FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN DEPARTAMENTO DE QUIMICA BIORGÁNICA

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1 FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN DEPARTAMENTO DE QUIMICA BIORGÁNICA PRÁCTICA 6: PRUEBAS GENERALES PARA LÍPIDOS 1. INTRODUCCION Los lípidos son compuestos insolubles en el agua pero solubles en solventes orgánicos tales como acetona, alcohol, cloroformo, benceno, etc. Generalmente se encuentran distribuidos ampliamente en la naturaleza en los seres vivos. Varían en su solubilidad, propiedad que es empleada para su extracción y purificación de los materiales biológicos, la extracción de estos tejidos en consideración se constituye como la primera etapa para su estudio, sin embargo, este proceso se ve afectado porque algunas veces los lípidos están unidos a proteínas, otros a polisacáridos de los tejidos, formando complejos. Para romper estos complejos se emplean en general condiciones que desnaturalicen la proteína o que rompan dicha asociación. La Extracción de lípidos con solventes orgánicos, acarrea material no lipídico por interacciones iónicas, en general. Uno de los grupos de lípidos son los ácidos grasos, que pueden ser saturados o pueden ser insaturados, estos últimos sufren una auto - oxidación rápida, por lo cual se recomienda su extracción en atmosfera de nitrógeno y el uso de solventes libres de peróxidos. La extracción de lípidos a partir de tejidos húmedos produce emulsiones por lo que es conveniente deshidratar previamente. Por demás existe el riesgo de que se liberen enzimas hidrolíticas que pueden causar degradación. No existe un método general que supere estas dificultades. Sin embargo, la acetona es un solvente útil ya que proporciona un método rápido y relativamente suave de deshidratación de tejido, al mismo tiempo que extrae grasa, esteroles y lípidos simples. Los lípidos complejos son relativamente insolubles en acetona por lo que se requiere de extracciones adicionales con otros solventes, tales como éter y hexano que permiten la extracción de glicerofosfátidos o de alcoholes que permiten la extracción de esfingolipidos. 2. OBJETIVOS 2.1 Determinar la solubilidad de diferentes tipos de lípidos frente a varios solventes de distinta polaridad y observar la formación de emulsiones en algunos casos. 2.2 Comprobar la solubilidad de varios productos grasos comerciales. 2.3 Comprobar las propiedades de algunos lípidos.

2 3. CONSULTAS PRELIMINARES 3.1 Dibuje la estructura de los lípidos usados en la práctica. 3.2 Clasifique los anteriores lípidos como grasas o ácidos grasos saturados e insaturados 3.3 Qué diferencia hay entre un triglicérido y un fosfolípido? 4. MATERIALES MATERIALES Pipetas graduadas de 5 ml 2 Pipeta graduada de 1 ml 1 Vasos de precipitado de 250 ml 2 Vaso de precipitado de 1 Varilla de vidrio 1 Tubos de ensayo 20 Gradilla 1 Pinza de madera 1 Goteros 3 Propipeta 1 Termómetro 1 Frasco lavador 1 5. REACTIVOS SUSTANCIAS Glicerol Acetona Alcohol Etílico Éter Dietilico Cloroformo CHCI 3 20 Etanol neutro 400 Agua de Bromo 10 Solución diluida de Yodo en cloroformo 10 ml Aceite de Oliva, de coco, vegetal, Manteca vegetal, Cebo de res y mantequilla 30 ml o 10 g Ácido Butírico 5 g Ácido Palmítico 5 g 20 ml Lecitina comercial 20 ml 3.5 g

