Taller de Actualización en Mieloma múltiple. Valencia, abril 2016 Diego E. Higuera B.

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1 Taller de Actualización en Mieloma múltiple Valencia, abril 2016 Diego E. Higuera B.

2 Acciones SOCIEDAD VENEZOLANA DE HEMATOLOGÍA EDUCACIÓN MÉDICA CONTÍNUA DECLARACIÓN DE POTENCIALES CONFLICTOS DE INTERESES Conferencia: Herramientas en el laboratorio clínico para el diagnóstico, pronóstico y seguimiento de Gammapatías Monoclonales. Conferencista: Diego E. Higuera B. ITEMS Sueldo / Honorarios profesionales Consultorías o asesorías Fondos para investigación Becas Testimonios Comité de Ética Invitación a eventos nacionales/internacionales NOMBRE EMPRESA COMERCIAL No aplica No aplica No aplica No aplica No aplica No aplica No aplica No aplica Con el objeto de asegurar un adecuado balance, independencia, objetividad y rigor científico en todas las actividades de educación continua de la SVH, los conferencistas deberán declarar a la audiencia si han sido beneficiarios de recursos financieros de empresas fabricantes o proveedoras de medicamentos, reactivos o material relacionado con su conferencia durante los últimos 12 meses. La intención de esta declaración es permitir a la audiencia determinar bajo su propio criterio si la información presentada pudiera estar influenciada por las relaciones o compromisos del expositor.

3 Inmunoglobulinas Son glicoproteínas formadas por cuatro cadenas polipeptídicas. 2 PESADAS o cadenas H (heavy), con un peso molecular de entre 55 a 77 kda. 2 LIGERAS o cadenas L (light), con un peso molecular de entre 23 a 26 kda.

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6 Gammapatías Monoclonales Constituyen un grupo heterogéneo de enfermedades y estados patológicos, caracterizados por la proliferación clonal de células plasmáticas, que producen un inmunoglobulina homogénea de carácter monoclonal.

7 Clasificación I.- MALIGNAS: 1. Mieloma Múltiple 2. Variantes de Mieloma: - Mieloma Quiescente - Mieloma No Secretor - Leucemia de Células Plasmáticas - POEMS 3. Plasmocitomas localizados 4. Macroglobulinemia de Waldenström 5. Amiloidosis Primaria 6. SLP (Sindromes linfoproliferativos) 7. Enfermedades por depósito de Inmunoglobulinas II.- NO MALIGNAS: 1. Gammapatía Monoclonal de Significado Indeterminado 2. Gammapatías secundarias

8 Gammapatías Monoclonales Tomado de: Bradwell AR. Serum Free Light Chain Analysis (2010). 6th edition. The Binding Site Group.

9 Desarrollo de células B y enfermedades asociadas

10 Epidemiología de Gammapatías Monoclonales

11 Gammapatías Monoclonales

12 Gammapatías Monoclonales ,2% % 2% 1,6% 1,6% 1,2% 1,2% López y col.congreso Venezolano de Hematología Valencia

13 Mieloma Múltiple Tomado de: Drayson y col.effects of paraprotein heavy and light chain types and free light chain load on survival in myeloma: an analysis of patients receiving conventional-dose chemotherapy in Medical Research Council UK multiple myeloma trials. Blood 2009;108:2013-9

14 Herramientas de laboratorio para el estudio de Gammapatías Hematología completa, Determinación de urea, creatinina, calcio, proteínas totales y fraccionadas LDH, FA, y β2-microglobulina. Electroforesis de proteínas en suero y orina. Inmunofijación de proteínas en suero y orina. Cuantificación de Inmunoglobulinas séricas. Determinación de Cadenas livianas libres en suero. Inmunofenotipaje. Citogenética.

15 Electroforesis de Proteínas La electroforesis es una técnica que permite la separación de moléculas en un soporte sometido a un campo eléctrico.

