LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA MÉDICA

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1 LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA MÉDICA DOCENTE : Dr. LUIS SALDARRIAGA FACULTAD DE MEDICINA HUMANA HIPÓLITO UNANUE ALUMNO : LÓPEZ DIESTRA JEFFERSON CURSO : MICROBIOLOGIA AÑO : TERCERO 2015

2 Fagocitosis Existen células capaces de ingerir y digerir muchos tipos de organismos que logran penetrar en el cuerpo, sin necesitar la ayuda inmunitaria específica del sistema linfoide. Los macrófagos y los fagocitos mononucleares participan fundamentalmente en el fenómeno de FAGOCITOSIS. Ciertas sustancias que facilitan la velocidad con que son fagocitados las bacterias y otros agentes infectantes son las OPSONINAS. I. Fagocitosis in vitro 2cc. Cándida Albicans. Depositar en lámina con una gota de ROJO CONGO INCUBAR A 37ºC POR 30 MIN; LUEGO CENTRIFUGAR Sacamos sólo la Capa leucocitaria 5 ml. Sangre con anticoagulante Wintrobe 1cc. RESULTADOS Observamos en el microscopio la fagocitosis muy lentamente del macrófago a la cándida albicans. Se observa la formación de fagosomas con vesículas en el fagocito las cuales contienen enzimas digestivas. 2

3 II. Fagocitosis in vivo Cándida Albicans vía intraperitoneal al ratón. Autopsia al ratón y hacer improntas de hígado y corazón. Colorear con Wright CÉLULAS DE KUPFER, ES UN MACRÓFAGO FAGOCITARIO Se observa la presencia de células fagocíticas y el recubrimiento del fagosoma por los pseudopos propios de estas células. RESULTADOS Se llevó el proceso de fagocitosis por las células del sistema inmune (principalmente por los macrófagos). Podemos observar cómo los macrófagos actúan en contra del Ag inoculándolo. 3

4 REACCIONES (ANTÍGENO-ANTICUERPO) Existen diferentes demostraciones de las reacciones antígeno-anticuerpo pero en esta práctica se analizarán las reacciones de PRECIPITACIÓN Y AGLUTINAMIENTO. I. Reacción de precipitación La inmunoprecipitación es el método más simple y directo para la demostración de la reacción antígeno-anticuerpo en el laboratorio. La reacción de precipitación ocurre cuando se combina un anticuerpo, por lo menos divalente, con un antígeno soluble y esto conlleva a la formación de agregados que precipitan. Se incuba a temperatura óptima para que se dé la reacción antígeno anticuerpo. En caso de que exista en la muestra el antígeno (microorganismo o sustancia) cuya presencia estamos testando, en algún o algunos de los tubos aparecerá un precipitado antígeno anticuerpo. Proteína C reactiva: Es un marcador de inflamación, infección activa o procesos malignos. Es un péptido de 5 subunidades idénticas, que se sintetiza en el hígado. Es la más usada de las reactantes de fase aguda. Esta normalmente en muy baja concentración aumenta rápidamente luego del estímulo. Aquí se hace la prueba PCR, Proteína C reactiva que se encuentra en un paciente que presenta cierto tipo de infección. Un tubo capilar fue sumergido dentro del suero anti PCR (anticuerpos para la proteína C reactiva), dejar que el líquido se eleve de 25 a 30 mm dentro del tubo capilar. Sin remover el dedo del extremo superior del tubo capilar, sumerja el capilar dentro del suero del paciente deje que un volumen igual del suero del paciente penetre al capilar. Invertir el tubo capilar varias veces para lograr la mezcla de los sueros, coloque el dedo en un extremo dejando un espacio de aire alrededor de 1 cm en el extremo opuesto. Insertar los tubos en la base de la plastilina. Coloque en la incubadora a 37º durante dos horas. 4

