de PETRI en VIÑA. PROPUESTA de una POSIBLE SOLUCIÓN

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1 PROTECCIÓN DEL VIÑEDO ESTUDIO sobre la ENFERMEDAD de PETRI en VIÑA. PROPUESTA de una POSIBLE SOLUCIÓN José Antonio DEL RÍO CONESA 1 ; Pedro GÓMEZ LÓPEZ 1 ; Ana GONZÁLEZ BAIDEZ 1 ; Ana María ORTUÑO TOMÁS 1 ; Víctor FRÍAS LUNA 2 (1) Dpto. Biología Vegetal (Fisiología Vegetal). Facultad de Biología. Universidad de Murcia. (2) Agrométodos S.A. Pozuelo de Alarcón, Madrid. Resumen El decaimiento de plantas jóvenes de viña, o enfermedad de Petri, es una enfermedad compleja, causada por diferentes hongos, siendo responsable de importantes pérdidas en nuevas plantaciones. En el presente trabajo se ha realizado un exhaustivo estudio sobre la causa de esta enfermedad en diferentes porta injertos y variedades de vid, analizándose por una parte, mediante estudios de microscopía óptica y electrónica, cuáles son las alteraciones fisiológicas responsables de la manifestación de la enfermedad, y por otra, cuáles son las variaciones que se producen en las concentraciones de compuestos fenólicos, metabolitos secundarios que pueden estar implicados en los mecanismos de resistencia o defensa de la vid infectada por patógenos. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la desecación y paralización del crecimiento que se observa en las plantas así infectadas, puede ser debida a la formación de tilosas y agregados en el xilema, que dificultan o impiden el flujo normal de agua hasta la parte aérea. La formación de tilosas se produce por una invaginación de las paredes del xilema, invadiendo el lumen del mismo con protoplasma de las células parenquimáticas asociadas a xilema. La presencia de hifas de hongos en el interior de xilema puede ser la causa del desarrollo de estas alteraciones. Por otra parte, el hecho de que se detecten formas de resistencia de hongos en el interior de la médula, ayuda a comprender la ineficacia de muchos de los tratamientos antifúngicos ensayados, siendo, por tanto, muy difícil luchar contra esta enfermedad. El análisis de los polifenoles totales en órganos y tejidos con distinto grado de infestación, revela que asociado a la obstrucción de vasos de xilema se produce un aumento en polifenoles totales y especialmente de los taninos, cuyas concentraciones aumentan con el grado de obstrución del xilema. Este aumento en la concentración fenólica, incrementa la capacidad antifúngica de los tejidos infectados. Así, el crecimiento de Phaeomoniella chlamydospora, Phaeoacremonium inflatipes y P. aleophilum fue inhibido proporcionalmente por extractos de tejidos vegetales con diferente grado de infectación. La aplicación de Brotomax a plantas de viña aumenta el contenido total de polifenoles y la capacidad antifúngica de los diferentes órganos. Los tratamientos con Brotomax a plantas infectadas de SO4, incrementan el desarrollo vegetativo y reducen la obstrucción de vasos del xilema en los nuevos tallos y raíces formadas. Palabras clave: Brotomax, Enfermedad de Petri, Fenoles, Phaeomoniella chlamydospora, Tilosas. Abstract Petri disease is a very complex disease which attacks young vines. It is caused by several fungi, and is responsible for substantial losses in new plantations. The present paper describes an exhaustive study into the causes of this disease in different rootstocks and vineyard varieties. Using optical and electronic microscopy, we analyse the physiological alterations responsible for the manifestation of this disease, and ascertain the variations that take place in the concentrations of phenolic compounds, secondary metabolites that may be involved in the resistance mechanisms or defense of the vine against