Columnas de HPLC XBridge

Transcripción

1 [ ] Columnas de HPLC XBridge

2 Versatilidad y rendimiento inigualables La familia de columnas de HPLC XBridge está diseñada para obtener la máxima flexibilidad en el desarrollo de métodos de HPLC. Se pueden desarrollar separaciones robustas en menos tiempo y con mayor confianza, permitiendo que los usuarios de sistemas cromatográficos aprovechen plenamente la potencia del ph. Combinando vanguardistas procesos de enlazado, endcapping y síntesis de partículas con una fabricación y calidad que lideran el sector, las columnas XBridge constituyen la solución de confianza para las separaciones cromatográficas más exigentes.

3 Flexibilidad para funcionar a lo largo de un rango de ph y temperaturas de fase móvil sin precedentes Transferencia perfecta de métodos a la tecnología UltraPerformance LC. Incomparable vida útil de la columna.

4 Tecnología BEH Introducida por primera vez en 999 a través de la familia XTerra de columnas de HPLC, la tecnología de partículas híbridas (HPT, siglas inglesas)* orgánicas/inorgánicas, patentada por Waters, superó significativas limitaciones de los materiales de relleno de fase reversa con base de sílice: en especial la inestabilidad hidrolítica a ph alto. La HPT de segunda generación, llamada BEH Technology, incorporada tanto en las columnas ACQUITY UPLC BEH como en las columnas de HPLC XBridge, marca un nuevo hito en la cromatografía. Finalmente se puede utilizar toda la potencia del ph en el desarrollo sistemático de métodos para LC. *Patentes de los EE.UU ; 7..7; Síntesis de partículas para la tecnología BEH En la síntesis de partículas BEH, el monómero bis (trietoxisilil) etano contiene un puente de etileno en su estructura. Este puente de etileno imparte a la estructura de la partícula de sílice la resistencia a la disolución a ph elevado que tienen los polímeros, sin sacrificar en absoluto la integridad estructural ni la eficacia de la partícula de sílice. Et CH CH E t Et Et Polietoxisilano (BPES) E t Et Et Et n Et Et Et Et Tetraetoxisilano (TES) + Et Et Et CH Et CH Et Et Bis(trietoxisilil)etano (BTEE) Anal. Chem. 00, 7, Disolución de partículas a ph elevado Partícula de sílice Partícula XBridge (H) H - H H H H H H H H H H CH CH H H CH CH CH CH CH CH Núcleo Núcleo Sólo hay que hidrolizar enlaces. (H) tiene una elevada solubilidad en el agua. La sílice es fácil de disolver a ph > 7. Pérdida de eficacia. [ ] Hay que hidrolizar hasta 6 enlaces. Hidrófoba, menos reactiva que la sílice. Se forman enlaces -- mientras otros se rompen.

5 Tecnología BEH Beneficios de la tecnología híbrida Atributo de la partícula híbrida Los grupos híbridos superficiales reducen la concentración superficial de silanol. Los grupos puente internos confieren una elevada interconectividad. Los grupos híbridos internos y superficiales añaden hidrofobicidad. Beneficio para la RP-HPLC Reducción de los factores de cola USP de los picos para las bases. Mayor estabilidad química y mecánica. Mayor estabilidad de la columna a ph alto. La tecnología BEH ofrece a los usuarios de sistemas cromatográficos la flexibilidad de transferencia entre las plataformas cromatográficas UltraPerformance LC, analítica y preparativa. Combinando la tecnología BEH con el diseño de columna patentado de óptima densidad del lecho (BD ), las columnas XBridge Prep BD ofrecen una elevada capacidad de carga, máxima eficacia y larga vida útil de la columna. Tanto las partículas XBridge HPLC como las partículas ACQUITY UPLC BEH de,7 µm tienen tecnología BEH, permitiendo así una transferencia directa de las separaciones por HPLC a la tecnología UPLC. Tanto si un usuario de sistemas cromatográficos está interesado en separaciones por UPLC de menos de µm, como en el desarrollo de métodos de purificación o en separaciones de escala analítica, la tecnología BEH ofrece soluciones precisas y fiables. Productos con tecnología BEH Columnas XBridge Columnas ACQUITY UPLC BEH Columnas XBridge BD Prep Columnas BEH de bioseparación Tecnología de Separación de Péptidos Tecnología de Separación de ligonucleótidos [ ]

6 xbridge c 8 /c 8 XBridge C 8 /C 8 Las dos fases enlazadas de HPLC más populares, C8 y C8, son las fases de primera elección en el desarrollo de métodos de LC. Útiles para una amplia variedad de separaciones, estas columnas son conocidas por todos los científicos dedicados a la separación. Las columnas XBridge C8 y C8 ofrecen flexibilidad para el desarrollo de métodos. Mediante el uso de enlaces trifuncionales y un endcapping avanzado, se observa una excelente reproducibilidad, rendimiento y vida útil de la columna a lo largo de todo el rango de ph (-). Características de las columnas XBridge C 8 y C 8 Tipo de ligando Trifuncional C 8 Trifuncional C 8 Tamaños de partícula disponibles (µm).,.,, 0.,.,, 0 Densidad del ligando*. µmol/m. µmol/m Fase enlazada Carga de carbono* 8% % Tipo de endcapping Patentado Patentado Intervalo de ph - - Límites de temp. a ph bajo 80 C 60 C Límites de temp. a ph alto C C Farmacopea de los Estados Unidos. L L7 Partícula BEH Diámetro de poro* Å Å Volumen de poro* 0.7 ml/g 0.7 ml/g Superficie* 8 m /g 8 m /g * Valores nominales. Estabilidad a ph bajo Estabilidad a ph alto La inestabilidad a ph bajo se debe a la escisión de los enlaces de siloxano por hidrólisis ácida. Para mejorar la estabilidad a ph bajo de las fases enlazadas, hay que reducir la tasa de hidrólisis. Los tipos de química XBridge C 8, C 8 y Fenilo utilizan uniones trifuncionales y endcapping patentados para conseguirlo. En ensayos acelerados en condiciones de ph bajo, las columnas XBridge C 8 presentan una mínima pérdida de retención (mayor estabilidad hidrolítica) en comparación con las columnas rellenas con fases preparadas empleando silanos monofuncionales. La degradación de las partículas cromatográficas de base sílice a un ph elevado se debe al ataque nucleófilo de los iones hidróxido sobre sus enlaces siloxánicos estructurales. Cromatográficamente, esto ocasiona vacíos en la columna, degradación de la forma de los picos o pérdida de eficacia. Las partículas XBridge incorporan puentes de etileno dentro de la matriz de sílice, que confieren resistencia a la disolución de la partícula. Tendrían que romperse hasta seis enlaces siloxánicos para liberar una sola unidad con puentes de etileno de una partícula. La estabilidad química queda demostrada en el ensayo acelerado a ph alto que se ilustra más abajo. Horas en TFA al % a 80 C hasta una pérdida de retención del 0% Horas en TEA 0 mm a 0 C hasta una pérdida de eficacia del 0% XBridge C 8 XBridge C 8 Zorbax SB C8 XTerra MS C 8 SunFire C 8 Intersil DS- Ace C8 Gemini C8 Luna C8 () Gemini C8 Zorbax Extend C8 Luna C8 () YMC Pro C8 [ 6 ]