5 Si la proteína C reactiva está presente en el suero del paciente, un precipitado será percibido al cabo de 3 minutos y un informe cualitativo puede ser hecho en este tiempo. PRECIPITADO 1mm de precipitado 2mm de precipitado 3mm de precipitado 4mm de precipitado 5mm de precipitado 6mm de precipitado NEGATIVO Una cruz Dos cruces Tres cruces Cuatro cruces Cinco cruces Seis cruces o más RESULTADOS Ya que se han unido el anti PCR y el suero del paciente, se ha formado bandas de precipitación en la zona óptica. La presencia de la precipitación quiere decir que existe la formación de inmunocomplejos antígeno-anticuerpo. Según el cuadro de la guía practica se procedió a realizar la lectura de nuestro tubo capilar, se opone a la luz y gracias a la coloración se reconoce mucho mejor la presencia de inmunocomplejos. Es decir en el suero del paciente se encontraba la proteína C reactiva. En esta prueba la lectura sería de 3 cruces. II. Reacción de Aglutinación Bacteriana Antígenos febriles La fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, así como las paratifoideas causadas por Salmonella paratyphi A y B; y la causada por la Brucella, produce entre otros síntomas una marcada elevación de la temperatura. La infección por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser detectados con el antígeno específico. La prueba realizada en la práctica de laboratorio se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación macroscópica. 5

6 1. Salmonella typhi (Fiebre tifoidea) Es un bacteria que se transmite por medio de alimentos o agua contaminados con materia fecal y orina de personas portadoras. Resistente a bajas temperaturas. El antígeno O, fracción polisacárida del lipopolisacárido de la membrana externa de las Gram negativas. El antígeno H, fracción flagelar. 2. Salmonella paratyphi Fiebre paratifoidea A; enfermedad infecciosa intestinal, que se trasmite entre personas y a la mala higiene. Los síntomas son muy parecidos a los de la fiebre tifoidea pero menos grave y una duración muy corta. Fiebre paratifoidea B; enfermedad infecciosa intestinal, causada por la Salmonella schottmuellen. Se presenta como algo parecida a la fiebre tifoidea o a una gastroenteritis muy severa, o las dos a la vez. La vacuna de la fiebre tifoidea es eficaz para la paratifoidea B. 3. Brucella (Fiebre de Malta o Brucelosis) Bacteria que ataca a varias especies de mamíferos como puede ser los ganados bovinos, equino, porcino y otros; además del hombre. Existen muchos métodos comúnmente empleados para demostrar la aglutinación bacteriana. Uno de los más simples es la aglutinación microscópica en lámina de una suspensión de bacterias de SALMONELLA TIPHY con suero positivo (con anticuerpos anti-salmonella). A esta prueba se le denomina PRUEBA DE WIDAL. Un set de antígenos para aglutinación en lámina: Tifico O o somático, Tifico H o flagelado están tipificados para reconocer Salmonella, paratifico A, paratifico B y el Ag. de Brucellas. Van a conformar conglomerados que nosotros podremos observar. Agregar una gota de cada uno de los antígenos a cada uno de las gotas de los sueros problema de un mismo paciente, proceder del mismo modo con los otros sueros. Mezclar uniformemente con un mondadiente distinto para cada gota. Haga rotar suavemente la lámina durante 3-5 minutos. 6

7 RESULTADOS Cuando un antígeno reacciona con su anticuerpo específico se observa la formación de grumos o agregados de estas partículas, esto se conoce como aglutinación. En estas reacciones el determinante antigénico está sobre la superficie de una partícula o de una célula. Estas reacciones son más sensibles que las de precipitación para detectar pequeñas cantidades de anticuerpos, debido a que relativamente pocas moléculas de anticuerpo pueden unir efectivamente un gran número de partículas de antígeno en grumos gruesos macroscópicamente visibles. Cualitativamente: La aglutinación se observa por la aparición de grumos de tamaño variable, que tienden a agruparse en la periferia de la gota. Positivo: Aglutinación con el antígeno febril paratífico A. El paciente estuvo expuesto al antígeno paratífico A 7