16 Electroforesis de Proteínas

17 Electroforesis de Proteínas Tomado de

18 Electroforesis de Proteínas Tomado de

19 Herramientas para el estudio de Gammapatías Determinación de proteínas totales y fraccionadas LDH, Ca FA y β2-microglobulina. Electroforesis de proteínas en suero y orina. Inmunofijación de proteínas en suero y orina. Cuantificación de Inmunoglobulinas séricas. Determinación de Cadenas livianas libres en suero. Inmunofenotipaje. Citogenética.

20 Inmunofijación Técnica analítica para identificar que Igs o fracción es responsable del pico o componente monoclonal.

21 Reportes de EPs e IFEs

22 Reportes de EPs e IFEs

23 Reportes de EPs e IFEs

24 Reportes de EPs e IFEs

25 Herramientas para el estudio de Gammapatías Determinación de proteínas totales y fraccionadas LDH, Ca FA y β2-microglobulina. Electroforesis de proteínas en suero y orina. Inmunofijación de proteínas en suero y orina. Cuantificación de Inmunoglobulinas séricas. Determinación de Cadenas livianas libres en suero. Inmunofenotipaje. Citogenética.

26 Cadenas Livianas Libres en suero CLL Kappa CLL Lambda

27 Cadenas Livianas Libres en suero CLL - 25 kda CLL - 50 kda 500mg Producción/día Glomérulo 10-30g/día reabsorción y catabolismo Túbulo proximal contorneado El metabolismo renal genera una vida media de las CLL de 2-6 horas. Esto contrasta con la vida media de las Igs intactas, que es de 5 21 días. Orina

28 Cadenas Livianas Libres en suero Tomado de: Katzmann et al. Clin Chem 2002; 48: ; Hutchinson CA, et al. BMC Nephrol 2008;9:11

29 Cadenas Livianas Libres en suero Sensibilidad Tomado de: Bradwell AR. Serum Free Light Chain Analysis (2010). 6th edition. The Binding Site Group.

30 Cadenas Livianas Libres en suero Sensibilidad Tomado de: Bradwell AR. Serum Free Light Chain Analysis (2010). 6th edition. The Binding Site Group. Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN Guidelines ) and in the International Myeloma Working Group Guidelines. Recomiendan el uso de las CLL en suero en el diagnostico de mieloma múltiple y patologías asociadas

31 Diagnóstico de GM

32 Herramientas para el estudio de Gammapatías Determinación de proteínas totales y fraccionadas LDH, Ca FA y β2-microglobulina. Electroforesis de proteínas en suero y orina. Inmunofijación de proteínas en suero y orina. Cuantificación de Inmunoglobulinas séricas. Determinación de Cadenas livianas libres en suero. Inmunofenotipaje. Citogenética.

33 Inmunofenotipaje Consiste en identificar células plasmáticas patológicas mediante anticuerpos monoclonales marcados con fluorescencia y patrones de expresión aberrante. Tomado de: Rawstron, A.C et. al (2008) Report of the European Myeloma Network on multiparametric flow cytometry in multiple myeloma and related disorders. Haematologica, 93,

34 Utilidad de la CMF en GM INMUNOFENOTIPO: IDENTIFICAR A LA CELULA PLASMÁTICA DIFERENCIAR LA CPn /CPm FENOTIPOS FAM (MARCADORES PRONÓSTICOS) SEGUIMIENTO: EMR

35 Cómo Discriminamos la CP Maligna de la Normal por CMF? Identificando fenotipos aberrantes Olteanu et al, Role of Flow Cytometry in Plasma Cell Myeloma, Sur Pathol Clin.2016

36 Cómo Discriminamos la CP Maligna de la Normal por CMF? Estableciendo la clonalidad Flores-Montero et al, Cytometry B 2015

37 Aplicaciones de la CMF en el Pronóstico de GM APLICACIONES DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN EL PRONOSTICO DE GM Marcadores Cualitativos CD19 CD28 CD45 CD56 CD81 CD117 CD200 Marcadores Cuantitativos % de CP (del total de células de MO) % de CP clonales (del total de CP de MO) CP normales clonales circulantes Olteanu et al, Role of Flow Cytometry in Plasma Cell Myeloma, Sur Pathol clin.2016

38 Herramientas para el estudio de Gammapatías Determinación de proteínas totales y fraccionadas LDH, Ca FA y β2-microglobulina. Electroforesis de proteínas en suero y orina. Inmunofijación de proteínas en suero y orina. Cuantificación de Inmunoglobulinas séricas. Determinación de Cadenas livianas libres en suero. Inmunofenotipaje. Citogenética.

