EFECTOS DE LA Senna reticulata EN LA GLICEMIA DE RATONES NORMOGLICÉMICOS E HIPERGLICÉMICOS ABSTRACT

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1 EFECTOS DE LA Senna reticulata EN LA GLICEMIA DE RATONES NORMOGLICÉMICOS E HIPERGLICÉMICOS Gustavo Isaza Mejía 1 Luz Estela Cristancho 1 Alejandra Cruz Giraldo 2 Héctor Julián Castillo Giraldo 2 RESUMEN Se evaluó el efecto del extracto acuoso de Senna reticulata sobre los niveles de glicemia de ratones de ambos sexos, normales y con diabetes inducida por aloxano, con el fin de observar su posible efecto hipoglicemiante. Las medidas de glicemia se hicieron en ayunas, en las horas 0, 2, 4, 6 y 24. El análisis de los resultados demostró que la administración del extracto en ratones normoglicémicos no produce una disminución estadísticamente significativa de los niveles de glucosa sanguínea; sólo la glibenclamida tuvo este efecto a la hora 24. En ratones hiperglicémicos se observó una disminución con significancia estadística (p<0,016) de los niveles de glicemia con la administración de Senna reticulata y glibenclamida a la hora 6 de la medición. Palabras clave: Diabetes mellitus, Senna reticulata, plantas hipoglicemiantes. THE EFFECTS OF Senna reticulata ON THE GLYCEMIA OF NORMAL AND HYPERGLYCEMIC MICE ABSTRACT The effect of the aqueous extract of Senna reticulata on the glycemia levels of both sex mice, normal and Alloxan induced diabetes mice, was studied in order to determine its possible hypoglycemic effect. The measurements of glycemia were made before feeding, at 0, 2, 4, 6 and 24 hours. The analysis of the findings demonstrated that the administration of this extract to normal mice did not produce a statistically significant decrease in the levels of glycemia and in this case, only Glibenclamide had this effect on hour 24. In the hyperglycemic mice, a statistically significant (p<0.016) decrease was observed in the levels of glycemia with the administration of Senna reticulata and Glibenclamide on hour 6. Key words: Diabetes mellitus, Senna reticulata, medicinal plants. 1 Profesor Universidad de Caldas. Departamento de Ciencias Básicas. Manizales-Colombia. s: gisaza7@une.net.co, luz.cristancho@ucaldas.edu.co 2 Estudiantes Programa de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Caldas. aleja_cruz22@gmail.com, hejucas@hotmail.com Recibido: Septiembre 08 de Aceptado: septiembre 15 de

2 Gustavo Isaza Mejía, Luz Estela Cristancho, Alejandra Cruz Giraldo y Héctor Julián Castillo Giraldo INTRODUCCIÓN Según la Federación Internacional de Diabetes (IDF), aproximadamente 194 millones de personas en el mundo tienen diabetes, lo que la convierte en un verdadero problema de salud pública ya que es la cuarta o quinta causa de muerte en los países más desarrollados y hay evidencia sustancial de que es una epidemia en las naciones en desarrollo; además, según estimaciones hechas por el Instituto Internacional de Diabetes, (Melbourne 1994), basadas en estudios epidemiológicos, en el año 1994 había 110 millones de diabéticos y para el año 2010 habrá 239 millones (1). En Colombia, la enfermedad es padecida por el 8 al 10 % de la población mayor de 20 años, aunque esta prevalencia aumenta en mayores de 50 años (2). Este panorama ha determinado una intensa investigación para obtener fármacos útiles en el tratamiento de la diabetes y una de estas fuentes de obtención son las plantas. Dado que se usan muchas plantas medicinales empíricamente como hipoglicemiantes, es necesario validarlas mediante la investigación de sus efectos, aislar sus principios activos, realizar pruebas de toxicidad aguda y crónica en animales para finalmente llevar a cabo estudios clínicos en humanos (3, 4). En un estudio etnofarmacológico llevado a cabo por los autores del presente trabajo, en el Eje Cafetero y Norte del Valle en mayo de 2005, se encontró que gran cantidad de personas utilizan la planta Senna reticulata, conocida comúnmente con el nombre de martingalvis o dorancé, para el tratamiento empírico de la diabetes. El martingalvis o dorancé, una leguminosa de la familia Fabaceae/Caesalpinioideae, es un arbusto de 6 a 8 metros, nativo desde México hasta Brasil, sus hojas son utilizadas para combatir artritis y reumatismo, además para la curación de enfermedades de la piel. Se ha empleado contra las enfermedades venéreas y las semillas se han usado como vermífugo. Se ha demostrado que contiene ácido crisofánico, lo que podría explicar su actividad contra el herpes; además se ha reportado la presencia de aloe-emodina, rheína y -sitosterol (5). En la revisión bibliográfica no se encontraron estudios previos sobre el efecto hipoglicemiante de la Senna reticulata. (5, 6, 7, 8, 9); sin embargo, existen muchos estudios similares llevados a cabo alrededor del mundo con relación a otras plantas usadas con el mismo fin, pues existe una intensa búsqueda de hipoglicemiantes en plantas, que trata de buscar moléculas innovadoras en el tratamiento de la DM. (10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20). En este trabajo se evaluó el efecto que sobre los niveles de glucosa puede tener la administración oral del extracto de Senna reticulata, en un modelo experimental con ratones normoglicémicos e hiperglicémicos. MATERIALES Y MÉTODOS Material vegetal La planta se recolectó en la vereda Piedras de Moler del municipio de Cartago, Valle del Cauca, situada a 900 msnm, y se clasificó en el Herbario del Departamento de Botánica de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de Caldas con el número Las hojas de la planta se recolectaron tomando las precauciones exigidas por las normativas del ministerio del Medio Ambiente para no poner en peligro la especie vegetal. Preparación del extracto Las hojas previamente lavadas con agua biodestilada, se secaron a una temperatura de 35 a 40 C, se pulverizaron y se concentraron en un rotavapor a una temperatura de 40 C. El extracto obtenido se guardó en un congelador a -4 C hasta su utilización. 62