7 xbridge c 8 /c 8 El ph como herramienta para un óptimo desarrollo de métodos En la cromatografía de fase reversa, el ph de la fase móvil puede producir cambios en la selectividad y capacidad de retención a los compuestos ionizables. Los compuestos ácidos presentan mayor retención a valores del ph por debajo de su pka, y los compuestos básicos presentan una retención más prolongada a valores del ph por encima de su pk a. Muchos compuestos farmacológicamente activos son ionizables; así, una columna con un intervalo útil de ph más amplio permite mayor flexibilidad para el desarrollo de métodos farmacéuticos. Las columnas XBridge tienen un amplio intervalo útil de ph (ph -), lo cual ofrece una flexibilidad inigualable para el desarrollo de métodos. Columna: XBridge C 8,.0 x 00 mm,. µm Fase móvil A: Fosfato potásico 00 mm, ph Fase móvil A: Fosfato potásico 00 mm, ph 7 Fase móvil A: Fosfato potásico 00 mm, ph Fase móvil B: ACN Fase móvil C: H Caudal: 0.6 ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C Temperatura: 0 C Volumen de inyección: 0 0 mg/ml en agua Detection: nm Instrumento: Waters Alliance 69 con PDA AU 0 0. AU 0 0. AU min ph Forma deficiente de los picos Sobrecarga de la columna Baja retención: ionizado ph 7 Mejor forma de los picos Mejor retención: 0% ionizado Coelución ph La mejor forma de los picos Buena retención: 00% no ionizado La mejor resolución El clorhidrato de lincomicina es un fármaco antibiótico bien establecido, utilizado en medicina humana y veterinaria, efectivo principalmente contra patógenos grampositivos. El actual método USP adolece de una forma deficiente de los picos y de poca sensibilidad. Para desarrollar un método óptimo, se puede utilizar el ph para obtener mejor forma de los picos y mejor resolución. Columna: XBridge C 8,.0 x 00 mm,. µm Fase móvil A: Fosfato potásico 00 mm, ph Fase móvil B: Acetonitrilo Fase móvil C: Agua Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C Caudal: 0.6 ml/min Volumen de inyección: 0 0 mg/ml en agua Temperatura: 0 C Detección: nm Instrumento: Waters Alliance 69 with 996 PDA 0.% 7.%.% Excelente carga Resolución optimizada Excelente forma de picos 0 0 min Una vez seleccionado el ph, se optimizó la pendiente del gradiente para mejorar la resolución. [ 7 ]

8 XBridge C 8 /C 8 Cambio entre ph alto y bajo La capacidad de cambiar entre un ph alto y uno bajo en una sola columna puede permitir una espectacular reducción del tiempo de parada del instrumento, así como significativas reducciones de coste cuando se trabaja a múltiples niveles de ph. Tradicionalmente, se asignan columnas diferentes para cada nivel de ph, para evitar la degradación prematura de la columna. Las partículas de tecnología BEH, cuando se combinan con fases enlazadas y endcapping novedosos e innovadores, permiten el uso de las columnas de HPLC XBridge a un ph más elevado que las columnas convencionales, pero permiten el cambio de ph sin reducción en el rendimiento. En otras palabras, una sola columna XBridge puede utilizarse para trabajar en condiciones de ph tanto bajo como alto, eliminando así el tiempo necesario para cambiar de columna, y la necesidad de disponer de múltiples columnas para trabajar a ph bajo y alto por separado. Sacando partido de los tampones de fosfato Los tampones de fosfato poseen una singular selectividad, excelente transparencia UV y buena capacidad de tamponamiento a múltiples valores del pk a. No obstante, debido a la naturaleza agresiva del fosfato, las columnas tradicionales de sílice presentan con frecuencia una vida útil muy reducida. Las columnas XBridge demuestran un rendimiento excelente con tampones de fosfato en todo el intervalo de ph, debido a la resistencia química mejorada de las partículas con tecnología BEH min min 6 ph ph 7 Columna XBridge ph V 0 B = base A = ácido N = neutro A N B Iny. nº min V 0 Iny. nº min B = base A = ácido N = neutro A Gemini Column N B Iny. nº Iny. nº min Eliminando el sangrado en MS La espectrometría de masas, en combinación con la HPLC, ofrece a los químicos analíticos mayor sensibilidad y selectividad. Para obtener todos los beneficios de la LC/MS, es esencial la utilización de columnas de LC de baja degradación. La tecnología BEH incorporada a las columnas XBridge elimina prácticamente la degradación de la LC/MS, al ofrecer mayor sensibilidad hidrolítica y resistencia de las partículas. Como se puede ver más abajo, en comparación con una exploración de fondo por MS, se observa una degradación mínima..0e+07 n columna XBridge C 8.E+07 En esta evaluación se investigó el efecto de cambiar el ph de la fase móvil de forma agresiva para cada inyección, empleando una mezcla de compuestos ácidos, básicos y neutros. Cada columna fue equilibrada primero a ph, seguido de una sola inyección de la mezcla de prueba. La columna fue equilibrada después a ph 0, seguido de una sola inyección de la mezcla de prueba. Esta secuencia se repitió para varios miles de inyecciones sin deterioro de la columna XBridge C 8. Recuento de iones.0e+07.e+07.0e+07.0e E min [ 8 ]

