11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 38/21. k 73 Titular/es: Novartis AG. k 72 Inventor/es: Lowther, Nicholas;

Transcripción

1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 38/21 k 12 TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 k k k k 86 Número de solicitud europea: Fecha de presentación : Número de publicación de la solicitud: Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Composiciones farmacéuticas estables que contienen alfa-interferón híbrido. k Prioridad: GB GB 9879 k 73 Titular/es: Novartis AG Schwarzwaldallee 21 8 Basel, CH k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Lowther, Nicholas; Allen, John Douglas y Howes, Colin k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Dávila Baz, Angel ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCION Composiciones farmacéuticas estables que contienen alfa-interferón híbrido La presente invención se refiere a composiciones acuosas estables que contienen α-interferón híbrido. Los Interferones son familias de proteínas secretoras inducibles producidas en respuesta a estímulos virales y otros estímulos. Los α-interferones actualmente se están utilizando clínicamente para el tratamiento de un número de diferentes estados de enfermedad, los cuales incluyen: leucemia de célula velluda, sarcoma de Karposi en el SIDA, carcinoma crónico de hepatitis que no es A, que no B y de células basales. Se han construido mitades híbridas B/D de α-interferón humano recombinante que portan diferentes porciones de la secuencia de las especies parentales de α-interferón B y D con el objeto de crear moléculas con propiedades convenientes (A. Meister, G. Uz, K E. Mogensen, J. Gen, Virol , (1986)). Las moléculas parentales se disocian con el objeto de intercambiar los segmentos de ADN que codifican para las secuencias de péptidos 1-, 61-92, 93- y Se ha descubierto que el híbrido BDBB exhibe una actividad antiviral y antiproliferativa particularmente interesante (H.K. Hochkeppel, M. Gruetter, M.A. Horisberger, J.K. Lazdins, Drugs of the Future, 17 (), 899, (1992)). Las proteínas, tal como α-interferón BDBB, poseen propiedades químicas y físicas complejas que causan dificultades en la purificación, separación, almacenamiento y suministro de estas especies. Por consiguiente, la formulación de agentes medicinales proteínicos difiere mucho de la de moléculas orgánicas pequeñas rígidas. Se han empleado varias clases de excipientes en las formulaciones parenterales de proteínas y péptidos. Dado que las proteínas tienen una pobre biodisponibilidad oral, la medida más común es presentarlas como productos inyectables al objeto de lograr un suministro eficiente del fármaco. Debido a la inestabilidad en solución, las proteínas se formulan en general como polvos liofilizados (secados por congelación) para reconstituirse inmediatamente antes de la inyección por las vías subcutánea, intramuscular o intravenosa. La degradación de la proteína se puede separar en dos categorías, es decir, estabilidad química y estabilidad física. La estabilidad química se refiere a todos los procesos mediante los cuales la proteína se modifica químicamente por medio de la disociación o la formación de enlaces. La estabilidad física no involucra una modificación covalente, sino más bien cambios en la estructura de orden superior de la proteína, por ejemplo, por medio de desnaturalización, agregación o precipitación. Es deseable mantener al α-interferón BDBB híbrido en un estado desagregado al objeto de eliminar cualesquiera efectos inmunogénicos adversos posibles y/o una dosificación inconsistente durante la terapia. A una concentración deseable para utilizarse como un agente terapéutico inyectable, el α-interferón BDBB híbrido es físicamente inestable en agua. Su solubilidad se ve comprometida y existe en un estado agregado. Por consiguiente, se deben emplear excipientes estabilizantes. Se ha descubierto que el α-interferón híbrido existe en un estado agregado cuando se formula en solución a ph neutro (tamponado con fosfato). Además, la solubilidad de la proteína parece encontrarse en compromiso bajo estas condiciones y realmente se disuelve muy poco. En JP-A se describe una composición farmacéutica que comprende Interferón junto con un alcohol de azúcar y un agente tampón orgánico. Sin embargo, este documento no menciona un Interferón concreto ni describe una solución acuosa que contenga solo Interferón y un agente tampón. Se ha descubierto ahora que la formulación de α-interferón híbrido en solución acuosa a ph bajo estabiliza la proteína y la mantiene en el estado monomérico deseable, y hace posible que se disuelva más en solución. Por tanto, la presente invención proporciona una solución acuosa estable de α-interferón híbrido que contiene, como estabilizante, un tampónaunphde3,0a,0. El ph de la solución es con preferencia de 4,0 a 4,. El α-interferón híbrido es con preferencia α-interferón BDBB [NUMERO DE IDENTIFICACION DE SECUENCIA: 1 (SEQ. ID. No. 1)]. La sal tampón seleccionada debe ser farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, gilicna/hcl o citrato de sodio, y con preferencia está presente en una concentración entre y 0 mm. La sal tampón preferida es glicina/hcl en una concentración de 0- mm. También se puede emplear un poliol farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, manitol, glucosa o sacarosa, con preferencia en una concentración de a 00 mm. El poliol preferido es manitol en una 2