3 Efectos de la senna reticulata en la glicemia de ratones normoglicémicos e hiperglicémicos Animales de experimentación Se usaron ratones de ambos sexos provenientes del bioterio de la Universidad de Caldas de la cepa CIAT con un peso promedio de 37 gramos y 3 meses de edad; recibieron alimento especial para roedores y agua ad libitum, con una luminosidad de 12 horas día y una temperatura promedio de 18 C. Los ratones se mantuvieron en cajas de 11,5 cm, alto por 19 cm ancho y 25 cm de largo, 6 animales en cada una separados por sexo; fueron manejados bajo los condicionamientos éticos aprobados por el Ministerio de Salud (21), y la Guía para el uso de animales de laboratorio (22). a) Animales normoglicémicos Se tomaron 30 animales de ambos sexos y se distribuyeron aleatoriamente en tres grupos de 10 animales cada uno. Al grupo 1 se le administró agua destilada. El grupo 2 recibió glibenclamida a una dosis de 5 mg/kg y el grupo 3 el extracto a una dosis de 500 mg/kg. Todas las sustancias se administraron por vía oral, previamente disueltas en agua destilada. b) Animales hiperglicémicos Se tomaron 30 animales de ambos sexos que fueran diabéticos y se distribuyeron aleatoriamente en tres grupos de 10; al grupo 1 o grupo control se le administró agua destilada, el grupo 2 recibió glibenclamida a una dosis de 5 mg/kg y al grupo 3 se administró extracto a una dosis de 500 mg/kg. Determinación de la glicemia Las muestras de sangre se obtuvieron de la cola y la glicemia se determinó mediante el sistema de tirillas reactivas para análisis de glucosa en sangre capilar, con un glucómetro marca Glucotrend. ACCU-CHEC active Roche. El porcentaje de variación de la glicemia se calculó con la siguiente fórmula: G G0/GO x 100. Se analizaron los datos estadísticamente por medio de la prueba de ANOVA, seguido por la prueba de Tukey. Valores de p menores de 0,05 se consideraron significativos. RESULTADOS En la Tabla No. 1 se muestran los efectos de Senna reticulata en la glicemia de ratones normoglicémicos; las variaciones de glicemia sólo tuvieron significancia estadística con la administración de glibenclamida a la hora 24. En la Tabla No. 2 aparecen los efectos de la administración de Senna reticulata en la glicemia de ratones hiperglicémicos, se puede observar una disminución en los niveles de glicemia estadísticamente significativos en la hora 6 de los grupos tratados con glibenclamida y extracto de la planta. Diabetes experimental Se indujo mediante la administración de aloxano en dosis 150 mg/kg i.p. en tres dosis cada 48 horas para una dosis total de 450 mg/ kg; 7 días después de la ultima administración los animales se mantuvieron en ayunas por 12 horas y se determinaron los niveles de la glucosa en sangre. Los animales con glicemias superiores 150 mg/dl, fueron considerados diabéticos aptos para el experimento (13, 17, 18, 23). 63

