DESARROLLO DE ESTRATEGIAS DE CONTROL DE VIRUS Y FITOPLASMAS EN VID

Transcripción

1 XIII Foro INIA Retos de la I+D+i en viticultura y enología: nuevas demandas y cambio climático INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS DESARROLLO DE ESTRATEGIAS DE CONTROL DE VIRUS Y FITOPLASMAS EN VID AVANCES EN EL DIAGNÓSTICO Y DETECCIÓN SANEAMIENTO DE MATERIAL VEGETAL Antonio OLMOS Lab. Virología e Inmunología. Centro de Protección Vegetal y Biotecnología Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Moncada, Valencia

2 Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Centro de Protección Vegetal Laboratorio de Virología e Inmunología INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Experiencia: - Desarrollo y validación de métodos y protocolos serológicos y moleculares para la detección de patógenos de plantas. - Control de virus de especies leñosas mediante métodos convencionales y biotecnológicos.

3 CARACTERÍSTICAS DE LAS VIROSIS DE VEGETALES INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS INCURABLES (No sistema inmune) IMPOSIBLE CONTROL QUÍMICO TRANSMISIBLES: vegetativamente (injerto, multiplic. vegetativa), semilla, polen, vectores... SELECCIÓN SANITARIA DE PLANTAS MADRE

4 CARACTERÍSTICAS DE LAS VIROSIS DE VEGETALES INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS FRECUENTES (Fácil infección, tiempo exposición largo especialmente en plantas leñosas...) GRANDES POBLACIONES HOMOGÉNEAS DE PLANTAS CULTIVADAS (Inmóviles) NUMEROSAS MUESTRAS

5 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS El movimiento de material vegetal infectado (con o sin síntomas) y el comercio legal e ilegal, han sido y continúa siendo la principal causa de dispersión de agentes patógenos a larga distancia.

6 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Métodos biológicos: Demostración del poder patógeno Valoración de la agresividad Detec. enfermedades etiología desconocida (a pesar de sus inconvenientes)

7 Tecnicas serologicas: INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS La técnica ELISA convencional ha hecho posible la realización de millones de muestras de forma rutinaria. Su único inconveniente: la necesidad de realizar extractos

8 TÉCNICAS MOLECULARES INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Métodos de amplificación isoterma: 3SR, NASBA (Nucleic acid sequence based amplification) SDA (Strand displacement amplification) LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) MDA (Multiple displacement amplification) Amplificación enzimática mediante variantes de PCR: PCR and RT-PCR Immunocaptura PCR (IC-PCR) Print y squash-capture PCR (PC or SC-PCR) Heminested or nested PCR en un solo tubo cerrado PCR cooperativa (Co-PCR) PCR cuantitativa a tiempo real

9 PCR CUANTITATIVA A TIEMPO REAL INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS PARA LA DETECCIÓN DE DIANAS VIRALES EN PLANTAS Y VECTORES TaqMan probes

10 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS VIROSIS DE VID Las enfermedades causadas por virus ocasionan pérdidas importantes en el cultivo de la vid en todo el mundo. " Las cepas producen menos y con peor calidad. " Se reduce la longevidad de las plantas. Se han descrito 61 virus que infectan vid. Alrededor de 30 enfermedades se asocian a virus (20 de ellas con agente etiológico identificado)

11 Pérdidas de 30-90% en producción Transmitidos por Xiphinema y Longidorus spp Entrenudo corto infeccioso Grapevine fanleaf virus INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS

12 Enrollado Grapevine leafroll associated virus -1 a -11 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Provoca importantes pérdidas en todo el mundo (30-40% producción) Transmitidos por Planococcus y Psuedococcus spp

13 Jaspeado Grapevine fleck virus INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Distribución mundial Efecto sinérgico con otros virus El complejo de la madera rizada 1. Ahoyado del rupestris (Rupestris stem pitting) Rupestris stem pitting associated virus 2. Acanalado del Kober 5BB (Kober stem grooving)grapevine vitivirus A 3. Acanalado del LN 33 (LN33 stem grooving) Sin identificar agente etiológico 4. Madera acorchada (Corky bark disorder)grapevine vitivirus B

14 Fitoplasmas INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Candidatus Phytoplasma vitis (Grapevine flavescence dorée o fitoplasma de la flavescencia dorada) Fitoplasma causante de bois noir

15 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Diseño y validación en métodos de detección basados en multiplex PCR a tiempo real Secuenciación masiva para caracterización de virosis establecidas y emergentes, y búsqueda de nuevos virus en material de vid Detección de virosis en diversas áreas vitivinícolas de Cataluña, Comunidad Valenciana, Galicia, Aragón, La Rioja y Extremadura. Caracterización de los aislados virales Secuenciación completa del genoma de los nuevos aislados españoles del virus del mosaico del arabis Seguimiento de especies de insectos pertenecientes a familias potencialmente transmisoras de fitoplasmas identificados en Extremadura, Valencia, Galicia y Cataluña

16 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Programa para la producción de vid libre de virus mediante termoterapia y cultivo de ápices caulinares in vitro

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22 INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS Muchas gracias por su atención