fungi pathogens. The results show that the drying up and inhibition of growth that is observed in infected plants may be due to the formation of tyloses and aggregates in the xylem that hinder or impede the normal flow of water to the aerial part. The tyloses that are formed result from invagination of the xylem walls, a process that infuses the lumen with the protoplasm of the parenchymatic cells associated to xylem. Likewise, the presence fungal hyphae in the xylem can be the possible cause of development of these morphological changes. The fact that resistant fungal forms are detected inside the pith helps understand the inefficacity of many of the antifungal treatments assayed, making it very difficult to fight against this disease. An analysis of the total polyphenol content of organs and tissues with different degrees of infestation reveals that, the overall content, especially of tannins increases with the degree of obstruction of the xylem vessels. This increase in the concentration of phenolics improves the antifungal capacity of the infected tissues. Hence, the growth of Phaeomoniella chlamydospora, Phaeoacremonium inflatipes and P. aleophilum was inhibited by extracts of infected tissues proportionality to the degree of infection. The application of Brotomax to vineyard plants increases the total polyphenol content and the antifungal capacity of the different organs. Treatments with Brotomax of infected plants (SO4), increase vegetative development and reduces the obstruction observed in the xylem vessels in the newly formed stems and roots. Key words: Brotomax, Petri disease, Phaeomoniella chlamydospora, Phenolic compounds, Tylose. Introducción l decaimiento de plantas jóvenes de viña es una enfermedad compleja, causada por diferentes hongos, que se incluye dentro de las enfermedades de tronco o vasculares de la viña. Desde su descubrimiento, varios nombres han sido usados para definir esta enfermedad como Black goo, Yesca joven, etc. En el último Congreso Internacional sobre Yesca y Decaimiento de Viña, celebrado en Lisboa en septiembre de 2001, se decidió por unanimidad nombrar a esta enfermedad con el nombre de Enfermedad de Petri, en honor a Lionello Petri, director de la Regia Stazione di Patologia Vegetale en Roma (Italia) entre 1926 y PETRI publicó en 1912 el primer trabajo sobre las alteraciones de la madera de viña infectadas por hongos patógenos. Síntomas de la enfermedad Las jóvenes viñas muestran un crecimiento reducido, entrenudos acortados, necrosis en las hojas, clorosis y secado de ramas. Quizás por ello, la enfermedad de Petri ha sido y sigue siendo conocida 2002' NUTRI FITOS 77

2 como young vine decline, es decir, decaimiento de las viñas jóvenes. Este decaimiento general viene acompañado frecuentemente por una serie de síntomas que se desarrollan con diferente intensidad. Por su importancia, creemos conveniente destacar los siguientes: el diámetro del tronco del porta injerto es reducido y generalmente más estrecho que el de la variedad injertada (Foto 1A) y el callo puede quebrarse fácilmente (Foto 1B); los troncos pueden ser aplanados y al final, en los de los porta injertos, se suele desarrollar en uno de los lados una fisura longitudinal característica (Foto 1C); en las secciones transversales de tallo y raíz suelen aparecer pequeñas gotas negras de una sustancia parecida al alquitrán y en las longitudinales, vetas coloreadas en la madera entre amarillo y marrón (Foto 1D). Está descrito por diferentes investigadores, que una planta infectada suele morir entre los 3 y 8 años de su plantación, y en algunos casos al año. Una característica general de la enfermedad de Petri es el derrumbe de la planta