4 Gustavo Isaza Mejía, Luz Estela Cristancho, Alejandra Cruz Giraldo y Héctor Julián Castillo Giraldo Tabla No. 1. Glicemia inicial y porcentajes de variación de las glicemias después de la administración de Senna reticulata en ratones de laboratorio normoglicémicos. Los datos se expresan como la media±desviación estándar. a P = 0,016 con respecto al grupo control (test de Tukey). Tabla No. 2. Glicemia inicial y porcentajes de variación de las glicemias después de la administración de Senna reticulata en ratones de laboratorio diabéticos. Los datos se expresan como la media±desviación estándar. a P = 0,002 con respecto al grupo control (test de Tukey). b P = 0,032 con respecto al grupo control (test de Tukey). DISCUSIÓN La administración de los extractos acuosos de Senna reticulata a ratones normoglicémicos produjo durante todo el experimento una disminución de la glicemia comparada con la hora 0, pero no produjo disminución de la glicemia en porcentajes que fueran estadísticamente significativos en relación con el grupo control que recibió agua destilada. Por lo tanto, en nuestras condiciones experimentales no se puede concluir que esta planta sea efectivamente hipoglicemiante en ratones normoglicémicos. La glibenclamida sólo logró un efecto hipoglicemiante significativo (p<0,016) a la hora 24. Los ratones hiperglicémicos que recibieron los extractos acuosos de Senna reticulata, mostraron efectos hipoglicemiantes en las horas 2, 4, 6, y 24, pero sólo a la hora 6 estos valores de descenso fueron estadísticamente significativos (p 0,03); estos niveles no se sostienen hasta la hora 24, lo cual puede deberse a que sólo se administró una dosis diaria, los principios activos se metabolizan y el efecto tenga una duración menor de 24 horas. Para la glibenclamida hubo igualmente descenso de las glicemias en cada una de las tomas de sangre y sólo a la hora 6 estos valores fueron estadísticamente significativos. 64

5 Efectos de la senna reticulata en la glicemia de ratones normoglicémicos e hiperglicémicos En nuestras condiciones experimentales los presentes resultados no validan completamente los usos empíricos de esta planta por las gentes de una extensa región del Eje Cafetero y Norte del departamento del Valle, zona centro occidental de Colombia. Sin embargo, no se puede descartar un efecto hipoglicemiante de la planta, mientras no se realicen estudios con dosis mayores o con extractos más purificados, pues el presente se considera un estudio preliminar en el cual se seleccionaron dosis empíricas por falta de datos sobre estudios previos farmacológicos experimentales de la Senna reticulata. De todas maneras, a la hora 6 hubo una respuesta estadísticamente muy significativa de efecto hipoglicemiante comparada con el grupo que recibió agua destilada. Este efecto podría ser extrapancreático, lo que le conferiría importancia terapéutica frente a las sulfonilúreas, como se observó con la metformina y las tiazolidindionas (24, 25, 27). Podría ser que la planta no tuviese un efecto hipoglicemiante mediado por la liberación de insulina, pero sí con utilidad en el tratamiento de la diabetes a través de otros mecanismos antihiperglicemiantes como incrementar la sensibilidad a la insulina, inhibir la gluconeogénesis, interacción con receptores nucleares PPAR-Gamma (24, 25, 26), y muchos otros posibles mecanismos de acción, que habría que dilucidar en posteriores investigaciones. En conclusión, la Senna reticulata posee actividad farmacológica disminuyendo los niveles de glicemia. REFERENCIAS 1. INTERNATIONAL DIABETES FEDERATION. Diabetes one of the most challenging health problems in the 21st century. [On line]: IDF [Cited 27 Mayo 2005]. Aviable from: DOMÍNGUEZ, C. A. Diabetes Mellitus. Rev. Inv. Clin (3): PRIETO, G.S. et al. Actualidad de la medicina tradicional herbolaria. CENIC Cien. Biol. (La Habana) (01): GUZMÁN, S.P. Actualidad y necesidad de investigación para el desarrollo agroindustrial de las plantas medicinales. Ingenierías (Cali) (02): MAHABIR, P. GUPTA (Editor). 270 plantas medicinales iberoamericanas. Programa iberoamericano de ciencia y tecnología para el desarrollo. CYTED. Subprograma de química fina farmaceútica. Convenio Andrés Bello. Bogotá: Presencia Ltda. Agosto de p RESTREPO, M; QUINTERO, P. (Editores). 50 plantas medicinales. Vol. 3, Tomo 1. Colección: Guías prácticas de biodiversidad. Manizales: Publigráficas, CORREA, J.E.; BERNAL, H.Y. Especies vegetales promisorias de los países del convenio 65