8 HEMOAGLUTINACIóN DETERMINADA: GRUPO SANGUíNEO Para inyectar de una persona a otra, la sangre de donadores y receptores normales se clasifican en cuatro grupos principales, dependiendo del aglutinógeno. Los anticuerpos se fijan en los antígenos eritrocíticos para producir aglutinación de los eritrocitos. Por lo tanto los antígenos (Ag) y los anticuerpos (Ac) plasmáticos que producen la aglutinación se llama aglutininas. G r u p o s a n g u í n e o t i p o O. F a c t o r R h + RESULTADO La muestra inferior aglutinó porque en la superficie de los eritrocitos se tienes antígenos D y al agregar el antisuero D se observa aglutinación, porque hubo reacción. Lo que no sucedió con el anti A y anti B. Podemos afirmar que el grupo sanguíneo al que pertenece nuestro compañero es Grupo O Rh (+). 8

9 Las personas del grupo AB no producen anticuerpos, por lo tanto pueden recibir transfusiones de cualquiera de los otros cuatro grupos. Conocer el grupo sanguíneo es de vital importancia, ya que esta prueba nos permite conocer el tipo de sangre, importante para una transfusión sanguínea sin problemas. En el caso del tipo Rh para poder manejar los embarazos de padres Rh (+) y Rh (-) en la eritroblastosis fetal. Suero Anti-A Suero Anti-B Suero Rh (Anti-D) Grupo Sanguíneo positivo positivo positivo AB positivo positivo positivo negativo AB negativo positivo negativo positivo A positivo positivo negativo negativo A negativo negativo positivo positivo B positivo negativo positivo negativo B negativo negativo negativo positivo O positivo negativo negativo negativo O negativo 9

10 PODER BACTERICIDA DEL SUERO El suero normal fresco contiene sustancias capaces de destruir a los microorganismos. Se sabe que en parte esta actividad es debida a la presencia de anticuerpos normales, pero esta también la presencia de factores humorales. Por ejemplo el suero fresco no calentado contiene una sustancia conocida como complemento, el cual bajo ciertas condiciones juega un rol importante en la destrucción de los microorganismos. Esta sustancia puede ser destruida si el suero es primeramente calentado a 56º por 30. El propósito de esta práctica es demostrar los efectos combinados de las sustancias antes mencionadas sobre algunas bacterias patógenas comunes. Procedimiento - Valiéndose de la jeringa extraer 10ml de sangre venosa. Obtener el suero por centrifugación. - La mitad del suero obtenido llevarlo al baño de maría a 56º por 30, conservar la otra mitad. - Preparar 3 diluciones de caldo de cultivo con el microorganismo en sol. Salina estéril (1:10 4,1:10 5,1:10 6 ). - Repartir soluciones obtenidas (A y B) 0.5ml de c/u en tres juegos de tres tubos. - A los tres primeros tubos añadirles 0.5ml normal, a los siguientes tubos añadirles 0.5 ml de suero calentado 56º y a los tres últimos añadirles 0.5ml de sol salina (control). - Mezclar el contenido de los tubos e incubar a baño maría por una hora a 37º. - Después de incubados verter el contenido de cada tubo en petris estériles marcándolos con lápiz de cera. - Añadir 10ml de agar fundido a 45º en cada Petri y agitar suavemente con el propósito de distribuir en forma pareja los microorganismos en el medio. - Después que el agar se halla solidificado, incubar todas las placas en forma invertida por 24 horas. REALIZACION DEL EXPERIMENTO: - SUERO Tº AMBIENTE. -SUERO CALENTADO 56ºx30min. 10

11 Cepa de Escherichia coli. DILUCIONES CONCENTRACION 1 cc cepa + 9cc solución salina (ss) 1/10 1 cc cc solución salina (ss) 1/ cc cc solución salina (ss) 1/ cc cc solución salina (ss) 1/10 4 OBTENIENDOSE DE ESTA MANERA DILUCIONES DE 10-4, Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 C=10-4 C=10-4 C=10-4 Suero normal (SN) Suero calentado Solución salina Incubar 1hr a 37ºC REALIZANDO DE LA MISMA FORMA PARA LAS DEMÁS CONCENTRACIONES 11