3 concentración de 0 a mm. El poliol se utiliza principalmente para ajustar la tonicidad de las soluciones a los valores fisiológicos El α-interferón híbrido está presente con preferencia en una concentración de 0,1 a 1, mg/ml. La escala más preferida es de 0,2 a 0.4 mg/ml. El α-interferón híbrido se aísla y se purifica normalmente mediante un procedimiento de múltiples etapas y se guarda como una solución en bruto congelada en un sistema tampón de ph 7 que no sea farmacéuticamente aceptable. Con el objeto de producir las soluciones estables de la invención, es necesario intercambiar este sistema tampón por uno que sea farmacéuticamente aceptable al ph deseado. Esto se puede realizar añadiendo el regulador deseado, sometiendo la solución a ultrafiltración, añadiendo tampón y repitiendo el ciclo varias veces. Se pueden emplear otros métodos, tales como cromatografía de filtración en gel. Las formulaciones de la invención son adecuadas para utilizarse como productos farmacéuticos para las indicaciones mencionadas anteriormente mediante inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa. La invención se ilustra por los siguientes Ejemplos. Ejemplo 1 Preparación de una formulación en solución estable de citrato de α-interferón BDBB híbrido a 0,3 mg/ml a ph 4,0: Una solución madre en bruto de α-interferón BDBB híbrido (2,6 mg/ml en 0 mm de cloruro de amonio/mm de tris(hidroximetil)metilamina a ph 7,0) se lleva hasta 0 ml con mm de tampón de citrato de sodio/ácido cítrico a ph 4,0 en una celda de ultrafiltración (Amicon) equipada con una membrana de corte de un peso molecular de KDa (Amicon YM). La celda se presuriza a 3,-4,2 Kg/cm 2 (0- psi) utilizando nitrógeno libre de oxígeno. El volumen se reduce, pero no hasta un grado tal que la proteína precipite, con agitación continua para reducir al mínimola concentración de la proteína en la superficie de la membrana, y se diluye de nuevo hasta 0 ml con tampón de mm de citrato de sodio/ácido cítrico a ph 4,0. Este ciclo se repite veces. El ph de la solución final se verifica en 4,0. El contenido en proteínadelasolución final se verifica en 0,3 mg/ml, utilizando procedimientos convencionales (ensayo Bradford, Bio-Rad). La formulación descrita anteriormente se filtra en condiciones estériles y se llena, asépticamente, en viales de vidrio Tipo 1 de calidad farmacéutica de 2 ml los cuales se sellan con tampones de caucho recubierto con teflón/cápsulas sofradas de aluminio. Los viales se almacenan a 4 Cenlaoscuridad. A intervalos de tiempo determinados, se analizan muestras mediante HPLC en fase inversa (un índice de la estabilidad química) y cromatografía de exclusión por tamaños (una medida del estado de agregación de la proteína en solución). Los resultados de la HPLC en fase inversa, expresados como el % de α-interferón híbrido del área pico total, son los siguientes: Tiempo de almacenamiento a4 C/días Inicial 96, , , , , 33 9, ,33 4 9, , , , , ,00 Los resultados se expresan como los promedios de inyecciones replicadas (generalmente de 3 a ). El 3

4 coeficiente de variación (cv) para estas determinaciones es < 0,3 %. La degradación parece seguir una cinética de seudoprimer orden. Mediante la extensión de la línea recta de ajuste óptimoatravés de los datos, se puede hacer una estimación de la vida en conservación, definida como el tiempo que se necesita para degradar hasta el 9 % (t9) del contenido inicial en α- Interferón BDBB híbrido. Esta formulación tiene una vida en conservación pronosticada de al menos 8 meses a 4 C. La cromatografía de exclusión por tamaños (SEC) no revela ninguna formación detectable de agregados después del almacenamiento durante 136 días a 4 C. Ejemplo 2 1 Se repite el Ejemplo 1 excepto que la solución también contiene 0 mm de manitol. La prueba de estabilidad se realiza como en el Ejemplo 1, pero con un almacenamiento a diferentes temperaturas, como se muestra más adelante, para ensayos acelerados. Temperatura de Almacenamiento/tiempo Inicial 96,33 1semana 96,07 2 semanas 94,9 3 semanas 94,07 4 semanas 93,1 6 semanas 91,83 13 semanas 86,7 Inicial 96,32 3 semanas 93,22 6 semanas 87,72 13 semanas 78,91 CInicial 96,34 1 semanas 94,39 2 semanas 86,04 6 semanas 68,99 La degradación parece seguir una cinética de seudoprimer orden. Empleando el método descrito en el Ejemplo 1, la formulación tiene una vida en conservación pronosticada de más de 6 semanas a 2 C. Ejemplo 3 Preparación de una formulación en solución estable de glicina/ α-interferón BDBB híbrido a 0,3 mg/ml y a ph 4,0: 0 Empleando un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1, la solución media en bruto de α -Interferón BDBB híbrido (2,6 mg/ml en 0 mm de cloruro de amonio/ mm de tris(hidroximetil)metilamina a ph 7,0) se convierte a una solución de 0,3 mg/ml de la proteína en tampón de 80 mm de glicina /HCL a ph 4,0. La prueba de estabilidad de la formulación en solución estable de glicina/α-interferón BDBB híbrido a ph 4,0, se realiza siguiendo los procedimientos descritos en el Ejemplo 1. Los resultados son: 4