9 XBridge C 8 /C 8 Reproducibilidad para el desarrollo de métodos Waters sigue siendo la referencia del sector para la reproducibilidad lote a lote. Desde la gama de columnas Symmetry en 99 y continuando con las gamas de columnas de HPLC XTerra, Atlantis y SunFire, las columnas de Waters ofrecen resultados constantes. Las columnas XBridge se fabrican en las mismas instalaciones certificadas cgmp, IS900 e IS8 que producen estas gamas de columnas de HPLC, líderes en el sector. Los científicos dedicados al desarrollo de métodos pueden tener la garantía de que las separaciones obtenidas hoy serán reproducibles año tras año. µm µm 0 µm. µm. µm min Instalaciones de fabricación de Waters Estabilidad para un rendimiento fiable La tecnología BEH produce partículas diseñadas para mejorar el rendimiento de la columna y prolongar su vida útil en condiciones operativas de LC extremas y exigentes. Utilizando técnicas punteras de síntesis, Waters ha diseñado y fabricado columnas de LC capaces de ofrecer una vida útil que supera con mucho la de las principales marcas de columnas convencionales de HPLC, en condiciones de ph tanto bajo como alto. Análisis del lote XBridge C 8, ph Análisis del lote XBridge C 8, ph. Las instalaciones de vanguardia de Waters fabrican columnas de HPLC y de UPLC que aumentan al máximo el rendimiento del laboratorio. Somos fabricantes originales de partículas de sílice e híbridas, y podemos vigilar y controlar continuamente todo el proceso de fabricación a lo largo de la vida útil del producto. Esto permite obtener un control y una repetibilidad sin precedentes entre lotes de material. Análisis del lote Análisis del lote análisis de lote = 00 volúmenes de la columna Análisis del lote Análisis del lote min Los resultados de arriba se obtuvieron como parte de una extensa evaluación de columnas de HPLC realizada por una importante empresa farmacéutica. Se evaluó un total de 8 columnas en condiciones exigentes para determinar la estabilidad de la eficacia y de la selectividad durante un uso prolongado, así como la reproducibilidad entre lotes. Esta evaluación dio lugar a la selección de las columnas de HPLC XBridge como la principal columna de desarrollo de métodos a nivel mundial. Datos cortesía de Novartis. La Corporación Waters ha recibido los siguientes registros y certificaciones: Registrada por la Food y Drug Administration de los EE.UU.: cgmp y dispositivos médicos de Clase. IS900:000 IS8:00 [ 9 ]

10 XBridge Fenilo XBridge Fenilo Las columnas fenilo se utilizan con frecuencia en separaciones donde se necesita una selectividad alternativa, especialmente cuando los analitos de interés contienen un anillo aromático. Tradicionalmente, las columnas de fenilo se han utilizado poco, debido a su inadecuada estabilidad en condiciones de ph bajo. Los científicos dedicados al desarrollo de métodos ya no se ven limitados por el ph cuando utilizan una columna de LC de fenilo. Gracias al novedoso enlazado y endcapping de la tecnología de partículas BEH, las columnas Polar Group XBridge Fenilo ofrecen excelente estabilidad a ph bajo y alto, dando lugar a la columna fenilo más estable y reproducible del mercado. CH CH Características de las columnas XBridge Fenilo Tipo de ligando Trifuncional C 6 Fenilo Tamaños de partícula disponibles (µm).,., Fase enlazada Densidad del ligando*.0 µmol/m Carga de carbono* % Tipo de endcapping Patentado Intervalo de ph - Límites de temp. a ph bajo 80 C Límites de temp. a ph alto C Farmacopea de los Estados Unidos. L Partícula BEH Diámetro de poro* Å Volumen de poro* 0.7 ml/g Superficie* 8 m /g * Valores nominales. Excelente rendimiento Las columnas XBridge Fenilo combinan una unión trifuncional del ligando fenilo-hexilo con técnicas patentadas de endcapping para obtener una estabilidad a ph bajo que lidera el sector, sin dejar de ofrecer una excelente forma de picos. Estabilidad a ph bajo que lidera el sector Excelente forma de los picos % retención inicial Sonda: Etilparabeno Horas en TFA al % en H ph,0 a 80 C XBridge Phenyl Agilent Zorbax SB-Phenyl Phenomemex Luna Phenyl-Hexyl Varian Pursuit Diphenyl Agilent Zorbax Eclipse XDB Phenyl Restek Ultra Phenyl Amitriptilina N USP = 900 T USP =.0 Zorbax SB Fenilo XBridge Fenilo Amitriptilina N USP = 90 T USP = min [ 0 ]

11 XBridge Fenilo ngular selectividad Las columnas XBridge Fenilo ofrecen una selectividad alternativa con respecto a las columnas alquílicas de cadena recta, así como a las Ácidos Bases, XBridge Fenilo columnas con grupos polares integrados, en especial para compuestos que contienen un grupo aromático. Esto proporciona gran flexibilidad para desarrollar métodos ortogonales para separaciones difíciles ,0 XBridge C XBridge Shield RP min Con diferentes ligandos se pueden observar cambios de selectividad. Como se ilustra aquí, el ligando fenilo ofrece mejor retención y una selectividad alternativa para los antidepresivos tricíclicos (picos 6, 7 con respecto al pico 8). Uso del ph bajo para enfrentarse a desafíos de desarrollo de métodos La separación de ácidos aromáticos ha sido históricamente difícil, utilizando columnas C8 tradicionales. Estos compuestos son derivados del fenol y poseen anillos aromáticos; por tanto, construir una columna de fenilo es una solución lógica. No obstante, se ha demostrado que el ph bajo es crítico para obtener una separación efectiva en esta clase de compuestos, lo cual es problemático para la mayoría de las columnas de fenilo que hay en el mercado, en cuanto a la estabilidad. Las columnas XBridge Fenilo ofrecen la solución. No solo se consigue la selectividad deseada (mediante interacciones pi-pi), sino que la estabilidad química mejorada favorece la vida útil de la columna y un funcionamiento consistente a ph bajo. 6 7 Columna: XBridge Phenyl.6 00 mm,. µm Número de referencia: 8600 Fase móvil A: H Fase móvil B: ACN Fase móvil C: NH HCH 00 mm, ph Caudal: ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C min 8 Volumen de inyección: 0 µl Disolvente de la muestra: 0 µg/ml of all analytes in H Temperatura de la columna: C Temperatura de la muestra: 0 C Detección: 80 nm Velocidad de adquisición: points/sec Filtro respuesta:.0 Lavado de la aguja: /9 MeH/H Instrumento: Alliance 69 con PDA Compuestos. Ácido gálico. Ácido protocatéquico. Ácido, dihidroxifenilacético. Ácido -hidroxibenzoico. Picrolam 6. Ácido vainíllico 7. Ácido siríngico 8. Ácido salicílico 9. Ácido,-diclorofenoxiacético (Weed-B-Gone) 0. Ácido -(,,-triclorofenoxi) propanoico (lvex) En diversos herbicidas comunes, entre ellos lvex, Picloram y Weed-B-Gone, se utilizan ácidos aromáticos. Muchos otros ácidos orgánicos son analitos ácidos muy polares que pueden ser difíciles de retener en las columnas C 8 tradicionales, y sin embargo se retienen bien utilizando las columnas XBridge Fenilo.s. [ ]