cuando va a entrar en producción. Por su sintomatología, también se la denomina yesca joven. Causa de la enfermedad La enfermedad es producida por la invasión de diferentes hongos, siendo Phaeomoniella chlamydospora el más aceptado como responsable de la misma. Por otra parte, este hongo es pionero para el desarrollo de la yesca en cepas viejas, siendo estas posteriormente infectadas por Formitiporia punctata, esencial para el avance de esta enfermedad (yesca). Además, se han aislado otros hongos en plantas con la enfermedad de Petri, como Phaeoacremonium inflatipes, P. aleophilum, Cylindrocarpon (responsable de la enfermedad pie negro), Botryosphaeria, Phomopsis, Eutypa, Verticillium, Phytophthora y Pythium (CROUS y col. 1996; MUGNAI y col. 1996, 1997; BERTE- LLI y col. 1998). Sin embargo, existe un gran desconocimiento sobre cuáles son los hongos verdaderamente responsables de la enfermedad y cuáles son las vías de infestación. Diagnóstico El diagnóstico de la enfermedad es bastante complejo. La simple observación de 1. Sintomatología características de la Enfermedad de Petri en viña: 1A) diámetro del tronco del porta injerto reducido y generalmente más estrecho que el de la variedad injertada; 1B) detalle del callo generado en el injerto; 1C) los troncos son aplanados y al final en los de los porta injertos se suele desarrollar en uno de los lados una fisura longitudinal característica; 1D) en las secciones transversales de tallo y raíz suelen aparecer zonas con coloraciones oscuras. (Fotografías realizadas por Agrométodos en los cultivos de Chardonnay de Los Álamos y Temécula. California. USA). la presencia de puntos negros en el corte del tallo o de la raíz, nos avisa de la presencia de la enfermedad en un estado avanzado, sin embargo, la afirmación contraria (ausencia de puntos negros) no es indicativo de planta sana, ya que hemos podido observar en plantas, aparentemente sanas de Richter y Paulsen, mediante técnicas microscópicas, la presencia de hongos en el xilema y médula del patrón. El diagnóstico contempla la detección de los hongos mediante aislamiento de los mismos y/o por técnicas moleculares (PCR). Tratamientos contra la enfermedad Hasta la fecha, los diversos tratamientos propuestos para evitar la proliferación de los hongos dentro de la planta no han funcionado. Así, la aplicación de fungicidas, los cuales son efectivos en los ensayos en placa ( in vitro ), son ineficaces para eliminar los hongos patógenos dentro de la viña. Otros procedimientos como sumergir la planta en agua caliente a 50ºC durante 30 minutos, que parecía ser una posible solución al problema, se demostró posteriormente que si bien dicho tratamiento debilita a P. chlamydospora, no es capaz de eliminar este hongo. Los procedimientos de lucha biológica utilizando al hongo Trichoderma no han mostrado resultados satisfactorios, debido posiblemente a la dificultad de crecimiento y encuentro entre este hongo y los patógenos presentes y protegidos en la planta. Para evitar la propagación de esta enfermedad, cuyas consecuencias pueden ser catastróficas, se debería: 78 NUTRI FITOS '2002

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4 y disponer de plantas sanas libres de hongos. y controlar las heridas de poda, para evitar la invasión por hongos presentes en el ambiente. y establecer tratamientos para incrementar las autodefensas o resistencia natural de las plantas. En este sentido, está descrito que las plantas disponen de mecanismos para defenderse frente al ataque de organismos patógenos. Dentro de estos mecanismos, se incluyen las fitoalexinas, sustancias sintetizadas por la planta que inhiben la propagación del organismo invasor. En la viña estas