativo Muestra suero, LCR suero Reacción antig-anticpo anticpo aglutin. Ag-anticpo Antígeno T.pallidum eritrocitos sensib. con T.pallidum Lectura microsp. IF macroscópica Tiempo 6 hrs. 3 hrs Técnica difícil, cara relativamente fácil f y no muy cara

34 EXÁMENES TREPONÉMICOS % SENSIBILIDAD Y % ESPECIFICFIDAD