12 XBridge Shield RP8 XBridge Shield RP8 Las columnas que contienen grupos polares embebidos se están volviendo más populares entre los científicos dedicados al desarrollo de métodos, debido a su selectividad alternativa en comparación con los tipos de química C 8 tradicionales. El XBridge Shield RP8 ofrece una selectividad complementaria así como una excelente forma de los picos para las bases. La tecnología Shield patentada* incorpora un grupo carbamato integrado en la fase unida, que protege los silanoles superficiales. Además, esta funcionalidad permite la compatibilidad con fases móviles totalmente acuosas sin riesgo de deshumectación de los poros, permitiendo una retención fiable y consistente. *Patente de los EE.UU..7.7 [Neue et al.] Características de la columna XBridge Shield RP8 Tipo de ligando CH Polar Group CH Monofuncional de grupo polar integrado Tamaños de partícula disponibles (µm).,.,, 0 Densidad del ligando*. µmol/m Fase unida Carga de carbono* 7% Tipo de endcapping TMS Intervalo de ph - Límites de temp. a ph bajo 0 C Límites de temp. a ph alto C Farmacopea de los Estados Unidos. L Partícula BEH Diámetro de poro* Å Volumen de poro* 0.7 ml/g Superficie* 8 m /g * Valores nominales. Qué es la tecnología Shield? A principios de la década de 990 se crearon fases enlazadas novedosas en las que se integraban grupos funcionales polares en cadenas alquílicas C8 y C8. Uno de los principales beneficios era una reducción de las interacciones silanólicas con los analitos básicos, permitiendo una mejora de la forma de los picos. Estos materiales de primera generación se preparaban mediante una modificación superficial de dos pasos, en una mezcla de grupos amino derivados y no derivados, que variaban de un lote a otro. Así, los analitos eran retenidos mediante mecanismos de fase reversa y de intercambio aniónico. Los materiales de segunda generación se preparan utilizando una modificación superficial de un paso, en la que el grupo funcional se integra en un silano. Una sola reacción superficial con el silano da lugar a una única estructura posible del ligando, sin posibilidad alguna de intercambio aniónico. Este enfoque resultó ofrecer una excelente reproducibilidad entre lotes. La eliminación de los mecanismos de intercambio aniónico es también importante, ya que previene la posibilidad de interacciones secundarias con analitos cargados negativamente. Beneficios de la tecnología Shield: n Reducción de las interacciones silanólicas con los analitos básicos. Esta desactivación o protección ocasiona una mejora de la forma de los picos para los analitos básicos. n Se observa también una singular selectividad para las fases unidas con grupos polares embebidos, reduciéndose generalmente los factores de retención de los analitos polares y básicos, y quedando la retenció de los analitos no polares relativamente inalterada. n Las fases enlazadas Shield ofrecen tiempos de retención del analito estables y reproducibles en fases móviles 00% acuosas. Las fases alquílicas convencionales adolecen de deshumectación en estas condiciones, y los tiempos de retención se reducen significativamente. Referencia bibliográfica A Review of Waters Bonded Phase Shield Technology and Its Use in High Performance Liquid Chromatography (HPLC) White Paper Referencia bibliográfica EN [ ]

13 XBridge Shield RP8 ptimizar la selectividad para el desarrollo de métodos Para desarrollar métodos cromatográficos, algunas de las herramientas disponibles para el científico dedicado a la separación incluyen el ph, la química de la columna y el modificador orgánico. La columna XBridge Shield RP8 ofrece una selectividad alternativa, junto con la capacidad de funcionar correctamente en una amplia gama de ph y con diversos eluyentes. Utilizando estas herramientas clave, el usuario de sistemas cromatográficos puede optimizar rápidamente las condiciones de prueba necesarias para lograr una separación efectiva. Ácidos Bases ph , XBridge C 8 Metanol min 0 8,9 6 XBridge Shield RP8 Metanol min XBridge Shield RP8 Acetonitrilo min Grandes cambios de selectividad cuando se comparan las químicas de columnas ortogonales en diferentes modificadores orgánicos. Excelente separación de bases Algunas columnas C 8 muestran interacciones secundarias con los compuestos básicos, debido a un débil intercambio catiónico con los silanoles superficiales residuales, dando lugar a una asimetría deficiente de los picos. La columna XBridge Shield RP8, con tecnología Shield patentada, reduce la interacción silanólica con los analitos básicos, produciendo picos simétricos muy eficientes. AU Columna: XBridge Shield RP8,.6 X 0 mm,. µm Número de referencia: Fase móvil A: H Fase móvil B: MeH Fase móvil C: NH HC 00 mm Caudal:.0 ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C min 6 7 Volumen de inyección: 0 µl Concentración y diluyente de la muestra: 0 µg/ml in H Temperatura: C Detección: Velocidad de adquisición: points/second Constante de tiempo:.0 Lavado de la aguja: /9 MeH/H Instrumento: Alliance 69 con PDA 996 Compuestos. Nordoxepina. Trimetoprim. Nortriptilina. Doxepina. Imipramina 6. Amitriptilina 7. Trimipramina [ ]

14 XBridge HILIC XBridge HILIC La cromatografía de interacción hidrófila (HILIC, siglas inglesas) es una técnica cromatográfica que puede emplearse para mejorar la retención de especies muy polares, que se retienen muy poco por cromatografía de fase reversa. Las columnas XBridge HILIC ofrecen una selectividad alternativa a las columnas de fase reversa, al tiempo que mejoran la forma de los picos, la retención y la vida útil de la columna, en comparación con las columnas HILIC con base de sílice. Gracias a la fuerte y consistente tecnología BEH, las columnas XBridge HILIC establecen un nuevo estándar de rendimiento para las separaciones HILIC. Características de la columna XBridge Shield RP8 Tipo de ligando BEH no enlazado Fase unida Tamaños de partícula disponibles (µm).,., Intervalo de ph - 8 Límites de temp. a ph bajo C Límites de temp. a ph alto C Farmacopea de los Estados Unidos. L Partícula BEH Diámetro de poro* 0Å Volumen de poro* 0.7 ml/g Superficie* 8 m /g * Valores nominales. RETENCIÓN MEJRADA SELECTIVIDAD CMPLEMENTARIA Los mecanismos de retención de HILIC son una compleja combinación de partición, intercambio iónico y enlaces de hidrógeno, dando lugar a una retención mejorada para analitos polares. La retención tiene lugar con una fase estacionaria polar en combinación con fases móviles compuestas de acetonitrilo a concentraciones superiores al 80%, que ofrecen una retención notablemente mayor que la fase reversa. Las columnas XBridge HILIC ofrecen una selectividad complementaria a las columnas de fase reversa. En algunos casos, se observa una inversión del orden de elución, además de una mejor retención, lo cual puede ser ventajoso cuando se desarrollan separaciones ortogonales para analitos polares. H N + Compuestos. 6-acetilmorfina. Morfina Colina. Morfina--β-glucurónido XBridge C 8 de fase reversa Factor de retención = 0 XBridge C 8 de fase reversa V 0 = 0. min V 0 = 0. min XBridge HILIC XBridge HILIC Factor de retención =,8 0 6 min min El XBridge HILIC ofrece retención donde la fase reversa no consigue retención alguna. [ ] XBridge HILIC ofrece una selectividad alternativa a la fase reversa. Los metabolitos polares de morfina se retienen más en condiciones HILIC.