6 Gustavo Isaza Mejía, Luz Estela Cristancho, Alejandra Cruz Giraldo y Héctor Julián Castillo Giraldo Andrés Bello. Secretaría ejecutiva del convenio Andrés Bello (Editor). Tomo III. Bogotá: Ed. Guadalupe p NAPRALERT. Profile for Senna reticulata. (nap, 07/08/2005). 9. NAPRALERT. Profile for Chamaesena reticulata. (nap, 07/08/2005). 10. CORRAL SALVADO, A; DE LA PAZ NARANJO, J; CONCEPCIÓN ESEEVEA E; et al. Tamizaje, tecnología, control de calidad y farmacología del extracto fluido de Bouganvillea spectabilis Willd. Rev. Cubana. Plant. Med (2): CALZADO FLORES, C; VERDE STAR, M.J.; ORANDAY CÁRDENAS, A; HAUAD MARROQUÍN, L; SEGURA LUNA, J; AGUILAR CUESTAS, G. Determinación del efecto hipoglucemiante de la Phoradendron tomentosum, sobre un modelo de ratas diabéticas de experimentación. [En línea]: RESPYN. Revista de salud pública y nutrición. Edición Especial No , [citado 26 Mayo 2005]. Disponible en: diabetes%20_mellitus%20_cis html 12. DEAS DOMÍNGUEZ, M; SEUC JO, A; GONZÁLEZ SUÁREZ, R. Estudio del efecto hipoglicemiante del Ocimun sanctun L. (albahaca morada) con el uso de un ensayo biológico en ratones. Rev. Cubana. Plant. Med (1): DE LA PAZ, J; CORRAL SALVADO, A; RIVERO JIMÉNEZ, G; FERNÁNDEZ MENÉNDEZ, M; PÉREZ SANTOYA, P. Efecto hipoglucemiante del extracto fluido de Tecoma stans linn en roedores. Rev. Cubana Med. Milit (1): GUTIÉRREZ, F; ISAZA, G; BUENO, J.G.; HURTADO, I.N. Efectos del Poligonum segetum sobre la glicemia de ratones normales y con diabetes experimental. Biosalud. Revista de Ciencias Básicas : NAGARAJAN, N.S.; et al. Antidiabetic and antihyperlipemic effects of Clemeo feline. Fitoterapia, the journal for the study of medicinal plants [Milano Italia] (3-4): MURILLO, E; MORENO, M.L.; GUTIÉRREZ, N. Estudio del efecto hipoglicemiante de Cordia alliodora (nogal cafetero) en ratones tratados con aloxano. Vitae [Medellín] (01): PÉREZ, R; PÉREZ, C; ZAVALA, M; PÉREZ, S. Actividad hipoglucemiante de Bouvardia terniflora, Brickellia veronicaefolia y Parmentiera edulis. Salud pública de México (4): HANEFI, O; et al. Hypoglicemic effect of Rheum ribes roots in alloxan induced diabetic and normal mice. [On line]: Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. Vol. 31, No. 2, [Cited 3 august 2005]. Aviable from: MELCHOR, G; et al. Actividad hipoglicemiante oral de Allophylus cominia SW (palo de caja) en ratas normoglucémicas. Revista de salud animal [La Habana] (01):

7 Efectos de la senna reticulata en la glicemia de ratones normoglicémicos e hiperglicémicos 20. GUZMÁN, A.R.; GUERRERO R. Efecto hipoglicemiante de Costus speciosus (Zingiberaceae) en ratas. Vital (01): MINISTERIO DE SALUD. Dirección de desarrollo científico y tecnológico. Normas científicas, técnicas y administrativas para la investigación en salud. Resolución No de MRAD DE OSORIO, A; ROSENKRANZ, A. Guía para el uso de animales de laboratorio. Departamento de Farmacia. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá, PROGRAMA IBEROAMERICANO DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA PARA EL DESARROLLO. CYTED. (Editores). Manual de Técnicas de Investigación. Actividad hipoglicemiante. Bogotá, Colombia, pp ISAZA, C; ISAZA, G; FUENTES, J; MARULANDA, T. Fundamentos de farmacología en terapéutica. 4 edición Pereira: Postergraph. pp AMERICAN SOCIETY OF HEALTH-SYSTEM PHARMACISTS. American Hospital Formulary Service (AHFS). Drug Information. 2005: WILLSON; et al. The PPARs: from orphan receptors to drug discovery. E. J. Med. Chem (2): STROWING, S.M.; AVILES-SANTA, M.L.; RASKIN, P. Comparison of Insulin Monotherapy and Combination Teraphy Whit Insulin and Matformin or Insulin and troglitazone in Type 2 Diabetes. Diabetes Care :