12 INOCULACION DE LAS CONCENTRACIONES EN PLACA PETRI 10-4 (SN) 10-5 (SN) 10-6 (SN) 10-4 (SC) 10-5 (SC) 10-6 (SC) 10-4 (SS) 10-5 (SS) 10-6 (SS) AGREGAR AGAR NUTRITIVO FUNDIDO O LICUADO A 45ºC. NOTA No se debe voltear la placa Petri al momento de inocular, debido a su estado líquido del agar del agar. Realizar movimientos rotatorios para homogenizar el agar. Finalmente después solidificar (aproximadamente10 minutos) invertir la placa para llevar a incubadora a 37ºx 1hr. La finalidad es de propiciar condiciones de temperatura adecuada para favorecer el crecimiento bacteriano. Se espera obtener un crecimiento adecuado, escaso o nulo de colonias de bacterias (en numero y tamaño), lo cual dependerá de la presencia del complemento que lo proporciona el suero(suero a temperatura ambiente tiene poder bactericida, suero calentado no lo posee por la desnaturalización del complemento). El suero salino sirve como control creciendo en proporción a su concentración. RESULTADOS SUERO NORMAL: El crecimiento bacteriano es inhibido por el complemento. Existiendo mayor inhibición en la placa de menor concentración de E. coli. SUERO CALENTADO 10-4,10-5,10-6 RESPECTIVAMENTE: Considerando la inactivación del complemento se observa un crecimiento de acuerdo a la concentración. SOLUCION SALINA 10-4, 10-5, 10-6 RESPECTIVAMENTE: Considerando la ausencia de suero (complemento), el crecimiento se realiza en las 3 placas. 12

13 CUESTIONARIO 1.- Cuáles son los factores del complemento responsables de la citólisis? Las proteínas del complemento c5b6789 son las responsables para formar el complemento de ataque a nivel de membrana, conllevando a una lisis bacteriana. 2.- Qué tipo de anticuerpos han actuado en el experimento? Inmunoglobulina M: porque son las primeras en actuar ante una reacción inmune. Inmunoglobulina G: porque se encuentra en abundancia en el torrente sanguíneo. 3.- Porque el agar fundido en el momento de añadido a la placa Petri debe estar a una temperatura de 45º? Para su mejor desanimación de la cepa por toda la placa Petri y porque de esta manera se proporciona condiciones favorables de crecimiento, recordemos que la E. coli suele crecer a temperaturas de 8 a 47ºc. 4.- Qué sucederá si el paso Nº6 del experimento incubamos por 24 hrs? Se perdería la activación del sistema de complemento, ya que el complemento es de naturaleza proteica y al propiciar demasía temperatura y en exceso de tiempo provocaríamos la desnaturalización de dichas proteínas perdiendo su capacidad bactericida del suero. 5.-Si un animal de experimentación inoculamos por vía endovenosa 0.5ml.de cada una de las diluciones preparadas de E. coli. Cómo podría comportarse en cada caso? Si inoculamos preparado de E. coli con suero normal: la respuesta inmune del animal será responder con su sistema de complemento agregado al sistema de complemento aun presente en el suero inoculado, es decir se podría decir que se tendrá una adecuada respuesta de inmunidad. Si inoculamos preparado de E. coli con suero calentado: aquí solo la respuesta inmune seria gracias al sistema de complemento del animal, mas no del suero inoculado, debido a que este suero por haber sido calentado perdió su activación de su sistema de complemento. Si inoculamos preparado de E. coli con suero salina: de igual manera la respuesta inmune solo será dada por el sistema de complemento del animal, recordemos que la solución salina es usado como control para la visualización del experimento, no contiene complemento alguno. 13

14 6.-Despues de una proctosigmoidoscopia, una extracción dentaria o una debridacion de abscesos, se produce pasaje de bacterias al torrente circulatorio. Por qué no se produce septicemia? Debido a que el cuerpo humano posee sistemas de defensa ante la agresión de cualquier agente patógeno, previniéndonos infecciones y enfermedades. Dicha defensa está dada por la formación de inmunoglobulinas (por los linfocitos B) o sistema del complemento dado por el sistema celular (linfocitos t). 14