39 Citogenética Consiste en detectar ciertas anomalías genéticas y moleculares para predecir la evolución y el pronostico del mieloma. El consenso del IMWGG define mieloma múltiple de alto riesgo en base a varias anormalidades citogenéticas t (4; 14), del (17 / 17p), t (14; 16), t (14; 20), no hiperdiploide y anomalías del cromosoma 1 se identificaron como marcadores de mal pronóstico. Sonneveld (2016) Treatment of Multiple Myeloma with high-risk cytogenetics. Según MPSVH adicionalmente se recomienda t(11;14) (q32;q23) deleción del 13q. Los Datos citogenéticas han sido incluidos en el ISS para la estratificación del riesgo.

40 Citogenética Se debe practicar al momento del diagnostico (en todos los casos de MM). En recaídas se debe realizar para pacientes que inicialmente tuvieron resultados normales o no se realizaron estudio de base.

41 Seguimiento de las GM Electroforesis de proteínas en suero y orina. Inmunofijación en suero y orina. CLLs, cociente κ/λ y diferencia cadena involucrada y cadena no involucrada. Inmunofenotipo.

42 Seguimiento de GM CLLs NCCN y IMWG Recomiendan el uso de las CLL en suero en el seguimiento de MM, AL, MMNS y MMOS y para definir respuesta completa estricta. Tomado de: Mead GP, et al. Serum free light chains for monitoring multiple myeloma. Br J Haematol 2004; 126:

43 Seguimiento de GM CLLs Tomado de: Dispenzieri A, et al. International Myeloma Working Group guidelines for serumfree chain analysis in multiple myeloma and related disorders. Leukemia 2009; 23:

44 Seguimiento de GM Inmunofenotipo Estudio sensible para la detección de CPMs residuales post-tratamiento. Tomado de: Manual de manejo práctico de MM de la Sociedad Venezolana de Hematología.

45 Pronóstico de GM

46 ISS Revisado FISH Albúmina ISS R B2M LDH Palumbo A, et al JCO (2267): 1-7 IMWG

47 Sistema de Estadio Internacional revisado (ISSr) ISS-R I SG a 5 años 82% y SLP 55% ISS-R II SG a 5 años 62% y SLP 36 % ISS-R III SG a 5 años 40% y SLP 24% ISS 1 + LDH normal + No citogenética de riesgo : del 17p, t(4;14) ó t(14;16) Todas las otras posibles combinaciones ISS 3 + Alteraciones genéticas de alto riesgo ó LDH elevada Palumbo A, et al JCO (2267): 1-7 IMWG

48 Pronóstico de Mieloma Múltiple Tomado de: Manual de manejo práctico de MM de la Sociedad Venezolana de Hematología.

49 Pronóstico de GM Citometría de Flujo Tomado de: Mateo G et al. Prognostic value of immunophenotyping in multiple myeloma: a study by the PETHEMA/GEM Cooperative study groups onpatients uniformly treated with high-dose therapy. J Clin Oncol. 2008; 26(16):

50 Pronóstico de GM Citogenética Tomado de: Mikhael et al. Management of newly diagnosed symptomatic multiple myeloma: updated Mayo Stratification of Myeloma andrisk-adapted Therapy (msmart) consensus guidelines Mayo Clin Proc. 2013

51 Pronóstico de GM Citogenética Tomado de: Fonseca Et al. Staging and prognostication of multiple myeloma. Expert Rev Hematol.2014 Feb;7(1):21-31.

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