15 XBridge HILIC ESTABILIDAD QUÍMICA Con frecuencia se necesita un ph intermedio en la fase móvil para alterar el estado de carga del analito o del sustrato, a fin de promover la retención. Para los materiales con base de sílice, esto provoca frecuentemente una disolución de las partículas, ocasionando una reducción de la vida útil de la columna. Las columnas XBridge HILIC están fabricadas con tecnología BEH, que permite una excepcional longevidad de la columna, permitiendo varios miles de inyecciones sin reducción del rendimiento debida a la degradación química. Inyección 0 Columna: XBridge HILIC,. x 0 mm,. μm Fase móvil A: Acetonitrilo:agua 9: con NH + CH C- 0 mm ph, Fase móvil B: Acetonitrilo:agua 0:0 con NH + CH C- 0 mm ph, Caudal: 0. ml/min Gradiente: 99% B a lo largo de minutos, % B a, min, parar 0, min Volumen de inyección:.0 μl Temperatura: 0 C Detección: nm Inyección000 Compuestos. Uracilo. -fluorocitosina. Citosina 0 Inyección 000 min La XBridge HILIC muestra una excepcional resistencia química, que permite una prolongada vida útil de la columna. SENSIBILIDAD MEJRADA PARA ESPECTRMETRÍA DE MASAS PASS REDUCIDS DE MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS La utilización de HILIC ha adquirido popularidad, principalmente debido a la amplia adopción de la espectrometría de masas como detector, y a la necesidad de mejorar la sensibilidad para la cuantificación de analitos polares. A diferencia de la fase reversa, que utiliza fases móviles altamente acuosas para inducir la retención de los compuestos polares, con HILIC se emplea una fase móvil rica en acetonitrilo. Esta fase móvil altamente orgánica se desolvata con facilidad, permitiendo una mejora en la eficacia de ionización y en la respuesta de la espectrometría de masas. Intensidad.0 x x x 0 7 Intensidad.0 x x x 0 7 Respuesta 0, x N + H N +. Acetilcolina (Ach). Colina (Ch) XBridge C 8 de fase reversa Respuesta 8,6 x XBridge HILIC Cuando se utilizan métodos de extracción en fase sólida (SPE, siglas inglesas) para la limpieza de las muestras, con frecuencia se utiliza una fracción altamente orgánica, para eluir selectivamente los analitos de interés del dispositivo. Antes de inyectar esta fracción en una columna de fase reversa, hay que evaporar primero la fracción orgánica y después reconstituirla con una porción de disolvente acuoso. Estos dos pasos son frecuentemente los pasos más largos de un procedimiento de SPE. Con las columnas XBridge HILIC, la fracción altamente orgánica se puede inyectar directamente, con lo que se elimina la necesidad de evaporación y se aumenta el rendimiento de las muestras. 6-acetilmorfina 0 ng/ml añadidos a plasma humano Morfina 0 ng/ml añadidos a plasma humano 0 6 min H H H H H NCH NCH piáceos en plasma humano Placa µelution asis MCS Condicionar/equilibrar: 00 µl CH H/ 00 µl de H Cargar: 00 µl de plasma humano enriquecido con un % H P Lavado :00 µl de HCH al % en H Lavado : 00 µl CH H Lavado : 00 µl CH CN Eluir: 0 µl de NH H al % en CH CN Inyección directa del eluato: elimina los largos pasos de evaporación y reconstitución min La XBridge HILIC ofrece una respuesta mejorada de la espectrometría de masas, permitiendo límites de detección más bajos. [ ] La XBridge HILIC ofrece una inyección directa de los eluyentes de SPE, aumentando así el rendimiento de las muestras.

16 Tecnología UPLC En 00, Waters revolucionó la ciencia de la separación por LC con la creación del sistema ACQUITY UltraPerformance LC (UPLC). Las separaciones de alta resolución por UPLC se realizan en un sistema capaz de utilizar plenamente unas columnas de LC que están eficazmente rellenas de partículas de menos de µm, con tolerancia a la presión. La tecnología BEH es uno de los principales elementos habilitadores que hay tras esta nueva plataforma de separación, y ofrece la eficacia, resistencia e intervalo de ph necesarios para las separaciones por UPLC. Como las columnas ACQUITY UPLC BEH y las XBridge HPLC incorporan la misma tecnología BEH, los métodos se pueden transferir sin problemas entre estas plataformas de partículas. Las separaciones cromatográficas se pueden transferir sin esfuerzo entre la tecnología de UPLC, la escala analítica y la preparativa. Los usuarios de sistemas cromatográficos pueden aprovechar una amplia variedad de tamaños de partículas (esto es,,7,,,,, y 0 µm) conservando la eficacia del método. Tecnología UPLC: velocidad y resolución 0.08 UPLC. x 0 mm,.7 µm VELCIDAD EXTREMA Absorbancia a 70 nm Rs (,) = x 0 mm,.7 µm 0.0 HPLC. x 0 mm,.0 µm Rs (,) =.7 VELCIDAD CN RESLUCIÓN Absorbancia a 70 nm Rs (,) =.8 Absorbancia a 70 nm RESLUCIÓN CN VELCIDAD Absorbancia a 70 nm x 00 mm,.7 µm Rs (,) = x 0 mm,.7 µm RESLUCIÓN EXTREMA Absorbancia a 70 nm Rs (,) = Para separaciones isocráticas, la resolución (Rs) es proporcional al tamaño de la partícula. Por tanto, las partículas más pequeñas ofrecen mayor resolución. [ 6 ]

17 Desarrollo de métodos más rápido con la tecnología UPLC HPLC Protocolo de desarrollo de métodos UPLC Protocolo de desarrollo de métodos ph / Acetonitrilo ph / Acetonitrilo ph / Metanol ph 0 / Acetonitrilo ph 0 / Metanol ph / Metanol 8 Horas TIEMP TTAL DE Screening ph 0 / Acetonitrilo Tiempo de screening: horas/columna x columnas ph 0 / Metanol 6.8 Horas TIEMP TTAL DE SCREENING Tiempo de análisis: 6,7 horas/columna x columnas El desarrollo de métodos utilizando un enfoque de screening sistemático es uno de los modos más rápidos y efectivos para crear nuevas separaciones de HPLC. Evaluando combinaciones de ph, química de la columna y modificador orgánico, se racionaliza la información necesaria para permitir una decisión segura acerca del modo de continuar con un método. Pero y si los datos pudieran obtenerse aún más deprisa? La respuesta está en la tecnología de UPLC. Se ilustra aquí un protocolo convencional de desarrollo de métodos utilizando tecnología HPLC y UPLC. Ambas técnicas proporcionan la misma cantidad de información. La diferencia es la cantidad de tiempo de laboratorio necesaria para obtener esta información. En este ejemplo, la tecnología UPLC dio la respuesta en / del tiempo! Este protocolo completo se puede terminar en un solo día laborable, manteniendo la misma calidad de la información. La tecnología UPLC aumenta considerablemente la velocidad de desarrollo de métodos y la eficacia del funcionamiento de un laboratorio.