15 PRUEBA DE FIJACIÓN DE COMPLEMENTO 15

16 El sistema de complemento consta de 3 vías: la vía clásica, la vía alternativa y la vía de las lecitinas. En este experimento trabajaremos con la vía clásica, ya que es la que se une a los anticuerpos y pertenece a la inmunidad adaptativa. Las otras vías pertenecen a las vías de inmunidad innata. FUNDAMENTO Esencialmente esta prueba se realiza para detectar el Ac o Ag presente en una enfermedad. En esta práctica la pieza fundamental es el Sistema del Complemento (conjunto de proteínas plasmáticas, cuyas funciones son potenciar la respuesta inflamatoria, facilitar la fagocitosis y dirigir la lisis de células incluyendo la apoptosis.) El fundamento de esta práctica se basa en la fijación del complemento en presencia de una reacción Ag-Ac, es decir la formación de Inmunocomplejos. Se sabe que en la mayoría de las reacciones Ag-Ac, el complemento se une al complejo y es usado o fijado. Este proceso puede usarse para detectar cantidades muy pequeñas de Anticuerpos. Se hace en dos etapas: la fijación del C y el revelado de la reacción con el sistema hemolítico. La primera no es notorio ya que es un proceso bioquímico que no presenta grandes cambios físicos. La segunda etapa nos indicará si hay o no fijación del complemento. La presencia o ausencia de hemólisis (lisis del GR que teñirá de rojo todo el contenido del tubo) nos indicará si hubo fijación del complemento. Observa la presencia o ausencia de hemólisis en cada uno de los tubos los controles deben dar la siguiente lectura: Control positivo Control negativo Control del antígeno: Control del Sistema Hemolítico: No hemólisis Hemólisis No hemólisis No hemólisis PROCEDIMIENTO Utilizaremos dos sistemas: Se introduce una cierta cantidad de Ag específico de aquellos Ac que se pretende detectar. Si existe presencia del Ac en el suero problema, se unirán al Ag y se forman Inmunocomplejos. Seguidamente se añade el complemento a la mezcla anterior. Sí hay IC, el complemento se fijara a ellos. Si no hay presencia de IC, el complemento quedará libre. Hasta este punto no se observa algún cambio que nos ayude a determinar si hay o no la fijación del C. 16

17 Luego se añade el sistema revelador, este está constituido por una mezcla indicadora (GR (c): eritrocitos de carnero y una cantidad de AntiGR(c): Ac antieritrocitos de cordero), este sistema sólo actuará si el complemento está libre. RESULTADOS PRUEBA POSITIVA 1 Sistema: SP: Ac + Ag C Se fija el complemento. PRUEBA NEGATIVA 1 Sistema: SP: Ac + Ag C No se fija el complemento. 2 Sistema: GR(c) + AntiGR(c) NO HEMÓLISIS 2 Sistema: GR(c) + AntiGR(c) + C SÍ HEMÓLISIS PRUEBA POSITIVA: No hay hemolisis porque el complemento se fijó en la reacción inicial. Indica que hay Ac en el suero problema, lo cual manifiesta que hay o hubo la presencia de enfermedad. PRUEBA NEGATIVA: Hay hemolisis porque el complemento quedó libre en la reacción inicial. Indica la ausencia de Ac en el suero problema. No hay enfermedad, ya que el Ac no está presente. 17

18 *SUERO PROBLEMA Se evidencia sedimento de eritrocito, no hubo hemólisis; por lo tanto hubo acción del sistema de complemento y por lo tanto ya no hay complemento, ya que en el primer sistema se fijó, por eso la ausencia de complemento. *CONTROL POSITIVO Tampoco hay indicios de hemólisis, tiene sobrenadante. Principalmente se precipitó. *CONTROL NEGATIVO Se observa una coloración roja en el tubo, lo que nos indica hemólisis realizada por el complemento libre que quedó del primer sistema y que al agregarle el indicador ha hemolisado los eritrocitos. *CONTROL ANTÍGENO No se evidencia hemólisis ya que estuvo actuando el sistema de complemento. *CONTROL HEMOLÍTICO Se evidencia eritrocitos sedimentados. No hubo hemólisis. 18