fitoalexinas son compuestos fenólicos, que incluyen a taninos, ácidos fenólicos, flavonoides y estilbenos, los cuales actúan como resistencia pasiva (SCALBERT, 1991). Muchos compuestos fenólicos inhiben el desarrollo de las hifas de los hongos (NYERGES y col., 1975; SCHLÖSSER, 1994). Así, por ejemplo, gran parte de la actividad antifúngica de los taninos se debe a su capacidad para enlazar enzimas (proteínas) liberadas por el hongo durante el proceso de invasión celular (DAI, y col., 1995; LAKS y col., 1988; PEZET y PONT, 1992; SCHLÖSSER, 1994). Dentro de la vid, los tejidos con mayor contenido fenólico, como las hojas, son los más resistentes frente a un ataque por patógenos fúngicos (AIST, 1983). Para poder tratar la enfermedad hay que conocer: dónde se localiza el hongo en la 2. Corte transversal de una raíz de vid Richter 110 con enfermedad de Petri. Se distingue el desarrollo de color en zonas asociadas con el xilema. x 100. planta, cómo se propaga y cómo desarrolla la planta la sintomatología característica. Hay que profundizar en el conocimiento de los mecanismos de defensa frente a patógenos y desarrollar tratamientos específicos para estimular estas autodefensas. En el presente trabajo mostramos algunos de los resultados obtenidos en el análisis microscópico de la causa de la enfermedad de Petri, y en la localización de hongos presentes en los tejidos infectados. Por otra parte, analizamos la implicación de los compuestos fenólicos en los mecanismos de defensa frente a hongos patógenos y cómo dichos compuestos son estimulados mediante tratamientos con Brotomax. Material y Métodos Material vegetal y tratamiento con Brotomax Se utilizaron los portainjertos de viña SO4 (4 años) y Richter 110 (1 año) y el cultivar Flame (7 años). Los tratamientos con Brotomax se realizaron en las siguientes fechas: marzo y mayo por vía foliar con Brotomax al 0,3%, y un tercer tratamiento en septiembre vía gotero 10 cc/planta. Reactivos Estándar de compuestos fenólicos, resveratrol, catequina, ácido gálico y reactivo Folin Ciocalteu s, fueron suministrados por Sigma (St. Louis, MO, USA). Cianidina fue suministrada por Estrasíntesis S.A. (Genay, Francia) y Brotomax por Agrométodos, S.A (Madrid, España). Extracción y cuantificación de los compuestos fenólicos Los diferentes materiales vegetales utilizados procedentes de plantas control y tratadas, infectadas y no infectadas fueron recogidos y divididos en cada caso en tres lotes iguales. El material vegetal fue triturado y extractado con dimetilsulfóxido (DMSO) (100 mg peso fresco/ml) durante 12 h con agitación. Los extractos fueron filtrados a través de una membrana de 0,45 µm de nylon. Para la estimación de fenoles totales, expresados como equivalentes de ácido gálico, se utilizó el método Folin Ciocalteu (SINGLETON Y ROSSI, 1965) utilizando un espectofotómetro UV2 (UNICAM UV/VIS) Actividad antifúngica de los extractos de vid 3. Micrografía óptica de un corte transversal de raíz de vid SO4 con enfermedad de Petri. Las flechas señalan xilema con tilosas. x 200. Los hongos P. chlamydospora, P. inflatipes y P. aleophilum fueron suministrados por la empresa Agri Analysis Company (Davis, CA, USA). Los cultivos se realizaron en PDA a 25ºC. Para la medida de la actividad antifúngica de los diferentes extractos se procedió al cultivo in vitro de 80 NUTRI FITOS '2002

