Técnicas diagnósticas en el estudio de los linfomas. Sergio Serrano UAB, IMIM, Hospital del Mar

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María Jesús Ruiz Serrano
hace 7 años
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1 Técnicas diagnósticas en el estudio de los linfomas Sergio Serrano UAB, IMIM, Hospital del Mar

2 Criterios de clasificación Morfológicos Inmunofenotípicos Genéticos Clínicos

3 Técnicas de diagnóstico Morfología Histología Inmunofenotipo Genética FISH PCR Inmunohistoquímica Citometría de flujo

4 Técnicas de diagnóstico Morfolgía Fijación Inmunohistoquímica FISH PCR

5 Control de calidad del ADN 600 bp 400 bp 300 bp 200 bp 100 bp fresco parafina

6 Morfología Fijación Inclusión Corte Tinción

7 Morfología Análisis de la arquitectura: patrones Análisis citológico

8 Morfología Identificación del problema Diseño de los estudios subsiguientes: Inmunohistoquímicos Moleculares Citogenéticos (FISH)

9 Técnicas de diagnóstico Morfología Histología Inmunofenotipo Genética FISH PCR Inmunohistoquímica Citometría de flujo

10 Ag CD79a CD20 CD23 bcl-2 bcl-6 CD10

11 Ag CBMV CPNH CB CC Burkitt

12 Ag CD79a CD20 CD23 bcl-2 bcl-6 CD10 Burkitt

13 Inmunohistoquímica Fijación Recuperación antigénica Reacción antígeno-anticuerpo Detección de la reacción

14 Inmunohistoquímica Fijación Recuperación antigénica Reacción antígeno-anticuerpo Detección de la reacción

15 BCL2 enz BCL2 mw 15 BCL2 aut 6

16 Inmunohistoquímica Morfología Fijación Recuperación antigénica Reacción antígeno-anticuerpo Detección de la reacción

17 AB-P c D1 Dextrano-P c D1 CSA c D1

18 Inmunohistoquímica Morfología Selección de un panel de ac. primarios Evaluación de los controles int. y ext. Identificación de las células tumorales Interpretación del resultado

19 - Niño de 2 años - Tumoracion intranasal - Sospecha de linfoma T/NK de tipo nasal - Se solicita realización de CD56

21 CD56

22 Desmina

25 Inmunohistoquímica Morfología Selección de un panel de ac. primarios Evaluación de los controles int. y ext. Identificación de las células tumorales Interpretación del resultado

26 Porta con control

27 Inmunohistoquímica Morfología Control externo Control interno

28 Inmunohistoquímica Morfología Bajo condiciones inapropiadas cualquier anticuerpo puede dar resultados aparentemente positivos en cualquier tejido

29 - Niño de 9 años - Sin antecedentes patológicos - Dolor abdominal - Masa abdominal - Tumoración gástrica

30 CD20 MPX

31 Inmunohistoquímica Morfología Selección de un panel de ac. primarios Evaluación de los controles int. y ext. Identificación de las células tumorales Interpretación del resultado

32 Células tumorales Se detecta:.. No se detecta:. Células acompañantes Se detecta: No se detecta:

33 - Varón de38 años - Astenia anorexia y pérdida de peso - No adenopatías - Nódulos pulmonares bilaterales de 1 a 20 mm de Ø - Sospecha de linfoma T pulmonar. Se remite muestra para estudio del reordenamiento del gen que codifica el TcR

35 CD20 CD3

36 CD79a

37 Técnicas de diagnóstico Morfología Histología Inmunofenotipo Genética FISH PCR Inmunohistoquímica Citometría de flujo

38 Criterios de clasificación Morfológicos Inmunofenotípicos Genéticos Clínicos

39 Técnicas de diagnóstico Morfología Histología Inmunofenotipo Genética FISH PCR Inmunohistoquímica Citometría de flujo

41 Morfología FISH Improntas o extendidos iicitológicos Secciones de tejido incluido iien parafina

42 Morfología FISH Sondas Detección de fusiones ( dual-color, dual-fusion ) Detección de roturas ( split, break-apart )

43 Morfología FISH Sondas Detección de fusiones ( dual-fusion ) Detección de roturas ( split, break-apart )

44 A A B B

45 A B A B A B

46 A A B B

47 BCL-2 IgH

48 A A X X B B

49 A A A B B

50 A A B B

51 BCL-2 IgH

52 FISH: detección Morfología de fusiones Ventajas Proporciona información sobre i los dos genes implicados en la iiiiiiiiiitranslocación Inconvenientes Dificil de interpretar

53 Morfología FISH Sondas Detección de fusiones ( dual-fusion ) Detección de roturas ( split, break-apart )

54 A A B B

55 A A B B

56 FISH: detección Morfología de roturas Ventajas Facil de interpretar Inconvenientes iiiiiiisolo nos proporciona información iiiiiiisobre uno de los genes implicados iiiiiiien la translocación

57 Técnicas de diagnóstico Morfología Histología Inmunofenotipo Genética FISH PCR Inmunohistoquímica Citometría de flujo

58 Morfología PCR Detección de translocaciones Detección de clonalidad

59 A B A B A B

60 B B

61 Morfología PCR Un resultado positivo tiene mucho más valor que un resultado negativo

62 Morfología PCR t (14;18) en Linfomas Foliculares Regiones estudiadas MBR MBR+3 MBR MBR+mcr Falsos negativos % 58% 55% 48% MBR+mcr+3 MBR 42%

63 Morfología PCR MBR mcr 3 MBR

64 Morfología PCR Detección de translocaciones Detección de clonalidad

65 Org. linfoides primarios Reordenamiento Ig Sangre Org linfoides secundarios Hipermutación Ig I Cambio isotipo B Reordenamiento TCR T CD4 Ag CD8 NK

68 pm

69 pm

70 Org. linfoides primarios Reordenamiento Ig Sangre Org linfoides secundarios Hipermutación Ig I Cambio isotipo B Reordenamiento TCR T CD4 Ag CD8 NK

72 Morfología PCR Un resultado positivo tiene mucho más valor que un resultado negativo

73 PCR Morfología Clonalidad en Linfomas Foliculares Regiones del gen IgH estudiadas FR3 FR2 FR1 FR2+FR3 FR1+FR3 FR1+FR2+FR3 Falsos negativos % 52% 33% 30% 21% 18% 18%

74 PCR Morfología IgH FR1 IgH FR3 IgH FR2 Cadenas ligeras kappa Cadenas ligeras lambda

75 FR1 FR2 FR3

76 Org. linfoides primarios Reordenamiento Ig Sangre Org linfoides secundarios Hipermutación Ig I Cambio isotipo B Reordenamiento TCR T CD4 Ag CD8 NK

77 PCR Morfología TcR Gamma TcR Beta TcR Delta

78 Morfología PCR Un resultado positivo tiene mucho más valor que un resultado negativo

81 Los estudios de clonalidad no deben utilizarse para establecer el linaje de un linfoma

82 - Mujer de 68 años - Desde hace 6 meses presenta en la mitad superior de la espalda un nódulo solitario de 2cm de Ø que no se halla ulcerado - No se detectan otras lesiones ni adenopatías

84 CD20

85 IgH TcR

86 Recapitulación y diagnóstico

87 Diagnóstico de una entidad reconocida por la OMS Linfoma de dificil clasificación Infiltración linfoide de significado incierto

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