19 TEST ANTIESTREPTOLISINA O (ASO) NEUTRALIZACION: DE LA ESTREPTOLISINA O Una de las funciones inmunitarias más importantes mediadas por anticuerpos específicos es la neutralización de toxina. Estos anticuerpos específicos llamados Antitoxinas tienen el papel principal la inmunidad adquirida a enfermedades graves como difteria, tétanos. etc. Casi todas las cepas de estreptococo grupo A producen dos factores hemolíticos: estreptolisinas O y S (exotoxinas). Cuando ocurre una infección por estreptococos de este grupo, la estreptolisina O, no asi la S, estimula el desarrollo de un anticuerpo específico: la antiestreptolisina O, dicho anticuerpo bloquea la hemólisis por estreptolisina O. Este fenómeno proporciona las bases para la determinación cuantitativa del anticuerpo. La determinación de los títulos séricos de antiestreptolisina O tiene gran importancia por su valor diagnóstico en paciente que tienen o han tenido recientemente una infección por estreptococo hemolítico del grupo A, sobre todo por las secuelas que estas infecciones incluyen: fiebre, reumática, glomerulonefritis, eritema nodoso. Por la frecuencia de infecciones estreptocócicas se encuentran títulos bajos de Antiestreptolisina O en casi todos los individuos. Se considera títulos normales de Antiestreptolisina O de 40 a 160 Unidades Todd. La Estreptolisina O en su forma reducida, agregada a Glóbulos rojos, producen hemólisis, si el suero de un paciente posee Antiestreptolisina O al añadirse la Estreptolisina se produce una reacción Antígeno- Anticuerpo y el anticuerpo neutraliza al antígeno total o parcialmente según el nivel de anticuerpo. Recordemos que los estreptococos son bacterias muy comunes en el medio ambiente, entonces es normal encontrar cierta cantidad de ASO en un individuo aparentemente sano. FUNDAMENTO DEL TEST ANTIESTREPTOLISINA O En el suero del paciente enfermo se encuentran los anticuerpos circulantes de tipo antiestreptollina en el cual al unirse a un antígeno de una fase sólida (látex) va a producir una reacción complejo Ag-Ab que se va a traducir por la presencia de una aglutinación del látex. En caso de un paciente negativo a este anticuerpo no ocurrirá la reacción de aglutinación. 19

20 Neutralización de la estreptolisina Las funciones inmunitarias más importantes por los anticuerpos es la neutralización de la toxinas Entonces, cuando ocurre una infección por estreptococo (bacteria Gram positiva) es producida por la estreptolisina (Antígeno tipo de hemolisina). Dos tipos de estreptolisina S : Mínimo poder antigénico O : Máximo poder antigénico Estreptolisina O, estimula el desarrolla un anticuerpo específico: Antiestreptolisina O Ubicación: Suero Realiza la determinación CUANTITATIVA del anticuerpo. NOTA: LA ESTREPTOLISINA O tiene un gran poder hemolítico, entonces: Si existe una cantidad de toxina mucho mayor que la de la ASO, entonces se producirá la hemólisis Si existe más cantidad de ASO que de la toxina, entonces no habrá hemólisis. Se prepararán 7 tubos de ensayo, en cada tubo habrá diluciones sucesivas de ASO presentes en el suero del paciente problema y además se le agregará una concentración constante de estreptolisina O. Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 Se irá disminuyendo la concentración de ASO en las diluciones y se mantendrá constante es la cantidad de la exotoxina que aplicaremos a los tubos. 20

21 RESULTADOS Se considera títulos normales de ASO entre 40 y 160 unidades Todd (unidad de medida). Se observa que en los tres primeros tubos hay sedimentación de los glóbulos rojos, lo que indica que no ha habido acción hemolítica de la estreptolisina, por lo tanto concluimos que la cantidad de ASO excede a la de la exotoxina. En el tubo 4 se observa ya una ligera hemólisis, lo que indica que la toxina está ejerciendo su acción, entonces concluimos que en este tubo de ensayo la cantidad de ASO es menor que la de la exotoxina. En los tubos siguientes (5, 6 y 7) se observa ya una hemólisis más marcada, de lo que podemos deducir que la cantidad de ASO es mucho menor que la de la exotoxina. Se concluye que a partir de 1/320 probablemente halla enfermedad presente, mientras va aumentando la dilución y hay presencia de hemolisis quiere decir hay mas estreptolisina, que puede significar el riego potencial de una enfermedad. 21