5 PROTECCIÓN DEL VIÑEDO 4. Micrografía electrónica de transmisión de un corte transversal de raíz de vid SO4 con enfermedad de Petri, en la que se observa la formación de la tilosa atravesando las paredes del xilema. X, xilema, T, tilosa. x Micrografía electrónica de barrido en la que se observa micelios de hongos dentro del xilema de tallo de vid Richter 110 con enfermedad de Petri. dichos hongos siguiendo los procedimientos descritos en trabajos previos (DEL RÍO y col., 1998). Microscopía óptica y electrónica La preparación de muestras para microscopía óptica y electrónica se lleva a cabo siguiendo los procedimientos descritos en trabajos previos por ORTUÑO y col., (1990). Para los estudios de microscopía óptica se utilizó un Fotomicroscopio II (Carl Zeiss) con cámara digital acoplada a ordenador. Para el estudio con microscopía electrónica de transmisión, las secciones de raíz fueron cortadas (Ultracut Reicher Jung) y fijadas con acetato de uranilo y citrato de plomo siendo examinadas en un microscópio electrónico Zeiss EM 109, con una aceleración de 60 Kv. En el caso del estudio por microscopía electrónica de barrido, secciones tanto transversales como longitudinales de tallos y raíz fueron fijadas con glutaraldehido (3%) durante 4 horas a temperatura ambiente, y posteriormente fijadas con OsO 4 (1%) a 0ºC durante 2,5 horas. La deshidratación se realizó mediante lavados con acetona de diferente concentración, realizándose a continuación un secado a punto crítico usando CO 2 líquido (CPD 020) durante 2 horas. Las muestras fueron recubiertas con oro (espesor de 20 nm), para su posterior observación utilizando microscopio electrónico de barrido JEOL (JSM 6100) con una aceleración de 15 kev. Las imágenes obtenidas fueron digitalizadas y enviadas a un ordenador. Resultados y Discusión Estudio microscópico de las alteraciones producidas en diferentes tejidos de plantas infectadas Una característica del estado avanzado de la enfermedad es la coloración del tronco, ramas y raíces, observación que resulta fácil de realizar visualizando un corte transversal de los mismos. Como podemos observar en la Foto 2, el desarrollo de la enfermedad de Petri conlleva la formación de puntos de color miel a negro en zonas asociadas con el xilema. Estos mismos síntomas se pueden también manifestar en los porta injertos y variedades. Esta coloración se produce por obstrucción de los vasos de xilema mediante la formación de tilosas (Foto 3), siendo posteriormente estas tilosas las que cambian al color característico de la enfermedad de Petri. La formación de tilosas conlleva alteraciones en las paredes del xilema en relación a su composición, ya que aquellas se producen por dilatación del protoplasma de las células parenquimáticas asociadas a xilema (Foto 4). Esta formación de tilosas en el lumen del xilema es la responsable del menor desarrollo y falta de agua que presenta la planta, ya que el flujo de la savia bruta (agua y sales) procedente de la raíz se ve reducido, por lo que el funcionamiento normal de la planta va a estar afectado. Este proceso de formación de tilosas es producido por la invasión de hongos en el xilema. Nosotros hemos mostrado, por primera vez, la presencia de hongos en el xilema de plantas de viña con la enfermedad de Petri, tanto en el pie como en la variedad. Así, en la Foto 5 podemos observar los micelios de los hongos dentro del xilema perforando la pared del mismo para acceder a las células parenquimáticas. Por tanto, tal y como había sido propuesto por otros investigadores, sin evidencia experimental, el hongo o los hongos responsables de la enfermedad, pueden ubicarse en el xilema y propagarse al resto de la planta, produciendo en su avance la obstrucción de la vía del agua y de las sales minerales. Por otra parte, nuestros resultados ponen de manifiesto que la obstrucción no es debida exclusivamente a la formación de tilosas, sino que también se produce por deposición de agregados (posiblemente polisacáridos) en el lumen del xilema como se puede observar en la Foto 6. Estos agregados se forman, posiblemente, debido a la ruptura de algunas tilosas o a la degradación de las paredes por acción de los hongos presentes en el lumen del xilema. Cambios en compuestos fenólicos asociados con la infección y aumento de la resistencia La localización celular de los compuestos fenólicos mediante tinción selectiva (FeCl 3 HCl), en tejidos infectados, de SO4, 2002' NUTRI FITOS 81