18 Tecnología PREPARATIVA BD Alcanzar un nuevo nivel de duración de las columnas preparativas La escasa vida útil y el rendimiento irregular de las columnas preparativas han sido fuente de inquietud significativa para el químico dedicado a la purificación. Hay que reducir el coste por purificación, y la pérdida de muestras por fallo prematuro de la columna debe ser reducida al mínimo. Tras muchos años de investigación acerca del relleno y del diseño de las columnas, Waters creó el diseño de columna preparativa con óptima densidad del lecho (BD)*, resolviendo eficazmente estos problemas. Este formato es reconocido en el sector como el que ofrece las columnas preparativas más estables, eficaces y reproducibles. La combinación de los robustos rellenos XBridge y el diseño BD eleva el rendimiento de las columnas preparativas a un nuevo nivel y garantiza una escalabilidad directa, una eficacia máxima y una larga vida útil de las columnas. *Patente del Reino Unido nº GB0869. Eficacia máxima/un 0% menos de contrapresión Fase móvil A: 0,% de DEA en agua Fase móvil B: 0,% de DEA en acetonitrilo Concentración de la muestra: 00 mg/ml en DMS Instrumento: stema AutoPurification Detección: 60 nm Compuestos. Labetolol (0 mg/ml). Quinina (0 mg/ml). Diltiacem (0 mg/ml). Verapamilo (00 mg/ml). Amitriptilina (0 mg/ml) XTerra Prep MS C 8, 9 x 0 mm, µm Volumen de inyección: 660 µl Carga total: 98 mg Presión máxima: 000 psi Caudal:.8 ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B XBridge Prep C 8, 9 x 0 mm, µm Volumen de inyección: 660 µl Carga total: 98 mg Maximum Contrapresión máxima: 700 psi Caudal:.8 ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B min min Las columnas XBridge Prep ofrecen la misma elevada capacidad de carga y fiabilidad que se espera de nuestros productos XTerra Prep, generando al tiempo menor contrapresión en la columna y mayor eficacia. Transferencia directa Fase móvil A: Acetato amónico 0 mm, ph 0 Fase móvil B: Acetonitrilo/bicarbonato amónico 00 mm (90/0) Caudal:,06 min/ml (ana); 8 min/ml (prep) Gradiente: Gradiente de 0 min, desde el % de A al 9% de B Detección: 70 nm Compuestos. Econazol (00 mg/ml). Miconazol (00 mg/ml) XBridge C 8,.6 x 00 mm, µm Volumen de inyección: 0 µl Carga total: 6 mg XBridge Prep C 8, 9 x 00 mm, µm Volumen de inyección: 0 µl Carga total: 0 mg min min El diseño de la columna preparativa BD ofrece una densidad del lecho relleno equivalente a la de la columna analítica, garantizando por tanto una transferencia directa. [ 8 ]

19 min Tecnología PREPARATIVA BD Beneficios del ph en el aislamiento y en la purificación Carga de bases Bases XBridge C 8. Nordoxepina 00, x en las ordenadas % 0. mg ph x 0 en las ordenadas % 0. mg ph 7. Doxepina. Amitriptilina Reducir el coste ampliando la vida útil de la columna La demanda de aislamiento rápido de compuestos con elevada pureza exige integridad y estabilidad de la columna preparativa. Las materias primas complejas, de escasa solubilidad, se disuelven con frecuencia en disolventes fuertes, como el DMS. Esta combinación de escasa solubilidad y los choques de presión asociados a los grandes volúmenes de inyección de eluyente orgánico puro es la principal responsable del fallo precoz de la columna, y del colapso del lecho cromatográfico % 0. mg ph 0 El diseño BD muestra una resistencia excepcional al fallo mecánico del lecho cromatográfico y ofrece un rendimiento constante de una columna a otra, reduciendo el coste mediante una vida útil prolongada El ph elevado para analitos básicos ofrece la mejor capacidad de carga, así como la mejor retención y separación. Carga de ácidos XBridge C 8 00 Ácidos. xacilina. Cloxacilina. Dicloxacilina % 0.8 mg ph. Inyección 0 00 % 0. mg ph % 0. mg ph min El ph bajo para analitos ácidos ofrece la más alta capacidad de carga, así como la mejor retención y separación. Inyección Referencia bibliográfica Folleto de las columnas preparativas de óptima densidad del lecho (BD). Referencia bibliográfica 70006EN [ 9 ]

20 Tecnología de separación de péptidos Las columnas con tecnología de separación de péptidos de Waters incorporan partículas con tecnología BEH. Están especialmente testadas con un mapa de péptidos para garantizar la estabilidad de los métodos de separación de péptidos, así como un comportamiento predecible, con la diversidad de muestras que se encuentran en proteómica, caracterización de proteínas y síntesis peptídica. Disponibles en tamaños de poro de 0 Å o de 00 Å y en tamaños de partícula desde,7 µm hasta 0 µm, ofrecen: n Picos estrechos y simétricos para obtener la máxima resolución. n Excelente separación de una amplia diversidad de péptidos. n Excelente forma y retención de los picos en ácido fórmico y en ácido trifluoroacético, para obtener una óptima cromatografía. n Transferencia directa de los métodos desde la tecnología UPLC de menos de µm hasta las separaciones preparatorias por HPLC Las columnas con tecnología BEH pueden emplearse para aumentar la resolución de digestiones peptídicas complejas. Utilizando las partículas de UPLC BEH de,7 µm en dimensiones de columna más largas, el usuario de sistemas cromatográficos puede conseguir una resolución extrema. El poder de resolución de una columna de LC se puede expresar por su cociente de longitud a tamaño de partícula (l/dp). Las columnas con cocientes l/dp más elevados ofrecen mayor eficacia y se utilizan para las separaciones más difíciles. Un ejemplo serían las columnas ACQUITY UPLC BEH con tecnología de separación de péptidos, que están disponibles con una longitud de 0 mm. Su cociente l/dp es superior a y ofrecen eficacias de >.000 placas por separación. Mapa peptídico de mayor resolución con UPLC HPLC Capacidad de picos = min UPLC Capacidad de picos = min Se muestra arriba la resolución de una mezcla peptídica compleja de una digestión proteica con fosforilasa b. En comparación con el uso de tecnología tradicional de HPLC, se obtiene mejor resolución de los componentes en un sistema ACQUITY UPLC de Waters, utilizando columnas con tecnología de separación de péptidos de Waters, que contienen partículas BEH de,7 µm. [ 0 ]

21 Tecnología de separación de oligonucleótidos Las columnas con tecnología de separación de oligonucleótidos (ST, siglas inglesas) de Waters utilizan la tecnología BEH de partículas híbridas, y están disponibles en formatos de partículas de,7 µm para UPLC y de, µm para HPLC. Esto proporciona la flexibilidad necesaria para cubrir una amplia diversidad de necesidades analíticas y de purificación, sin dejar de ofrecer una excepcional resolución y vida útil de la columna. La separación de muestras de oligonucleótidos sintéticos destritilados se basa en el método convencional de cromatografía de fase reversa con par iónico. Las columnas ACQUITY UPLC ST C8 y XBridge ST C8 son las adecuadas para este tipo de análisis y ofrecen: n Una eficacia de separación equivalente o mejor que la de los métodos PAGE-CGE o HPLC de intercambio iónico. n La capacidad de resolver largas secuencias de oligonucleótidos gracias a la mayor potencia de resolución obtenida empleando partículas de menos de µm. n Una amplia oferta de columnas escalables para cubrir las necesidades de aislamiento de escala en el laboratorio. n Excepcional vida útil de la columna para reducir el coste por análisis. Excepcional duración de las columnas Separación de una cadena de un mero de oligodesoxitimidina destritilada Columna: Fase móvil: Temperatura de la columna TEA: 60 C XBridge ST C 8,. µm (. x 0 mm) A: 0% de MeH / 90% de (HFIP 8 mm + TEA, mm) B: % de MeH / 7% de (HFIP 8 mm + TEA, mm) Gradiente: Caudal: Detección: stema HPLC: 0 00% de B en 0 min (0-% MeH)..0 ml/min 60 nm, barridos por segundo Alliance Bio 796 de Waters con PDA Inyección nº Inyección nº 00 Las columnas XBridge ST C 8 son adecuadas para la purificación de oligonucleótidos destritilados, debido a su disponibilidad en diversos tamaños de columna. El científico dedicado a la separación tiene la posibilidad de seleccionar el tamaño de columna más adecuado, basándose en la cantidad de muestra de oligonucleótido disponible. Esto permite la máxima resolución de los componentes y la máxima recuperación del producto de interés en secuencias fallidas no deseadas. Guía de selección de columnas XBridge ST C 8 para la purificación de oligonucleótidos destritilados. Columna (mm) Carga de masas aprox. (µmoles)** Caudal (ml/min). x x x x 0* x 0* x 0* * Columna ST especial ** Los valores son solo aproximados y varían en función de la longitud del oligonucleótido, su composición de bases y el método de recogida de fracciones utilizado. [ ]

22 Soluciones XBridge: productos farmacéuticos n Análisis de cafeína y sus metabolitos La cafeína es un estimulante del sistema nervioso central y del metabolismo, y se utiliza tanto en situaciones sociales como en medicina, para reducir la fatiga física y restaurar la alerta mental cuando se produce una debilidad o somnolencia inusuales. La cafeína estimula el sistema nervioso central primero a los niveles superiores, ocasionando un aumento de la alerta y de la vigilia, un raciocino más rápido y claro, mayor concentración y mejor coordinación corporal general. Las columnas XBridge Fenilo ofrecen una separación rápida y consistente para el análisis de la cafeína y sus metabolitos. Compuestos. Ácido,7-dimetilúrico. -metilxantina. Ácido,-dimetilúrico.,7-dimetilxantina. Teobromina 6. Cafeína 6 Columna: XBridge Phenyl,.6 00 mm,. µm Número de referencia: 8600 Fase móvil A: H Fase móvil B: ACN Fase móvil C: 00 mm NH HC Caudal:.0 ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C Volumen de inyección: 0 µl Muestra: Cafeína (0 µg/ml), teobromina (0 µg/ml), -metilxantina (0 µg/ml), ácido,-dimetilúrico (0 µg/ml),,7-dimetilxantina (0 µg/ml), ácido,7-dimetilúrico (0 µg/ml) en H /NH HC (90/0) Temp. de la columna: 0 C Temp. de la muestra: C Detección: 80 nm Velocidad de adquisición: puntos/s Respuesta del filtro: 0. Instrumento: Waters Alliance 69 con PDA min n Análisis de estatinas Las estatinas (o inhibidores de la HMG-CoA reductasa) forman una clase de agentes hipolipidemiantes, empleados como fármacos para reducir los niveles de colesterol en personas que padecen enfermedad cardiovascular o corren riesgo de padecerla. Reducen el colesterol inhibiendo la enzima HMG-CoA reductasa, que es una enzima limitadora de la velocidad de la vía del mevalonato, implicada en la síntesis del colesterol. La inhibición de esta enzima en el hígado estimula los receptores de LDL, ocasionando un aumento del aclaramiento de lipoproteínas de baja densidad (LDL, siglas inglesas) del torrente circulatorio, y una reducción de los niveles de colesterol en sangre. Además de la actividad liporreductora, las estatinas presentan propiedades ligadas a la prevención de la ateroesclerosis. Los investigadores especulan también que las estatinas ayudan a prevenir la enfermedad cardiovascular, inhibiendo la formación de trombos, estabilizando los niveles de placa, mejorando la función endotelial y moderando las respuestas inflamatorias. Las columnas XBridge Shield RP8 separan eficazmente compuestos estrechamente relacionados, permitiendo su rápida identificación. Compuestos. Pravastatina. Atorvastatina. Lovastatina. mvastatina Columna: XBridge Shield RP8,.6 x 0 mm,. µm Número de referencia: Fase móvil A: Fase móvil B: H ACN Fase móvil C: NH HC 00 mm, ph 0 Caudal: Volumen de inyección: 0 µl. ml/min Concentración y diluyente de la muestra: 0 µg/ml en H Temperatura: 0 C Detección: 8 Velocidad de adquisición: puntos/segundo Filtro respuesta:.0 Lavado de la aguja: /9 MeH/H Instrumento: Waters Alliance 69 con PDA min [ ]

