Utilidad clínica de la prueba de Captura de Híbridos en la detección del Cáncer del Cuello Uterino

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1 Utilidad clínica de la prueba de Captura de Híbridos en la detección del Cáncer del Cuello Uterino Alejandro García Carrancá, PhD Jefe del Laboratorio de Virus y Cáncer Unidad de Investigación Biomédica en Cáncer Instituto de Investigaciones Biomédicas, UNAM. Instituto Nacional de Cancerología, SSa.

2 Las infecciones persistentes con VPH de alto riesgo son necesarias para desarrollar cáncer de cuello uterino PORCENTAJE ,33 OTROS Bosch et al., 1995; Walboomers et al., ESCUCHAR 1999EL AUDIO

3 Las infecciones transitorias con VPH de alto riesgo son extremadamente comunes!

4 Porqué una prueba para detectar ADN de VPH de alto riesgo? Las infecciones persistentes con VPH AR constituyen el factor de mayor riesgo para desarrollar cáncer de cuello uterino Su ADN se encuentra en practicamente TODOS los tumores Las infecciones persistentes predicen el desarrollo de lesiones escamosas inteaepiteliales de alto grado (LEIAG) Las mujeres se encuentran en riesgo de progresión SOLO mientras persisten las infecciones

5 Principales diferencias en las pruebas actuales para la detección de VPH PCR Capaz de detectar una sóla copia de ADN viral Cuidados en el manejo y procesamiento de muestras Propensa a contaminaciones Sensibilidad ANALÍTICA (extrema) Captura de híbridos Manejo de muestra muy conveniente Prueba simple, confiable y muy robusta Única aprobada por la FDA y CE Apropiada en programas de DOC Sensibilidad CLÍNICA (> 5,000 copias/prueba)

6 Kary B. Mullis En 1990, imaginó y creó la técnica de PCR. En 1993, se hizo acreedor al Premio Nobel de Química.

7 La Técnica 1. Desnaturalización 2. Alineamiento 3. Extensión

8 La pruebas de ADN de VPH y la detección oportuna de cáncer del cuello uterino La prueba de Digene con tecnología de Captura de Híbridos 2

9 Utilidad del diagnóstico molecular de VPH 1) Prueba de oro 2) Como adyuvante de la citología convencional o en base líquida (reflex) 3) Como primera prueba en programas de DOC 4) Para el seguimiento y evaluación del tratamiento

10 Detección de 13 tipos de VPH de alto riesgo Las infecciones persistentes con estos tipos incrementan cerca de 250 veces el riesgo relativo para desarrollar CaCU

11 La prueba de Captura de Híbridos II (hc2), la más robusta de las pruebas para detectar VPH y la más evaluada

12 Primera etapa Liberación y desnaturalización del ADN

13 Segunda etapa Hibridación del ADN con múltiples sondas de ARN

14 Tercera etapa Captura de los híbridos ADN-ARN en fase sólida

15 Cuarta etapa Los híbridos se hacen reaccionar con múltiples anticuerpos conjugados

16 Quinta etapa Detección de la señal quimoluminiscente amplificada

17 Sensibilidad Analítica vs. Clínica The Clinical Sensitivity of HC2 is 5,000 copies of HPV DNA The Analytical Sensitivity of PCR methods can be <10 copies of HPV DNA Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6

18 Un enorme número de publicaciones avala la utilidad de hc2 Muchos países, gran número de mujeres. Realizados por grupos de investigadores muy reconocidos. Ajustados. La mayoría independientes. Todos muestran resultados similares..

19 Sensibilidad para NIC 2+ Población n Pap HPV Pap+HPV Germany 7,592 34% 86% 94% U.K. 10,358 72% 97% 100% Mexico 6,115 57% 94% 98% Switzerland 13,842 59% 97% 100% Italy 32,638 74% 93% 100% Promedio 59% 93% 98%

20 Indicaciones de la FDA para la prueba de VPH de QIAGEN Reduce the Risk. Prueba Reflex, para tamizaje de ASC-US en mujeres de cualquier edad, con resultados inconclusos de Pap (aprobada en 1999). Para tamizaje: conjunta con Pap en mujeres mayores de 30 años para detectar presencia o ausencia de VPH de alto riesgo (aprobada en 2003).

21 Utilidad Clínica de la prueba de VPH Usos bien establecidos: Manejo de mujeres con ASC-US Seguimiento después de colposcopía Seguimiento después de tratamiento en NIC 2,3 Adyuvante de la citología en DOC de mujeres mayores de 30 años Como prueba primaria en DOC de mujeres mayores de 35 años

22 Clinical practice guidelines support HPV testing ACOG

23 Valor Predictivo Negative (NPV) The negative predictive value for combined HPV Testing and the Pap has been shown to be 99.21% for CIN3. Sherman ME, et al. J Nat Cancer Inst. 2003;95:46-52.

24 Women with a negative Digene HPV Test and negative Pap results can be assured of a very low disease risk for developing cervical cancer before her next routine visit. Take the Test. Not the risk.

25 Ventajas de la prueba hc2 Sensibilidad clínica de % para NIC 2/3 y cáncer La mayoría de estudios muestra sensibilidad clínica mayor al 95% Procedimiento sencillo y de alto rendimiento Estandarizado, aprobado por la FDA Alta reproducibilidad (>95%) Mínimo nivel de reacciones cruzadas para otos tipos virales Sensibilidad analítica moderada (5000 copias/ prueba)

26 Esquema de tamizaje actual; prueba de VPH de alto riesgo, seguido de citología de calidad

27 Norma Oficial Mexicana 31 de mayo de 2007 recomienda: uso de vacunas para la prevención primaria de CaCU pruebas moleculares (PCR) y hc2 para prevención secundaria

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