BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

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1 INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR PA Rev.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) USO PREVISTO BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) (agar chocolate BD [agar GC II con IsoVitaleX]) y BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) (agar chocolate BD [base de agar sangre Nº 2]) son medios no selectivos para el aislamiento y cultivo de microorganismos exigentes, en especial las especies Neisseria y Haemophilus a partir de diversas muestras clínicas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. Carpenter y Morton describieron un medio mejorado para el aislamiento de gonococos en 24 h 1. La eficacia del medio, agar GC suplementado con hemoglobina y concentrado de levadura, fue demostrada en un estudio de doce medios utilizados en aquella época para el aislamiento de este organismo 2. Posteriormente, se realizaron varias mejoras al medio 3-5. En BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX), la base GC II aporta nutrientes en forma de caseína y peptonas de carne como fuentes de nitrógeno, fosfatos para mantener el ph y almidón de maíz para neutralizar los ácidos grasos tóxicos que pueden estar presentes en el agar. La hemoglobina proporciona el factor X (hemina). BD IsoVitaleX Enrichment es un suplemento definido que proporciona el factor V (nicotinamida adenina dinucleótido, NAD), esencial para la especie Haemophilus, además de vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, iones férricos y otros factores que favorecen el crecimiento de la Neisseria patógena y otros organismos exigentes. También se han añadido piridoxal y factores de crecimiento específicos para favorecer el crecimiento de bacterias gram positivas; se ha añadido piridoxal para favorecer el crecimiento de las especies Granulicatella y Abiotrophia (estreptococos con nutrición diversa) 6-9. Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) es un medio alternativo para el aislamiento de organismos exigentes a partir de muestras clínicas 7. BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) contiene peptona de proteasa, digerido de hígado y extracto de levadura como fuentes de nitrógeno y vitaminas. El cloruro sódico mantiene el equilibrio osmótico. La sangre de caballo calentada (desnaturalizada por calor) suministra el factor X (hemo) y, dado que no contiene NADasa, se necesita el factor V (nicotinamida adenina dinucleótido, NAD) para el crecimiento de Haemophilus influenzae, que además proporciona nutrientes adicionales. REACTIVOS Fórmulas* por litro de agua purificada BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Digerido pancreático de caseína 7,5 g Peptona de proteosa No.3 15,0 g Peptona de carne seleccionada 7,5 Digerido de hígado 2,5 Almidón de maíz 1,0 Extracto de levadura 5,0 Fosfato dipotásico 4,0 Cloruro sódico 5,0 Fosfato monopotásico 1,0 Sangre de caballo (calentada) 7% Cloruro sódico 5,0 ph 7,4 ± 0,2 Agar 12,0 Hemoglobina 10,0 IsoVitaleX Enrichment 12,0 ml Piridoxal 0,01 g Factores de crecimiento 0,5 ph 7,2 ± 0,2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PA

2 BD IsoVitalex Enrichment contiene los siguientes factores de crecimiento (fórmula* por litro de agua purificada): Vitamina B 12 0,01 g L-glutamina 10,0 Adenina 1,0 Clorhidrato de guanina 0,03 Acido p-aminobenzoico 0,013 Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) 0,25 Pirofosfato de tiamina 0,1 Nitrato férrico 0,02 Clorhidrato de tiamina 0,003 Hidrocloruro de cisteína 25,9 L-cistina 1,1 Glucosa 100,0 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PRECAUCIONES. Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar las placas a una temperatura de 35 ± 2 C en una atmósfera aerobia con dióxido de carbono. Efectuar lectura de las placas después de h y h de incubación. Cepas* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria meningitidis ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Sin inocular BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) y BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Crecimiento de aceptable a excelente Marrón chocolate, opaco, posiblemente poco homogéneo * Además, BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) puede analizarse con Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 para delatar el crecimiento de los estreptococos con nutrición diversa 8,9. PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), ambos suministrados en placas Stacker 90 mm. Controladas microbiológicamente. Material no suministrado Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. PA