5 Tiempo de almacenamiento a 4 C/días 1 2 Inicial 96, , , , , ,4 92 9, ,26 La degradación parece seguir una cinética de seudoprimer orden. Empleado el método descrito en el Ejemplo1,laformulación tiene una vida en conservación pronosticada de al menos 18 meses 4 C. La SEC no revela ninguna formación significativa de especies agregadas después del almacenamiento a4 C durante 136 días. Ejemplo 4 Se repite el Ejemplo 3 excepto que la solución también contiene 0 mm de manitol. La prueba de estabilidad se realiza como en el Ejemplo 3, pero con un almacenamiento a diferentes temperaturas como se indica a continuación. Temperatura de almacenamiento/tiempo CInicial 98,03 1semana 97,73 4 semanas 96,92 8 semanas 97,73 1 semanas 97,64 semanas 97,4 semanas 97, CInicial 98,03 1semana 9,22 2 semanas 92,97 4 semanas 84,61 La degradación parece seguir una cinética de seudoprimer orden. Empleando el método descrito en el Ejemplo 1, la formulación tiene una vida en conservación pronosticada de al menos años a 4 C. La SEC no revela ninguna formación significativa de especies agregadas después del almacenamiento a4 C durante semanas o después del almacenamiento a C durante 4 semanas. Ejemplo Se repite el Ejemplo 3 excepto que la concentración de tampón de glicina/hcl es de 318 mm. La prueba de estabilidad se realiza como en el Ejemplo 3, pero con un almacenamiento a diferentes temperaturas como se indica a continuación.

6 Temperatura de almacenamiento/tiempo 1 4 CInicial 97,22 2semana 96,34 4 semanas 96,46 8 semanas 9,66 CInicial 97,22 1semana 91,16 2 semanas 8, 4 semanas 77,41 La degradación parece seguir una cinética de seudoprimer orden. Empleando el método descrito en el Ejemplo 1, la formulación tiene una vida en conservación pronosticada de al menos 6 meses a 4 C. LISTADO DE SECUENCIAS INFORMACION GENERAL: (i) SOLICITANTE 2 (A) NOMBRE: Ciba-Geigy AG (B) CALLE: Klybeckstrasse 141 (C) CIUDAD: Basilea (E) PAIS: Suiza (F) CODIGO POSTAL: 02 3 (G) TELEFONO: (H) TELEFAX: (I) TELEX: (ii) TITULO DE LA INVENCION: Composiciones Farmacéuticas (iii) NUMERO DE SECUENCIAS: 1 4 (iv) FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR: (A) TIPO DE MEDIO: disco flexible 0 (B) ORDENADOR: IBM PC compatible (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Chemtext Versión 1.0 SEQ. ID. No. 1 (i) CARACTERISTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 166 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido 6

7 (C) TIPO DE HEBRA: simple (D) TOPOLOGIA: lineal (ii) TIPO DE MOLECULA: proteína (iii) HIPOTETICO: no (iv) CONTRA-SENTIDO: no (v) NOMBRE: α-interferón BDBB híbrido recombinante

8 (ix) CARACTERISTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: enlace disulfuro (B) LOCALIZACION: aminoácidos 1 a 99 (ix) CARACTERISTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: enlace sulfuro (B) LOCALIZACION: aminoácidos 29 a

9 REIVINDICACIONES 1 1. Una solución acuosa estable de α-interferón híbrido, caracterizada porque contiene, como estabilizante, un tampónaunphde3,0a,0. 2. Una solución estable según la reivindicación 1, caracterizada porque tiene un ph de 4,0 a 4,. 3. Una solución estable según la reivindicación 1 ó2,caracterizada porque el tampón es glicina/hcl ocitratosódico. 4. Una solución estable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el tampón está presente en una concentración de -0 mm.. Una solución estable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el tampón es glicina/hcl a una concentración de 0- mm. 6. Una solución estable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el α-interferón híbrido es α-interferón BDBB (SEQ. ID. No. 1) Una solución estable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el α-interferón híbrido está en una concentración de 0,1 a 1, mg/ml. 8. Una solución estable según la reivindicación 7, caracterizada porque el α-interferón híbrido está en una concentración de 0,2 a 0,4 mg/ml. 9. Una solución estable según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque también contiene un poliol farmacéuticamente aceptable.. Una solución estable según la reivindicación 9, caracterizada porque el poliol es manitol, glucosa o sacarosa. 11. Una solución estable según la reivindicación 9 ó, caracterizada porque el poliol está presente en una concentración de a 00 mm Una solución estable según la reivindicación 9, caracterizada porque el poliol es manitol en una concentración de 0 a mm. 4 0 NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 9