6 6. Micrografía electrónica de barrido en la que se observa deposición de agregados en el lumen del xilema de tallo de vid Richter 110 con enfermedad de Petri. 7. Localización celular de los compuestos fenólicos por tinción selectiva (FeCl 3 HCl), en un corte transversal de raíz de vid SO4 con enfermedad de Petri. A) Zona con tilosas y alta concentración de fenoles (mayor tinción). B) Zona sin tilosas y menor concentración de fenoles (menor tinción). x 100. revela que asociado a la formación de tilosas se produce un incremento en compuestos fenólicos como podemos observar en la Foto 7. Estos compuestos fenólicos son mayoritariamente taninos y más específicamente galotaninos, y en menor proporción resveratrol (DEL RÍO y col., 2001). Estos incrementos en compuestos fenólicos en tejidos infectados aumentan la capacidad antifúngica de los mismos frente a hongos patógenos implicados en la enfermedad de Petri. Así, la adición de extractos de raíces con distinto grado de infestación a medios de cultivo inhiben el crecimiento de Phaemoniella chlamydospora, Pheoacremonium inflatipes y P. aleophilum. En el Gráfico 1 se muestran los datos de inhibición del crecimiento de P. chlamydospora por extractos de raíces de SO4 con distinto grado de obstrucción del xilema. Así, extractos de raíces con un 30% de obstrucción del xilema inhiben el crecimiento de P. chlamydospora un 68%, frente a un 11% para las raíces sin tilosas. Cuando el grado de obstrucción fue del 90%, la inhibición detectada fue del 89%. Por otra parte, además de inhibir el crecimiento del micelio de los hongos ensayados, la adición de estos extractos al medio de cultivo produce una inhibición del grado de esporulación de los hongos, sobre todo de P. inflatipes (Foto 8). Estos resultados demuestran la implicación de los compuestos fenólicos en los mecanismos de defensa de la vid frente a hongos patógenos, tal y como ha sido sugerido por diferentes autores para diversos materiales vegetales (LAKS y col 1988; SCHLÖSSER 1994; SCALBERT 1991; MATERN y KNUESEL 1988; DEL RÍO y col. 2000). Inducción de resistencia en viña frente a hongos patógenos por Brotomax Numerosos estudios realizados, por nuestro grupo de investigación, en relación a la acción de Brotomax como inductor de autodefensas, han demostrado que la aplicación de este producto comercial estimu- 8. Efecto de los compuestos fenólicos presentes en hojas de Flame sobre el crecimiento y de la esporulación Phaeoacremonium inflatipes. A) Medio PDA control. B) Medio PDA con extracto. la la ruta de biosíntesis de compuestos fenólicos en diferentes plantas tales como cítricos, olivo, algodón, etc. (FUSTER y col. 1995; ORTUÑO y col. 1997; BOTÍA y col. 2001; DEL RÍO y col. 2001a,b). Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la aplicación de Brotomax al 0.3% en plantaciones comerciales de viña cv. Flame produce incrementos en el contenido de polifenoles totales, tanto en hojas, como en tallos y frutos (Gráfico 2). Este efecto estimulador de los compuestos fenólicos se produjo no sólo en Flame, sino en diferentes variedades comerciales ensayadas, tanto para vinificación como para uva de mesa (datos no mostrados). La acción estimuladora de la biosíntesis de compuestos fenólicos, descrita anteriormente para el cv. Flame, tiene una implicación directa en el aumento de resistencia frente a hongos patógenos. Así, la adición de extractos de hojas del cv. Flame a medios de cultivo produce una inhibición del crecimiento de Phaeoamoniella chlamydospora. En la Foto 9A podemos observar cómo el micelio de P. chlamydospora está inhibido por adición de un extracto de hojas control del cv. Flame. La adición de extractos de hojas del cv. Flame tratado con Brotomax produce una inhibición total del crecimiento de 82 NUTRI FITOS '2002