3 6. EQUIPOS EQUIPOS Plancha de calentamiento 1 Vortex (agitador mecánico) 1 7. PROCEDIMIENTO 7.1 Solubilidad de lípidos: los grupos principales de lípidos tienen características de solubilidad diferentes, propiedad que se usa para la extracción y purificación de los materiales biológicos. La mayoría de los lípidos son solubles en etanol del 95 %, pero si se les agrega agua forman una emulsión de gotas pequeñas, dando a la suspensión una apariencia lechosa característica Montaje de trabajo: Se examina la solubilidad de lípidos como: aceite vegetal, una grasa, colesterol, lecitina, ácido oleico y ácido palmítico. Utilizar 0.5 ml (10 gotas) para las muestras liquidas y 0.05 g para las muestras sólidas. Se toman las muestras, se rotulan los tubos y a cada una de ellas se le determina la solubilidad en los siguientes solventes: Éter etílico, Acetona y Glicerol. Emplear 1.5 ml (30 gotas) de solvente por muestra. Describir los resultados. En dos tubos más adicionar 1.5 ml de agua y agregar a cada uno 1 gota de aceite vegetal, mezclar fuerte y observar la solubilidad. A uno de ellos adicionar 0.1 g de lecitina, mezclar fuerte por 3 minutos y comparar la solubilidad y el tipo de solución que se forma. 7.2 Prueba de insaturación de las grasas: Los halógenos se unen a los dobles enlaces de los ácidos grasos insaturados formando compuestos de adición; para ello se utiliza solución yodada o agua de bromo, soluciones que son coloreadas, la decoloración que ellas tengan al adicionase a la grasa indica la presencia de los dobles enlaces. La no decoloración muestra que la grasa es saturada. Montaje de trabajo: Tomar 4 gotas de las siguientes muestras: aceite vegetal, ácido oleico, tomar 0,2 g de colesterol y de mantequilla y cada una depositarla en un tubo de ensayo. Agregar a cada una 2 ml de cloroformo, mezclar fuerte. Posteriormente, adicionar a cada tubo 2 gotas de solución yodada, mezclar fuerte. Prepare un blanco de referencia con 2 ml de cloroformo y 2 gotas de solución yodada. Observar los cambios de coloración en cada uno de los tubos y el tiempo de aparición de los mismos. A los 12 minutos mirar las muestras y anotar los colores de cada una de ellas. Repetir los pasos anteriores, empleando 2 gotas de agua de bromo en lugar de solución yodada, con las mismas muestras. El agua de bromo se agrega gota a gota, mezclar bien después de cada adición de bromo. Prepare un blanco de referencia con 2 ml de cloroformo y 2 gotas de agua de bromo. Observar los cambios de coloración en cada tubo.

4 8. OBSERVACIONES Y RESULTADOS. Pruebas de solubilidad: registrar en la tabla 1 la solubilidad relativa de los diferentes lípidos frente a los solventes utilizados. Marque así: insoluble (-) poco soluble (+), soluble (++), muy soluble (+++). Describir el efecto que tiene la lecitina en la solubilidad de grasas o aceites, como se llama la solución que se forma? Prueba de insaturación de grasas: registrar en la tabla 2 la capacidad de los diferentes glicéridos ensayados para decolorar tanto al yodo como al bromo. Formular las conclusiones pertinentes con respecto a la insaturación relativa de las muestras. Escribir las reacciones de los lípidos ensayados con la solución yodada y el agua de bromo TABLA 1. Registro de pruebas solubilidad. LÍPIDO Éter etílico Acetona Glicerol Agua Agua + lecitina Aceite vegetal Aceite de coco Aceite de oliva Manteca vegetal Cebo de res Mantequilla Ácido Palmítico Lecitina comercial TABLA 2. Prueba de insaturación de las grasas LÍPIDO Solución yodada Agua de bromo Blanco Aceite vegetal Mantequilla

5 OBSERVACIONES: 9. preguntas complementarias. 9.1 Qué alteraciones produce el enranciamiento en un alimento? 9.2 Cuál es el mecanismo químico de enranciamiento o formación de peróxido con ácidos grasos. 9.3 Que aditivos se le pone a los aceites vegetales para evitar su enranciamiento? 10. RECUPERACIÓN, DESACTIVACIÓN Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE LOS RESIDUOS QUIMICOS RECUPERACIÓN. No aplica DESACTIVACIÓN. No aplica ALMACENAMIENTO TEMPORAL. Los residuos generados en el procedimiento 7.1 se deben depositar en el recipiente para solventes orgánicos; los de las pruebas 7.2 y 7.3 en el recipiente para ácidos y bases y los residuos de la prueba 7.4 deben depositarse en el recipiente para hidrocarburos halogenados. 11. BIBLIOGRAFIA LOZANO. J.A. Y TULEDA. J. "Prácticas de Bioquímica 1era. Ed. Síntesis, S. A Madrid ISBN PLUMMER. D. T. Bioquímica Practica 2da. Ed. Mc Graw -Hill Latinoamericana, Bogotá, ISBN: