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2 Autoridades III Congreso Bioquímico del Litoral Presidente: Eduardo Pingsdorf Vicepresidente: Roberto Gebhart Secretario General: Javier Lottersberger Dirección Ejecutiva Presidente: Sergio González Vice Presidente: Carolina Rey Secretaria: Alicia Rinaldi Comité Científico Andrés Albrecht María Belén Chemez Melania Noroña Guillermo Ramos Fabián Schurmann Carolina Veaute Fabián Zalazar Comité Organizador Viviana Azogaray Liliana Gavilan Carolina Kranewitter Rodolfo Maiarota MilagrosMalatini Alicia Milne Liliana Perig Liliana Ulmari 2

3 Autoridades XVI Jornadas Argentinas de Microbiología Presidenta: Clara Mayoral Vice-Presidenta 1 era :Emilce Méndez Vice- Presidente 2 do : Gustavo Giusiano Secretaria General: María Rosa Baroni Secretaria de Actas: Marina Rico Secretario del Área Científica: Gabriel Vinderola Colaboradores del Área Científica Jorge Reinheimer Emma Sutich Gustavo Giusiano Juan Carlos Basílico Patricia Burns María Cristina Lurá Graciela Posse Guillermo García-Effron Laureano Frizzo Marta Rocchi Secretaria del Área de Finanzas: Alicia Nagel Colaboradores del Área de Finanzas Carolina Aro Claudia Alvarez Roxana Lorenz María Elena Nardin Secretario del Área Técnica: Guillermo García-Effron Colaboradores del Área Técnica Francisco Salamone Susana Morano Hernando Carballada Hugo Petrosino Vocales Carolina Aro Francisco Salamone Graciela Posse 3

4 Organización y Comercialización Declarado de Interés Provincial según Decreto N 960 del 10 de abril de 2015 Filial Santa Fe 4

5 Auspiciantes 5

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9 Conferencia plenaria de apertura Nuevas fronteras en microbiología: el microbioma humano en la salud y la enfermedad Alicia Farinati Cátedra de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, Universidad del Salvador, Ciudad Autónoma de Buenos Desde la concepción el hombre está de alguna manera expuesto a la actividad del conjunto de los microorganismos que integran nuestro cuerpo casi como un órgano más: el microbioma humano. Podemos decir que es la población de más de 100 trillones de microorganismos que viven en nuestro cuerpo. El número total de genes asociados con el microbioma humano excede al número total de genes humanos en relación de 100 a 1. Por qué nuestro segundo genoma? Con los avances de la tecnología genómica la capacidad de estos microorganismos de influir en el comportamiento del hombre se hace notoria y a través de ello vislumbramos que el microbioma trasciende a la única especie que pueda estar implicada en la salud o la enfermedad. El proyecto del microbioma humano es tan importante como el del genoma humano y actualmente se encuentra en ejecución el proyecto microbioma global que vinculará el de los individuos con el de la naturaleza. Las derivaciones de todo esto son grandiosas. No sabemos hasta donde se puede llegar. Desde el lanzamiento del HUMAN MICROBIOME PROJECT en el año 2008 se ha avanzado notoriamente. Uno de los puntos más importantes es el explorar las relaciones entre las enfermedades y el microbioma. No olvidemos que los microorganismos contribuyen con numerosos genes en los múltiples procesos de la vida. Se estima que los genes responsables de la síntesis de proteínas codificadas por las bacterias son 360 veces más abundantes que los genes humanos con esa misma actividad. Algo similar ocurre con los aspectos metabólicos. Es fascinante pensar que el microbioma humano cambia y se renueva continuamente, afectado por la vida del hombre y su medio. Quizás es importante tener en cuenta que el microbioma sigue las reglas que rigen al universo y tiende volver al equilibrio. Las aplicaciones clínicas y farmacéuticas están en la puerta esperando su ingreso por el camino de la investigación. Tenemos un gran desafío por delante. Un desafío inquietante pero no menos brillante: de nosotros depende. Los microorganismos nos acompañan y la manipulación que hagamos de ellos deberá ser dentro del marco ecológico y con la ética que corresponde. La vida del hombre y sus responsabilidades siempre están en juego.. 9

10 Conferencia plenaria de cierre Identificación de un nuevo paradigma mediado por lectinas y glicanos en el control de programas inmunológicos y vasculares: implicancias en el diseño de nuevas estrategias terapéuticas Gabriel A. Rabinovich Laboratorio de Inmunopatología, IBYME, CONICET- Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. En la era post-genómica, el estudio del glicoma (el repertorio completo de glicanos de células y tejidos) ha permitido la asociación de estructuras sacarídicas específicas con procesos fisiológicos y patológicos. La responsabilidad de descifrar dicha información es atribuida fundamentalmente a lectinas endógenas, incluidas las galectinas. En estudios previos demostramos que las interacciones entre galectina-1 (Gal1), una lectina proto-tipo de esta familia y sus glicanos específicos activan circuitos regulatorios capaces de resolver la respuesta inflamatoria en enfermedades autoinmunes, favorecer el privilegio inmunológico en la interfase materno-fetal y promover fenómenos de escape tumoral. El análisis detallado de estos efectos biológicos reveló un papel crítico de glicanos en la superficie de linfocitos T efectores y regulatorios, células dendríticas y células de la microglia, que permiten la formación de redes supramoleculares de lectinas endógenas y glicanos como sintonizadores del efecto inmunomodulador de Gal1. Recientemente hemos expandido nuestros estudios a programas vasculares demostrando el papel crítico de lectinas endógenas y glicanos como activadores no canónicos de procesos de neovascularización y mediadores endógenos capaces de vincular de procesos de hipoxia, angiogénesis e inmunomodulación. La comprensión de los paradigmas a través de los cuales la interacción entre proteínas y glicanos vinculan fenómenos de inflamación, angiogénesis y escape tumoral iluminan un horizonte amplio en el diseño de nuevas estrategias de inmunoterapia. 10

11 Conferencias III Congreso Bioquimico del Litoral Bioquímica 2.0 Perfeccionar el uso e interpretación de la información bioquímica Hernán Faes Taie Instituto de Análisis Fares Taie, Rivadavia 3343,Mar del Plata. El crecimiento de la bioquímica clínica, problematiza el uso e interpretación adecuada y racional del laboratorio. Manejar productivamente información bioquímica ya no es, para los profesionales médicos, una tarea simple: habrán de realizarla metódica y sistemáticamente. El gran desafío para los profesionales de la salud es aprender a operar e interpretar en entornos informáticos. La tecnología informática, implica datos, información, conocimientos y procesos específicos y, particularmente, colaboración entre los profesionales con tiempos y recursos escasos. Definimos Bioquímica 2.0 como un concepto que reúne a través de Internet 2.0 la exploración y comunicación interactiva para acceder en forma sencilla a la información y conocimientos de la mejor evidencia disponible y específica para el paciente en estudio, en el momento oportuno. Este concepto utiliza varias herramientas metodológicas y sistemáticas como la Medicina Basada en la Evidencia, la Gestión del Conocimiento Bioquímico, las Tecnologías de la información y comunicación y la Informática Interprofesional en Salud. A los fines de crear entornos de consulta y aprendizaje con tecnología informática, un grupo interprofesional de médicos, bioquímicos, informáticos, licenciados en comunicación e ingeniero experto en SGC, estamos desarrollando, en infobioquimica.com, un Sistema de Gestión del Conocimiento que incluye: Elicitación del conocimiento: es un sistema de captura de información y conocimientos. Sistema de búsqueda Sabio: Es un sistema de soporte a la toma de decisiones para ayudar a las personas que trabajan solas o en grupo en distintos lugares a reunir inteligencia, generar alternativas y tomar decisiones. Socialización del conocimiento: Radio por internet y redes Sociales A través de este concepto se busca incrementar el valor del laboratorio clínico, mejorando los resultados finales en salud y calidad de vida del paciente como consecuencia de un mejor uso e interpretación de los análisis clínicos. La Medicina Basada en la Evidencia es la clave para abordar la búsqueda del conocimiento apropiado pero la aplicación de la medicina basada en la evidencia en la práctica a veces es compleja. Sabemos que las evidencias provienen de la investigación pero, Cómo las aplicamos en forma colaborativa entre los profesionales de la salud en el mundo real? Esto es especialmente difícil debido a que los profesionales de la salud difieren en sus percepciones de lo que constituye evidencia. La evidencia y la práctica basada en la evidencia deben ser interprofesionales haciendo hincapié en la toma de decisiones compartidas entre los profesionales, pacientes y demás interesados del sistema de salud. El nuevo desafío de los laboratorios del siglo XXI será gestionar el conocimiento basado en evidencias para mejorar la efectividad clínica del laboratorio, tal como hoy gestionamos la calidad para mejorar la exactitud de los resultados. 11

12 Conferencias III Congreso Bioquimico del Litoral Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal: diagnóstico prenatal no invasivo Carlos Cotorruelo Laboratorio de Inmunohematología. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Universidad Nacional de Rosario. IdICER CONICET. Suipacha Rosario. La Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal es causada por anticuerpos maternos dirigidos frecuentemente contra el antígeno D del sistema Rh. El uso generalizado de la profilaxis con inmunoglobulina anti-d ha disminuido considerablemente esta inmunización, sin embargo aproximadamente 1 de cada 1000 recién nacidos presenta enfermedad hemolítica por incompatibilidad Rh. Las consecuencias clínicas de la aloinmunización materna pueden conducir a anemia hemolítica fetal, hydrops fetalis, muerte intrauterina o necesidad de parto prematuro. El seguimiento médico del embarazo de madres RhD negativas sensibilizadas incluye procedimientos invasivos como amniocentesis seriadas para evaluar el estado fetal y, alternativamente, cordocentesis que permite la determinación serológica del antígeno D, además de valorar el grado de anemia fetal y, en caso de necesidad, realizar una transfusión intrauterina. Todos estos abordajes implican riesgos para la continuación del embarazo y pueden aumentar la sensibilización como resultado de hemorragias maternofetales. En gestantes con aloanticuerpos anti-d, el diagnóstico certero de Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal durante el embarazo lo determina la asignación del antígeno D fetal. Sin embargo, el riesgo que conlleva la obtención de sangre periumbilical impide la identificación serológica del mismo. La determinación de las bases genéticas del sistema Rh ha impulsado el desarrollo de métodos diagnósticos moleculares útiles para identificar fetos en riesgo de Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal. La gran sensibilidad y exactitud de los ensayos basados en la reacción en cadena de la polimerasa permite la determinación RhD en muestras de ADN fetal extraído de células de líquido amniótico o vellosidades coriónicas. Este diagnóstico prenatal se realiza en madres RhD negativas aloinmunizadas, siendo incorporadas a este grupo las gestantes cuyos fetos son RhD negativos. El desarrollo de pruebas de diagnóstico prenatal no invasivas ha sido un objetivo perseguido durante mucho tiempo. Desde el descubrimiento de la presencia de ADN fetal en el plasma de las gestantes, se han desarrollado diversos protocolos para la determinación no invasiva del genotipo RHD fetal a partir de una muestra de sangre periférica materna. En esta conferencia se realizará una revisión del estado del arte de la Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal, profundizando en el diagnóstico y seguimiento de la misma desde el punto de vista del laboratorio inmunohematológico, mediante herramientas serológicas y de biología molecular. 12

13 Conferencias III Congreso Bioquimico del Litoral Leucemia Mieloide Crónica, en la era de los Inhibidores de Tirosina Kinasa. Un modelo de terapias dirigidas. Estrategias de análisis. Irene Larripa Laboratorio de Genética Hematológica, IMEX- CONICET Academia Nacional de Medicina. La Leucemia Mieloide Crónica (LMC) se caracteriza por la presencia del cromosoma Philadelphia (Ph ) producto de la translocación entre los cromosomas 9 y 22 [t(9;22)(q34;q11)] originando el gen de fusión BCR-ABL1. El manejo de la LMC ha sufrido una profunda evolución desde la aparición de los inhibidores de tirosina kinasa (ITK) cambiando favorablemente el pronóstico de los pacientes. En la última década se ha alcanzado un enorme consenso sobre el tratamiento y monitoreo de la enfermedad residual. Actualmente se considera que los estudios genéticos son imprescindibles para el diagnóstico y seguimiento de la LMC (estudio citogenético, FISH y biología molecular). Durante la remisión de la enfermedad los parámetros hematológicos y citogenéticos son los que alcanzan normalización con mayor rapidez, debido a que utilizan metodologías (citológicas y citogenéticas) de menor sensibilidad. Sin embargo utilizando técnicas de biología molecular de mayor sensibilidad se ha podido demostrar la persistencia de células tumorales (BCR-ABL1 positivas). Por lo tanto actualmente la metodología empleada para evaluar la profundidad de la respuesta molecular (RM) es la PCR cuantitativa en tiempo real de los transcriptos BCR-ABL1 (qrt-pcr BCR- ABL1). Los numerosos pasos pre-analíticos y analíticos necesarios, determinan que esta metodología presente alta variabilidad inter-laboratorios debido fundamentalmente al uso de diferentes genes control, utilización de diferentes sondas, implementación de distintos equipos de Real Time, diseño de diversos primers y sondas en cada laboratorio. La gran variación en la medición cuantitativa del BCR-ABL1 dificulta los estudios comparativos entre los distintos laboratorios. Por este motivo, en el año 2005, se propuso armonizar los resultados cuantitativos de BCR-ABL1 a la escala internacional (EI). Para ello se consideró apropiado utilizar los valores previamente definidos en el estudio IRIS, es decir el 100% de transcriptos corresponde al nivel basal y la reducción a 0,1% (3 log) representa a una RMMayor en EI.. Para que cada laboratorio local pueda informar en la EI es necesario convertir los datos a través de un factor de conversión (FC) específico de ese centro. Los términos RM4.0, RM4.5 y RM5.0 indican niveles de transcriptos de 0,01% ( 4 log de reducción), 0,0032% ( 4.5 log de reducción) y 0,001% BCR-ABL/ABL en EI ( 5.0 log de reducción) respectivamente. Trabajos recientes demuestran que dentro de los factores pronósticos independientes para evaluar la respuesta al tratamiento se encuentran la reducción de la carga tumoral y el tiempo en lograr dicha respuesta. Teniendo en cuenta estos nuevos conceptos el European Leukemia Net (ELN) ha elaborado una serie de recomendaciones para evaluar la respuesta al tratamiento teniendo en cuenta el estudio citogenético y qrt-pcr en EI a los 3, 6 y 12 meses de tratamiento. La resistencia observada en algunos casos puede deberme a la adquisicón de mutaciones en el dominio kinasa del ABL u otros factores independientes del BCR- ABL, los cuales son necesarios investigar a fin de dilucidar las causas implicadas en este fenómeno. Durante la disertación se expondrán la importancia de la reducción de 13

14 Conferencias III Congreso Bioquimico del Litoral los transcriptos a los 3 meses y 6 meses así como la reducción a la mitad de la carga inicial (halving time) y mecanismos de resistencia implicados en la falta o pérdida de la respuesta al tratamiento con ITK. 14

15 Conferencias III Congreso Bioquimico del Litoral Consideraciones prácticas en la evaluación bioquímica de la función tiroidea. Gustavo Maccallini Laboratorio de Pesquisa Neonatal, Hospital Durand / Laboratorio Hidalgo Buenos Aires. El respaldo del laboratorio es necesario para lograr un diagnóstico precoz y un manejo efectivo de la enfermedad tiroidea. Anta una sospecha clínica fuerte, las pruebas de laboratorio sirven sólo para confirmar o descartar el diagnóstico. Sin embargo en la mayoría de los pacientes los signos y síntomas son tan sutiles que únicamente con ayuda del laboratorio se puede detectar patología tiroidea. La enfermedad tiroidea constituye la endocrinopatía más frecuentemente evaluada en el laboratorio de análisis clínicos y ha tenido un uso creciente en los últimos años debidos en parte al mejor reconocimiento de los múltiples efectos de las hormonas tiroideas en el organismo en diversas etapas de la vida y también por la disponibilidad y fácil acceso de pruebas de laboratorio. Desde que se ha mejorado la sensibilidad y especificidad de la medición de la tirotrofina humana (TSH) se considera a ésta determinación como el marcador más confiable para evaluar disfunción tiroidea en presencia de eje hipotálamo-hipófisistiroideo intacto, lográndose así identificar con TSH situaciones clínicas y subclínicas a través de una única medición. Diferencias de resultados observadas entre diferentes métodos para hormonas tiroideas y TSH, limitan el uso de valores de corte únicos con fines diagnósticos, la aplicación de guías clínicas y el seguimiento de resultados utilizando diferentes métodos. Adicionalmente a las mediciones de hormonas tiroideas, la disponibilidad de métodos sensibles para la cuantificación de Anticuerpos anti tiroideos han ayudado a completar el diagnóstico etiológico de la disfunción tiroidea como así también ser utilizados para la identificación de pacientes en riesgo de disfunción tiroidea por componentes autoinmunes. El reconocimiento de diferentes situaciones clínicas, la enfermedad extra tiroidea, el efecto de drogas farmacológicas y la presencia de interferencias, limitan la utilidad clínica de las mediciones hormonales tiroideas en el diagnóstico y seguimiento de los pacientes. Las situaciones antes señaladas y el entendimiento de los principios metodológicos utilizados en las mediciones hormonales, resultan claves en la interrelación médico-bioquímico para el manejo adecuado de los pacientes con disfunción tiroidea. 15

16 Conferencias XVI Jornadas Argentinas de Microbiología Epidemiología de enfermedades fúngicas en cultivos de soja y maíz que causan pérdidas económicas Margarita Sillon Depto. de Producción Vegetal, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Litoral, Kreder 2805, Esperanza, Santa Fe (3000). La siembra directa constituyó un paso importante como paradigma de producción diferente del modelo tradicional, hoy es uno de los principales medios para alcanzar la agricultura sustentable que aspiramos. La demanda de alimentos, aceites vegetales, y el uso de cultivos para industria aumentarán en las próximas décadas. En ese contexto soja y maíz juegan un rol central. Una de las limitantes que afectan estos cultivos son las enfermedades ocasionadas por patógenos fúngicos, muchos necrotróficos, y por lo tanto sobreviven en los rastrojos. La gravedad de las enfermedades parasitarias depende del tipo de patógeno, condiciones ambientales y susceptibilidad del huésped. Las mermas ocasionadas en los rendimientos, resultan debido a la interferencia de los distintos patógenos en los procesos involucrados en la producción y partición de biomasa en el cultivo. Por lo tanto el objetivo principal del control de las enfermedades es destruir la combinación de los factores necesarios para su aparición y esto solo puede lograrse conociendo los síntomas, los ciclos de la enfermedad, las partes vegetales involucradas y la diseminación o propagación. El manejo integrado se ha convertido en una necesidad, y el uso de insumos que permitan mantener una buena calidad del grano a cosecha, y disminuir potenciales problemas en su posterior utilización como alimento, pasa a ser una herramienta necesaria para quien busque mejorar los sistemas de cultivo. Desde 1999 se desarrollan estudios epidemiológicos en el centro de Santa Fe para analizar el impacto de las principales enfermedades, determinando que en el cultivo de maíz los patógenos foliares de mayor prevalencia son Pucciniasorghi y Exserohilumturcicum. Los microorganismos que ocasionan podredumbres de raíz y tallo se han incrementado, involucrando a Diplodiaspp, Fusariumspp., Colletotrichumspp.yMacrophomina.Se presentan después de floración, estado en que los factores involucrados en la aceleración de la senescencia natural contribuyen al aumento de la susceptibilidad de las plantas. El género Fusariumspp. se destaca especialmente por ocasionar también podredumbre de espigas y ser micotoxigénico. En el caso del cultivo de soja se registran con importancia epidémica patógenos vasculares y foliares. La importancia en los primeros está dada por la pérdida del stand de plantas, y en los segundos por la reducción del área foliar sana. Los principales patógenos son necrotróficos y componen las denominadas enfermedades de fin de ciclo, aunque un el patógeno biótrofophakopsorapachyrhizi, que ocasiona la roya asiática de la soja es una nueva amenaza al cultivo. Desde que fue identificada en América del Sur infectando plantas de soja en Paraguay y Brasil en 2001, la enfermedad se diseminó rápidamente por las demás áreas productoras del continente americano. El carácter explosivo de sus epidemias, y los daños registrados (>50% de pérdidas de rendimiento) obliga a que el control de esta patología deba ser especialmente considerado dentro del esquema de manejo del cultivo. 16

17 Conferencias XVI Jornadas Argentinas de Microbiología Nutritional modulation of gut microbiota by probiotics: how to target obesity and metabolic syndrome? Corinne Grangette Laboratory for Lactic Acid Bacteria and Mucosal Immunity, Center for Infection and Immunity Lille, Institute Pasteur, Lille, The gut microflora plays an important role in maintaining human health. More recently, alterations in the microbiota composition (known as dysbiosis) were suggested to play a role in the development of obesity. Obesity is associated with a chronic, low-grade inflammatory state - primarily orchestrated by the recruitment of inflammatory macrophages in the adipose tissue - that is crucial in the development of insulin resistance and type 2 diabetes. We thus evaluated whether daily oral consumption of probiotic strains or mixtures, selected for their potent anti-inflammatory capacities, could improve metabolism and inflammation in high-fat diet-induced C57BL/6 obese male mice. We showed a strain-specific effect; some strains had no beneficial impact while a mixture composed of a B. animalisspplactis and a L. rhamnosus strains led to a significant limitation of body weight gain and to significant improvements of metabolic and immune parameters, including insulin resistance and inflammation.the mixture caused adipose tissue cell-remodeling with reduced inflammatory macrophage accumulation and enhanced levels of regulatory T-cell marker expression, associated with an increase of PPAR.The mixture also impacted on the gut expression levels of fatty acid-binding receptors.indeed, while it decreased the expression of FABP1, CD36 and ApoCII, which are involved in lipid transport and metabolism, the probiotic mixture restored the expression levels of GPR41 and GPR43, short-chain fatty acids (SCFA) receptors known to mediate the secretion of intestinal satiety peptides. Importantly, the beneficial effects of the probiotic mixture were associated with changes in the intestinal microbiota composition, notably the increase of bacterial species reported to be protective against the development of obesity such as Akkermansiamuciniphila. Finally, using the in vitro SHIME gut model we showed that the probiotic mixture favored the production of SCFAs, mostly butyrate and propionate. Interestingly, the beneficial effects of the Mixture was mostly due to the B. lactisstrain, since the administration of this strain alone, was able to similarly limit, with the same efficiency than the Mixture, the weight gain and fat mass development. However, both strains were able to decrease inflammation, thus decoupling anti-inflammatory properties of the strains from their beneficial metabolic effects. This study provides substantial insight into how the host-microbial mutualism may govern protective effects, notably by positively affecting the gut microbiota composition, the uptake of fatty acids, the adipose tissue cell-remodeling that finally promote metabolic and immune homeostasis.these findings provide crucial clues to the development of more efficient therapeutic approaches and open the potential for future therapeutic treatments in the management of obesity. 17

18 Mesa redonda III CBL: Reproducción humana. Importancia del Laboratorio de Andrología en el diagnóstico del Factor masculino Rosa Isabel Molina Laboratorio de Andrología y Reproducción (LAR). Chacabuco PB. Córdoba, Capital. La infertilidad es la incapacidad de concebir después de un año de relaciones sexuales frecuentes sin métodos anticonceptivos. La incidencia de infertilidad está en aumento en todo mundo, y sus cifras varían de 10 a 20%. El factor masculino se encuentra involucrado en el 50% de las causas de infertilidad, de allí la importancia de realizar un buen estudio de semen por parte del bioquímico especialista. El estudio básico con el que se comienza a evaluar la fertilidad masculina es un espermograma que consta de un examen físico químico, recuento y movilidad, y morfología espermática, muy bien descripto en el manual de la OMS Un tema importante son las indicaciones que se le da al paciente porque en este paso pueden ocurrir errores pre analítico y llevarnos a dar un resultado muy erróneo, más allá de que el estudio haya sido realizado por personal entrenado e instrumental adecuado. El recuento y movilidad se puede realizar en forma manual con distintas cámaras como Nebauer, Makler, Lejas etc. o con sistemas computarizados del semen (CASA). Un detalle importante es que se trabaje con platinas a 37C en los microscopios y que se homogenice muy bien la muestra antes de su estudio, ya que el semen es una suspensión de células en un medio a veces muy viscoso. La capacitación es un proceso físico químico que los espermatozoides deben experimentar para poder fertilizar el ovocito, el cual realizan en el tracto reproductor femenino. El laboratorio de Andrología procesa las muestras de semen para realizar las distintas técnicas de Reproducción Asistida de baja y Alta complejidad como Inseminación Intrauterina, Fertilización In Vitro (FIV), Inyección intracitoplasmática de un espermatozoide (ICSI). Brevemente estas técnicas consisten en una separación rápida y eficiente del plasma seminal, recuperando los espermatozoides móviles y de mejor calidad. Hay técnicas de migración y de gradientes, ambas utilizan medios adecuados, en presencia de albumina y estufas gaseadas que permiten a los espermatozoides capacitarse. En el laboratorio de Andrología se realizan técnicas de crio preservación de esperma para paternidad diferida en aquellos pacientes que se encuentren en edad reproductiva y 18

19 Mesa redonda III CBL: Reproducción humana. peligre su fertilidad por tratamiento tóxicos para la espermatogénesis como la quimio y radio terapia etc o para todo paciente que desee preservar su fertilidad por distintas causas. Para estudiar en forma más completa al factor masculino hay varias técnicas complementarias que se pueden realizar en el laboratorio de Andrología como el investigación de infecciones genitourinarias, evaluación de anticuerpos antiespermatozoides, evaluación de la Integridad de la membrana espermática, determinación de la madurez nuclear analizando las núcleo proteínas, determinación del estado de la hebra de DNA con las técnicas que estudian la fragmentación del DNA, estudio de la Reacción Acrosómica etc. Todas estas técnicas se encuentran bien descriptas en el manual de la OMS Como en todas las prácticas de laboratorio es muy importante contar con Controles de Calidad Internos y Externos Concluimos que un buen estudio de semen es fundamental en la investigación de fertilidad de una pareja, ya que es considerada una de las herramientas más importante con la que cuenta el médico para evaluar el factor masculino. 19

20 Mesa redonda III CBL: Reproducción humana. El estudio de la fragmentación del ADN espermático como herramienta diagnóstica. María José Munuce Laboratorio de Medicina Reproductiva. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario. Reprolab Sanatorio Británico y Unidad de Fertilidad Sanatorio Los Arroyos (Rosario). La infertilidad afecta a un % de las parejas, y en aproximadamente la mitad de los casos, es de origen masculino. El análisis tradicional del semen, continúa siendo hoy día, la herramienta diagnóstica más importante para predecir el potencial fértil del varón. Sin embargo, un alto porcentaje de parejas no consiguen el embarazo aun presentando espermogramas normales. Existe evidencia clínica que indica que los espermatozoides de hombres infértiles poseen mayor daño en el ADN que los espermatozoides. La integridad del ADN espermático dentro de los cromosomas es un pre requisito para la fecundación normal y la transferencia de la información genética paterna. Se observa una correlación negativa entre la fragmentación del ADN y su potencial fecundante, tanto in vivo como in vitro. Se ha propuesto un valor de corte del 30 % de fragmentación por encima del cual las chances de fecundación in vivo, se hace muy difícil. Por lo tanto, la evaluación del grado de fragmentación del ADN espermático en parejas que buscan embarazo tiene un alto valor predictivo tanto para el resultado de la concepción natural como de las técnicas de reproducción asistida. Más aun se ha demostrado que durante el procesamiento in vitro de muestras de semen para reproducción asistida existe riesgo de provocar daño en el ADN de los espermatozoides durante la centrifugación así como por incubaciones prolongadas. Existen un gran número de técnicas que miden la fragmentación del ADN espermático como ser: Ensayo del COMETA, Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA), DNA Breakage Detection-Fluorescence In Situ Hybridization (DBD-FISH), y Terminal dutp Nick-End Labeling (TUNEL). Recientemente se ha propuesto una nueva técnica de dispersión de la cromatina (SCD) o prueba del halo. Este es un método simple, rápido, exacto y altamente reproducible que permite evaluar la fragmentación del ADN de espermatozoides en el laboratorio clínico. La principal ventaja es que la evaluación se hace en microscopio óptico a 100x. 20

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