22 CUESTIONARIO 1. Qué función tienen los glóbulos rojos en esta prueba? Nos sirve como un indicador, debido a que los estreptococos del B- hemolíticos del grupo A forman exotoxinas con propiedad de destrucción de glóbulos rojos (hemolisis), indicándonos que si existe hemolisis entonces hay presencia de estos antígenos. 2. Qué otras pruebas de laboratorio se conocen para el diagnóstico de fiebre reumática? Serología estreptocócica (dosificación de antiestreptolisina O). Velocidad de sedimentación globular. Determinación de PCR. Hemograma completo. Ácido úrico. 3. Explique por qué se inhibe la hemólisis en la determinación de la ASO. Debido a que hemos agregado poco o un límite de estreptolisinas (antígenos) a un determinado número de anticuerpos (antiestreptolisinas), recordar que hasta una dilución de 1/200 no habrá hemolisis, si sobre agregamos más antígenos este sobrante ocasionará hemolisis. 22

23 PRUEBA DE MANTOUX (HIPERSENSIBILIDAD TARDÍA) Hipersensibilidad tipo IV, Esta mediada por efectores celulares y no humorales como hemos visto hasta ahora, los linfocitos T sensibilizados, también se clasifica como una reacción clásica retardada, que tardan más de 12 horas en manifestarse. La forma más importante de este tipo de respuesta inflamatoria desde el punto de vista clínico es la formación de un granuloma. En la prueba se muestra una intradermorreacción en la que se usa un filtrado de cultivo de bacilos tuberculoso conocido como derivado proteico purificado PPD. Si existen linfocitos sensibilizados a este antígeno dan lugar a la aparición de pápula y eritema en la zona inyectada en un lapso de 24 horas a 48 horas. La prueba de Mantoux puede mostrar si la persona ha sido infectada con las bacterias causantes de la tuberculosis. PROCEDIMIENTO Limpiar una zona de la piel antebrazo y aplicar con la jeringa 0.1 ml de PPD (5UI) por vía intradérmica. Se introduce la aguja en la epidermis, con el bisel girado hacia arriba, intentando que la punta quede intradérmica y no subcutánea, en dirección de la zona distal a la proximal del antebrazo. La inyección del contenido debe ser lenta y cuidadosa para evitar la salida de líquido al exterior, consiguiendo una ampolla del tamaño similar a una lenteja, de bordes definidos, pálida y con aspecto de piel de naranja, que se absorberá en unos minutos. Lectura Después de 24 a 48 horas de la aplicación se efectúa la lectura de la respuesta inflamatoria producida la cual estará en relación con la mayor o menor sensibilidad del organismo a este tipo de antígeno. 23

24 Tipo de Respuesta Eritema, edema y necrosis central Positivo ++++ Eritema acentuado y edema de más de 20 mm Positivo +++ Eritema y edema de 10 a20 mm Positivo ++ Eritema y edema de 5 a10 mm Positivo + Leve eritema e indicios de edema de 5mm o menos Solo se aprecia el lugar de inoculación del agua Dudoso Negativo Negativo: No hay infección TBC Realización de la prueba a una etapa muy temprana de la infección. Sistema de inmunodeficiencia es muy bajo. Positivo: Presenta la infección bacteriana. Estuvo expuesto a la bacteria anteriormente. Resultados En la piel del antebrazo de nuestra compañera, un punto rojo (eritema) menor de 2mm de diámetro sin presencia de edema o pápula, lugar de la punción intradérmica. No hubo crecimiento de la pápula, esto quiere decir que los resultados a la prueba de tuberculina fueron negativos ; significando que esta persona no tuvo ningún contacto,no fue expuesta ni fue infectada con las bacterias que causan la tuberculosis. 24