Preparación de Azul de Metileno 131 l
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- Soledad Muñoz Juárez
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1 CNEA 371 Preparación de Azul de Metileno 131 l AG ISSN G. N. B. de Salas A. E. A. Mitta Comisión Nacional de Energía Atómica República Argentina Buenos Aires, 1974
2 INIS CLASSIFICATION AND KEYWORDS B13 LABELLED C.OMPOUNDS IODINE 131 METHYLENÉ BLUE CHEMICAL PREPARATION IMPURITIES LABELLING NUCLEAR MEDICINE
3 COMISIÓN NACIONAL DE ENERGÍA ATÓMICA DEPENDIENTE DE LA PRESIDENCIA DE LA NACIÓN PREPARACIÓN DE AZUL DE METILENO l t f l t G»N. Bianco de Salas y A.E.A. Micta RESUMEN Se describe la preparación de azul de metileno (cloruro de 3.7 dimetilaminofenazotionio) marcado con radioyodo con un rendimiento radioquímico del 63-%. Se ensayaron diferentes métodos de purificación del producto marcado, llegándose a obtener una pureza radioquímica del 99%. También se estudiaron las condiciones de estabilidad del mismo. SUMMARY Preparation of methylene blue 131 The labelling of methylene blue (3,7 dimethylamino phenazotíonio chloride) with radioiodine with a radiochemical yield of 63% is described. Different methods of purification for the labelled product were assayed, and the radiochemical purity obtained was 99 %. The stability conditions for the conv pound were al so studied.
4 INTRODUCCIÓN La obtención de un compuesto marcado para ser utilizado en scanning de paratiroides, es aún un problema sin solución, Brien yfteaveny (1) en 1968 sugirieron el empleo de azul de toluidina marcado con radioyodo, obteniéndose un rendimiento radioquímico de 10-35%, posteriormente el rendimiento fue mejorado por Czemiak y Boruchowski (2), finalmente en 1972 se describió un método que permite alcanzar un rendimiento radioquímico del 98% (3). No obstante, su empleo en humanos para scanning de paratiroides no ha dado buen resultado. En este trabajo, estudiamos la incorporación del radioyodo al azul de metileno, para ser ensayado con igual fin, ya que este colorante ha sido empleado por los cirujanos para identificar intra operatoriamente la paratiroides, teniendo en esta aplicación la ventaja sobre el azul de toluidina para igual uso, de no tener la toxicidad de este último. En la bibliografía no encontramos métodos de marcación de este colorante con radioyodo y dada la relación estructural entre el azul de metileno y azul de toluidina, ambos derivados de las tiazinas, ensayamos la marcación de azul de metileno con radioyodo en forma similar al azul de toluidina (3) obteniéndose un rendimiento radioquímico de 63 % (valor pormedio). MÉTODO DE MARCACIÓN Se coloca 1 mi de azul de metileno (lmg/ml) en un tubo provisto con tapón esmerilado y se añaden 50 il de Cloramina T recientemente preparada (1 /ig/vl) y mci de 131 INa en A libre de portador y reductor. Se ajusta el ph a 5J0-5.5 con un microelectrodo de vidrio, se tapa el tubo y deja 30 minutos a temperatura y luz ambiente. Se detiene la reacción mediante el agregado de una gotas de S 2 0? Na M. Rendimiento radioquímico 6i% MÉTODO DE PURIFICACIÓN Se debió recurrir a la cromatografía en papel Whatman N 9 1, utilizando la mezcla indicada por Lederer y Lederer(4) EtOH : NH? : H 2 0 (8:0,4: 1,6) en cromatografía descendente, durante 4 horas. La detección de los productos marcados se hizo por radiocromatografía mediante un radiocromatógrafo
5 - 5- Packard, modelo La evaluación de los picos sé efectuó por planimetría y pesada. Se separaron tres fracciones del producto marcado; Rf colorante: 0.10, 0,34 y 0.92 como se ve en el Gráfico N 2 1. I 3 I Rf: I: 0,70 Con otra relación de solventes en iguales condiciones, se identifica una sola mancha correspondiente al producto. Solvente: EtOH: NH 3 : H 2 0 (4: 2:4) Tiempo de desarrollo: 2.30 horas Rf colorante: 0.10 Rf: : 0.90 La evaluación se efectuó igual que en el caso anterior. ELUCIÓN Una vez efectuada la corrida se corta la zona correspondiente al colorante y se eluye en cámara cerrada con H 2 O: EtOH (9:1) durante 6-8 horas. Se recupera más del 90 % con una pureza radioquímica superior al 99 %. Se esteriliza pasando por milliporo de 0.45 /. El control de esterilidad y pirógenos se efectuó de acuerdo a lo indicado por el Manual de Controles Radiofannacéuticos (5). Las mediciones de actividad se efectuaron en una cámara de ionización Mediac, modelo VARIABLES ESTUDIADAS Se estudió el efecto de distintas variables: ph, tiempo, temperatura, masa e iluminación sobre el rendimiento de reacción. Efecto del ph Se hicieron series de ensayos a distintos ph y sin variar los demás parámetros se evaluó el porcentaje de marcación.
6 ph Rendimiento % de marcación Influencia del tiempo de reacción Ajustando el ph entre 5.0 y 5.5 y dejando fijos los otros parámetros, se hicieron ensayos a diferentes tiempos de reacción. Tiempo R % (minutos) de marcación EFECTO DE MASA Una variación en la masa no mostró influencia; la concentración utilizada permite una adecuada actividad específica según lo requerido. EFECTO DE LA TEMPERATURA Se probó a 50 C y a 100 C, no mejorando el rendimiento radioquímico; por lo tanto, indicamos efectuar la marcación a temperatura ambiente.
7 EFECTO DE LA ILUMINACIÓN Se hicieron intentos colocando una lámpara incandescente de 200 W próxima al tubo de reacción e iluminación con luz ultravioleta. En ambos casos disminuyó el rendimiento de marcación. MÉTODOS DE CONTROL Se controló por cromatografía en papel, empleando las mezclas de solventes indicadas en la parte de purificación. Por radiocromatografía se determinó la pureza del colorante, que resultó en todos los casos superior al 99%. ESTABILIDAD Se tomaron muestras con diferentes actividades específicas (0.3 y 6 mci/mg). De ambas muestras se guardaron alícuotas en la heladera y en estufe a 37 C. Las guardadas en estufa a 37 C, liberaron algo más del 5% de ioduro libre a las 48 horas. Las conservadas en heladera, contenían al cabo de 7 días, un porcentaje de radioiodo libre inferior al 5%, valor éste aceptado por el Manual de Controles Radiofarmacéuticos (5).
8 GRÁFICO N> 1 BIBLIOGRAFÍA 1) T.G. BRIEN and V. KEAVENY. Int. J. of Appl. Rad. and Isotopes 19 (1968) 821, ) P. CZERNIAK and S. BORUCHOWSKI. J. Lab. Comp. 7 (1971) ) G.N.B. de SALAS y A.E.A. MITTA. Informe N 9?57 CNEA (1973). 4) E. LEDERER y M. LEDERER "Cromatografía" Editorial El Ateneo ) Manual de Controles Radiofarmacéuticos CNEA y JEN 1972.
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