3 Tipos de muestras Estos medios se pueden utilizar para todo tipo de muestras clínicas potencialmente infectadas con organismos exigentes, en especial (pero no exclusivamente) las muestras de zonas corporales esencialmente estériles (por ejemplo, líquido cefalorraquídeo, abscesos). Se utiliza principalmente para el aislamiento no selectivo de Neisseria, Haemophilus y otras bacterias que pueden no crecer en los medios de agar sangre utilizados normalmente, tal como el agar Columbia con sangre de carnero al 5%. Además, BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) puede utilizarse para el aislamiento de las especies Abiotrophia y Globicatella (estreptococos con nutrición diversa) 8,9. Los medios también se utilizan como medios de subcultivos de hemocultivos. (Véase también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Recogida y transporte de las muestras Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus y otros organismos exigentes son sensibles a las condiciones ambientales adversas. Por consiguiente, se deben utilizar medios de transporte adecuados para todas las muestras. Las muestras deben ser enviadas al laboratorio tan pronto como sea posible y no deben transcurrir más de 24 horas, incluso si se utilizan medios de transporte. La temperatura de transporte óptima es de C. No refrigerar! 10,11 Procedimiento de análisis Una vez recibida la muestra en el laboratorio, extenderla tan pronto como sea posible sobre BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). La placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Si la muestra se ha obtenido de una zona corporal con flora normal, también debe inocularse en los medios selectivos adecuados, según el agente patógeno que se desee aislar. Para Neisseria gonorrhoeae, se debe incluir una placa BD Martin-Lewis Agar, modified o BD GC- Lect Agar y, para Haemophilus, una placa BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin. Incubar las placas a una temperatura de 35 ± 2 C en una atmósfera aerobia con dióxido de carbono. Efectuar lectura de las placas después de h y h de incubación. Resultados En la tabla siguiente se indica la morfología característica de las colonias: Organismos BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) y BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Haemophilus influenzae Pequeñas (1 mm), húmedas, nacaradas con un olor de "ratón" característico Neisseria gonorrhoeae Pequeñas, de color blanco grisáceo a incoloro, mucoides Neisseria meningitidis Medianas a grandes, gris azulado, mucoides Streptococcus pneumoniae Colonias pequeñas, planas o más grandes, mucoides verdosas, las colonias circundantes pueden ser verdosas Granulicatella (Abiotrophia) Colonias pequeñas grises verdosas, el medio adiacens* alrededor de las colonias pueden ser verdoso CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) y BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) son medios enriquecidos no selectivos en los que crecen bacterias exigentes y no exigentes, incluida la flora normal. Por tanto, también se recomienda inocular las muestras de zonas corporales con flora normal en medios selectivos apropiados. El término bacterias exigentes se refiere a las bacterias que no crecen o no crecen bien en los medios de aislamiento primario utilizados normalmente con sangre de carnero: por ej., Haemophilus, Neisseria patógena y muchos otros organismos. Consultar las referencias para PA

4 obtener las descripciones detalladas acerca del tipo de muestras que deben inocularse en este medio y el tipo de organismos para los que se utiliza este medio para aislamiento 8,9,11,12. El número y los tipos de especies bacterianas que se dan como agentes infecciosos es muy alto. Por tanto, antes de utilizar sistemáticamente el medio para microorganismos de reciente descripción o raramente aislados, el usuario debe analizar su conveniencia mediante cultivos puros del microorganismo en cuestión. No se ha demostrado que BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) favorezca el crecimiento de las especies Abiotrophia y otros estreptococos con nutrición diversa. Consultar las referencias para obtener información acerca de los estreptococos con nutrición diversa 6,8,9,13. REFERENCIAS 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11 th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ENVASE/DISPONIBILIDAD BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas Nº de cat Medios en placa listos para usar, 120 placas PA

5 BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas Nº de cat Medios en placa listos para usar, 120 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA

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