7 PROTECCIÓN DEL VIÑEDO GRÁFICO 1 Inhibición del crecimiento micelial (%) de Phaemoniella chlamydospora por extractos de raíz de SO4 con diferente grado de infección GRÁFICO 2 Efecto de los tratamientos con Brotomax sobre el contenido total fenólico de diferentes órganos de cv Flame recolectados en julio No infectada (no se observa bloqueo en el xilema). Infectada (30% del xilema bloqueado). Muy infectada (90% del xilema bloqueado). este hongo (Foto 9B), impidiendo totalmente el crecimiento de dicho hongo. Cuando plantas SO4 con la enfermedad de Petri fueron tratadas con Brotomax (tres tratamientos al 0,3%, durante un año) se observa una reactivación en el desarrollo vegetativo y radicular de dichas plantas (Foto 10A) con respecto a las plantas control (Foto 10B), con la particularidad de que las nuevas raíces (Fotos 10C y 10D) y los tallos (Foto 10E) no muestran obstrucción del xilema. Por otra parte, el análisis mediante microscopía electrónica de barrido no revela la presencia de hongos en el interior del xilema (datos no mostrados). En cambio, las nuevas raíces formadas en las plantas control presentaron la sintomatología característica de la enfermedad de Petri (Fotos 10F y 10G). Estos resultados abren nuevas perspectivas para profundizar en los mecanismos de defensa de las plantas contra hongos patógenos. La posibilidad de poder modular la biosíntesis de sustancias implicadas en la defensa tendrá una repercusión directa en las pérdidas producidas en la agricultura por microorganismos patógenos, y en gran medida sobre la salud del consumidor, al reducirse las aplicaciones de compuestos antifúngicos. Por otra par- te, abre nuevas perspectivas en la lucha contra hongos fitopatológicos de difícil tratamiento. Bibliografía AIST, J.R Structure responses as resistance mechanisms. In: The Dynamics of Host Defense. J.A. Bailey, D.J. Deverall (Eds.). Academic Press, Australia. pp BERTELLI, E., MUGNAI, L. and SURICO, G Presence of Phaeoacremonium chlamydosporum in apparently healthy rooted grapevine cuttings. Phytopathologia Mediterranea 37: BOTÍA, J.M., ORTUÑO, A., BENAVENTE GARCÍA, O., BÁIDEZ, A., FRÍAS, J., MARCOS, D. and DEL RÍO, J.A Modulation of the biosíntesis of some phenolic compounds in Olea europaea L. fruits: their influence on olive oil quality. J. Agric. Food Chem. 49: A. Efecto de los compuestos fenólicos presentes en extractos de hojas de Flame sobre el crecimiento de Phaeomoniella chlamydospora. A) Medio PDA control, B) Medio PDA con extracto y C) Medio PDA con extracto de hojas tratadas con Brotomax. 9B. Inhibición del crecimiento del micelio del hongo en presencia de extracto de Flame tratada con Brotomax. (Detalle ampliado de la placa C, perteneciente a la Foto 9A). 2002' NUTRI FITOS 83