23 Soluciones XBridge: seguridad alimentaria n Análisis de aditivos y conservantes alimentarios La sacarina es un edulcorante artificial. El ácido -hidroxibenzoico es conocido principalmente como la base para la preparación de sus ésteres, llamados parabenos, que se utilizan como conservantes. El ácido deshidroacético, el metil parabeno y el ácido sórbico son conservantes empleados en cosméticos y alimentos. La columna XBridge Fenilo permitió una rápida cuantificación de los compuestos de interés. Compuestos. Sacarina. Ácido -hidroxibenzoico. Ácido sórbico. Metilparabeno. Ácido deshidroacético Columna: XBridge Phenyl,.6 00 mm,. µm Número de referencia: 8600 Fase móvil A: KH P 0 mm, ph, Fase móvil B: ACN Caudal:.0 ml/min Isocratic Mobile Composición de la fase móvil isocrática: 7%A; %B Volumen de inyección: 0 µl Muestra: Sacarina (00 µg/ml), ácido -hidroxibenzoico (0 µg/ml), ácido deshidroacético (00 µg/ml), metilparabeno ( µg/ml), ácido sórbico (0 µg/ml) en KH P /ACN (7/) Temperatura de la columna: 0 C Temperatura de la muestra: C Detección: 0 nm Velocidad de adquisición: puntos/s Filtro respuesta: 0. IInstrumento: Waters Alliance 69 con PDA min n Análisis de patulina en zumo de manzana La patulina es una micotoxina producida por varias especies de mohos, que puede aparecer en diversos alimentos, incluyendo cereales, frutas y quesos. De los hongos capaces de producir patulina, Penicillum expansum es el más común y se aísla con frecuencia en manzanas podridas. Debido a su toxicidad, diversos organismos reguladores han establecido una ingesta máxima diaria de patulina, siendo la inquietud principal el consumo de zumo de manzana por los niños. En este método, la patulina se puede resolver completamente del hidroximetilfurfural, un compuesto interferente común. Compuestos. Hidroximetilfurfural. Patulina Columna: XBridge C 8,.6 x 00 mm,. µm Número de referencia: Fase móvil: HCH:ACN (9:, v/v) al 0,% Caudal: 0,7 ml/min Temperatura: C Detección: 76 nm 6 min Los datos han sido ofrecidos por cortesía del Dr. Vural Gökmen, Departamento de Ingeniería Alimentaria, Universidad Hacettepe, Ankara, Turquía. Literature Reference Para obtener notas de aplicación adicionales del XBridge, visitar [ ]

24 Soluciones XBridge: medioambientales n Análisis de explosivos El método EPA 80 describe el uso de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detección ultravioleta (UV) para el análisis de muestras que contienen, o se sospecha que contienen, compuestos explosivos. El método 80 permite la detección de explosivos en partes por mil millones (ppb, siglas inglesas) en tierra, agua y sedimentos. Las columnas XBridge Fenilo separaron con precisión compuestos explosivos en muestras de interés. Compuestos. HMX. RDX.,,-trinitrobenceno., dinitrobenceno. Nitrobenceno 6. TNT 7. Tetrilo 8. amino-,6 dinitrotolueno 9., dinitrotolueno 0. amino-,6 dinitrotolueno.,6 dinitrotolueno. -nitrotolueno. -nitrotolueno. -nitrotolueno Columna: XBridge Phenyl,. x 0 mm,. µm Número de referencia: 8600 Fase móvil: Caudal: Inyección: 0 µl Temperatura: 0 C Detección stema: Formiato amónico 0 mm/isopropanol 0. ml/min nm stema Alliance HPLC de Waters con detector de absorbancia 87 doble λ min n Análisis de derivatizados con DNPH Los organismos reguladores de todo el mundo están interesados en medir el formaldehído y otros aldehídos en el aire. Muchos grupos dedicados a la salud pública están interesados en la implicación de estos aldehídos en la irritación respiratoria y sus posibles efectos cancerígenos con una exposición prolongada. Los fabricantes de productos que pueden contribuir a las emisiones de aldehídos al aire, así como contaminantes en interiores, son los fabricantes de materiales de construcción y productos de madera, tejidos y textiles, y empresas de automoción. Las columnas XBridge C 8 separan rápidamente los compuestos de interés para su cuantificación. Compuestos. Formaldehído-DNPH. Acetaldehído-DNPH Columna: Número de referencia: 8600 Fase móvil A: XBridge Phenyl,. µm,.6 00 mm H. Acetona-DNPH Fase móvil B: ACN. Crotonaldehído-DNPH Fase móvil C: HCH al 0,% en H. Ciclohexanona-DNPH Caudal:. ml/min Gradiente: Tiempo Perfil (min) (min) %A %B %C Volumen de inyección: 0 µl Muestra: Acetaldehído-DNPH (0 µg/ml), acetona-dnph (0 µg/ml), ciclohexanona-dnph (0 µg/ml), formaldehído-dnph (0 µg/ml), crotonaldehído-dnph (0 µg/ml) en H /ACN (60/0) Temperatura de la columna: 0 C Temperatura de la muestra: C Detección: nm Velocidad de adquisición: puntos/s Filtro respuesta: 0. Instrumento: Waters Alliance 69 con PDA min [ ]

25 Soluciones XBridge: medioambientales n Análisis de aldehídos y cetonas como derivados de la DNPH Los métodos EPA T0, y 8 describen el uso de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detección ultravioleta (UV) para la identificación de aldehídos y cetonas, como derivados de la dinitrofenilhidracina (DNPH) en el agua potable (); tierra, aire, agua, desechos o chimeneas obtenidos por el método 00 (8 opción ) al aire libre (T0), y muestras obtenidas en aire de interiores por el método 000 (8 opción ). Los métodos EPA y 8 opción están dirigidos a los mismos compuestos. Igualmente, los métodos EPA T0 y 8 opción están dirigidos a los mismos compuestos. Varios analitos son comunes a los cuatro métodos. En combinación con estos métodos EPA, las columnas XBridge Fenilo facilitaron la identificación efectiva de derivados de la DNPH en muestras medioambientales Derivados DNPH de. Formaldehído. Acetaldehído. Propanal. Crotonaldehído. Butanal 6. Ciclohexanona 7. Pentanal 8. Hexanal 9. Heptanal 0. ctanal. Nonanal. Decanal Columna: XBridge Phenyl,.6 x 0 mm,. µm Número de referencia: 8600 Fase móvil: Agua/tetrahidrofurano/acetonitrilo Caudal:. ml/min Inyección: 0 µl cada uno de mezcla AccuStandard (M-8-R-DNPH y M-8-R-DNPH) diluida : en agua/acetonitrilo 0:60. Temperatura: C Detección: 60 nm stema: stema Alliance HPLC de Waters con detección UV min min Derivados DNPH de. Formaldehído. Acetaldehído. Acetona. Acroleína. Propanal 6. Crotonaldehído 7. Butanal 8. Benzaldehído 9. Isovaleraldehído 0. Pentanal. o-tolualdehído. p-tolualdehído. m-tolualdehído. Hexanal. - dimetilbenzaldehído Referencia bibliográfica Para obtener notas de aplicación adicionales del XBridge, visitar [ ]