8 CROUS, P.W., GAMS, W., WINGFIELD, M.J. and WYK VAN, P.S Phaeoacremonium gen. nov. associated with wilt and decline diseases of woody hosts and human infections. Mycologia 88: DAI, G.H., ANDARY, C., MONDOLOT COSSON, L. and BOUBALS, D Involvement of phenolic compounds in the resistance of grapevine callus to downy mildew (Plasmopara viticola). Europ. J. Pl. Pathol. 101: DEL RÍO, J.A., ARCAS, M.C., BENAVENTE GARCÍA, O. and ORTUÑO, A Citrus polymethoxylated flavones can confer resistance against Phytophthora citrophthora, Penicillium digitatum and Geotrichum species. J. Agric. Food Chem. 46: DEL RÍO, J.A., ARCAS, M.C., BOTÍA, J.M., BÁIDEZ, A., FUSTER, M.D. and ORTUÑO, A Involvement of phenolic compounds in the antifungal defence mechanisms of Olea europaea L. and Citrus sp. Recent. Res. Devel. Agricultural and Food Chem. 4: DEL RÍO, J.A., GONZÁLEZ, A., FUSTER, M.D., BOTÍA, J.M., GÓMEZ, P., FRÍAS, V. and ORTUÑO, A. 2001a. Tylose formation and changes in phenolic compounds of grape roots infected with Phaeomoniella chlamydospora and Phaeoacremonium species. Phytopathologia Mediterranea 40: S394 S399. DEL RÍO, J.A., GONZÁLEZ, A., GÓMEZ, P., BOTÍA, J.M., FUSTER, M.D., ORTUÑO, A., FRÍAS, V., GUTIERREZ, J.C. and LÓPEZ, M. 2001b. Modulation of cotton phenolic compounds by Brotomax. Effect on resistance against Verticillium and on yield. 8th International Verticillium Symposium, Córdoba, Spain, p. 54. FUSTER, M.D., GARCÍA, D., ORTUÑO, A., BOTÍA, J.M., SABATER, F., PORRAS, I., GARCÍA LIDÓN, A. and DEL RIO, J.A Selection of citrics highly productive in secondary metabolites of industrial interest. Modulation of synthesis and/or accumulation processes. In: Current Trends in Fruit and Vegetables Phytochemistry. García Viguera, C.; Castañer, M.; Gil, M.I.; Ferreres, F. and Tomás Barberán, F.A. (Eds.) pp Consejo Superior Invest. Cient., Madrid, Spain. LAKS, P.E., MCKAIG, P.A. and HEMINGWAY, R.W Flavonoid biocides: wood preservatives based on condensed tannins. Holzforschung 42: MATERN, U. and KNUESEL, R.E Phenolic compounds in plant disease resistance. Phytoparasitica 16: MUGNAI, L., SURICO, G. and ESPOSITO, A Microflora associata al mal dell esca della vite in Toscana. Informatore Fitopatologico 46: MUGNAI, L., SURICO,G. and SFALANGA, A Produzione di enzimi esocellulari da parte di funghi del legno di viti colpite dal mal dell esca. Micologia Italiana 26: NYERGES, P., SZABO, E. and DONKO, E The role of anthocyan and phenol compounds in the resistance of grapes against Botrytis infection. Acta Phytopath. Acad. Scient. Hung.10: ORTUÑO, A., SÁNCHEZ BRAVO, J., MORAL, J.R., ACOSTA, M. and SABATER, F Changes in the concentration of indole 3 acetic acid during the growth of etiolated lupin hypocotyls. Physiologia Plantarum 78: ORTUÑO, A., BOTÍA, J.M., FUSTER, M.D., PORRAS, I., GARCÍA LIDÓN, A. and DEL RÍO, J.A Effect of Scoparone (6,7 Dimethoxycoumarin) biosynthesis on the resistance of tangelo Nova, Citrus paradisi and Citrus aurantium fruits against Phytophthora parasitica. J. Agric. Food Chem. 45: PETRI, L Observations on grapevine wood alterations following wounding. Sperimentali Agrarie Italiane 45: PEZET, R. and Pont, V Differing biochemical and histological studies of two grape cultivars in the view of their respective susceptibility and resistance to Botrytis cinerea. Rec. Adv. In Botr. Res. Proc. 10 th Intl.Botr. Symp., Heraklion, Crete, Greece, pp PRICE, M..L., VAN SCOYOC, S. and BUTLER, L.G A critical evaluation of the vanillin reaction as an assay for tannin in sorghum. Journal of Agricultural and Food Chemistry 26, SCALBERT, A Antimicrobial properties of tannins. Phytochem. 30: SCHLÖSSER, E Preformed phenols as resistance factors. Acta Hort. 381: SINGLETON, V.L. and ROSSI, J.A. Jr., Colorimetry of total phenolics with phospho molybdic phosphotungstic acid reagents. American Journal of Enology and Viticulture 16: Efecto de los tratamientos con Brotomax sobre el desarrollo radicular de SO4 con la enfermedad de Petri. 10A) Plantas tratadas. 10B) Plantas control. 10C y 10D) Raíces de plantas tratadas. 10E) Tallo de planta tratada. 10F y G) Raíces de plantas control. 84 NUTRI FITOS '2002