Estudio multicéntrico de sobre-estadiaje ganglionar en pacientes con cáncer de colon mediante técnica molecular-osna Resultados preliminares

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1 Estudio multicéntrico de sobre-estadiaje ganglionar en pacientes con cáncer de colon mediante técnica molecular-osna Resultados preliminares M. Cuatrecasas, L. Bernet, MC. Méndez, C. Villar, T. Pereda, K. Elorriaga, L. Herrero, I. Aldecoa, J. Tarragona 1 Dra. Míriam Cuatrecasas Hospital Clínic Barcelona

2 Introducción El tratamiento del CCR en estadios iniciales I y II (pn0 M0) es quirúrgico. Las guías oncológicas no recomiendan quimioterapia adyuvante Hasta un 25% de pacientes en estadios I y II progresan con recidivas o metástasis Las metástasis ganglionares determinan el tratamiento con quimioterapia adyuvante y son un importante factor pronóstico 2010: 7 ª ed. TNM: : El estadio ganglionar influye en la supervivencia en todos los estadios T 5-year survival rate (%) Primary tumour (T) Nodal status 97.4/87.6/68.7 T1 N0/N1/N2 96.8/87.7/76.6 T2 N0/N1/N2 87.5/68.7/47.3 T3 N0/N1/N2 71.5/50.5/27.1 T4 N0/N1/N2 Gunderson et al., JCO 28: , 2010

3 Introducción Las metástasis ganglionares no detectadas con H&E podrían ser marcadores de diseminación tumoral sistémica en pacientes en estadios iniciales de CCR Células tumorales aisladas (deptumour-cell deposits <0,2 mm; ITC) Micrometastasis (0,2 2,0 mm) Métodos moleculares más sensibles (inmunohistoquímica o RT-PCR) permitirían detectar metástasis ganglionares ocultas con H&E e identificar pacientes pn0 con riesgo de recidiva que se beneficiarían de quimioterapia adyuvante

4 Estadiaje ganglionar (pn) CCR Método diagnóstico estándar Disección ganglios post-fijación formol Un corte teñido H&E de 12 ganglios linfáticos Problema No se analiza el 98% del tejido Sesgo de localización tisular falsos negativos 11% 1 24% 2,3 Pueden no detectarse metástasis ganglionares Probabilidad de recidiva Consecuencias Pacientes falsos negativos con estadios I o II y no reciben quimioterapia Pacientes infraestadiados: tasas de suprvivencia significativamente peores 4, Saha et al Clinical trial John Wayne CI unpublished Sysmex results Swanson et al Rahbari et al

5 C-CLOSER I Colon Complete Lymphadenectomy Osna Study for Enhanced Review (in Colon cancer) Estudio sobre el estadiaje ganglionar de pacientes con cáncer de colon mediante técnica molecular Participantes Kick-off meeting 23/09/2011 Sevilla Hospital Clínic (Barcelona) Hospital Universitario Arnau de Vilanova (Lérida) Hospital Universitario Ramón y Cajal (Madrid) Hospital Universitario 12 de Octubre (Madrid) Hospital Severo Ochoa (Leganés) Hospital de Txagorritxu (Vitoria) Hospital Lluís Alcanyis (Xàtiva) Hospital Reina Sofía (Madrid) Hospital Costa del Sol (Marbella) Hospital Virgen de la Macarena (Sevilla) Instituto Oncológico San Sebastián (Donostia)

6 Objetivos del estudio Evaluar las diferencias de estadiaje ganglionar en pacientes con cáncer de colon en estadios I II, utilizando el sistema OSNA (método de ensayo), versus H&E (método estándar) Determinar la viabilidad operativa de la disección en fresco de los ganglios linfáticos

7 OSNA = One Step Nucleic Acid Amplification Ganglio Homogenización Centrifugación Amplificación Detección CK19 Real-Time 5 min 1 min 16 min; 65 C

8

9 OSNA: Nivel de corte Tamaño de metástasis CK19 mrna Macro-Metástasis Micro-Metástasis ITC / fondo copias/ µl copias/ µl* -

10 Metodología Pieza colectomía en fresco Disección ganglios linfáticos en fresco (<50 ) Identificar tubo Ependorff y cassette para cada ganglio linfático, con el mismo número Según tamaño del ganglio, sección central 1 mm o ½ ganglio para histología (HE) El resto del ganglio en el tubo de Ependorff, se guarda a -80C Análisis diferido con sistema OSNA según protocolo *Store a slice in case needed to IHQ CK19 analysis

11 Metodología Ganglios linfáticos aislados post-fijación en formol Identificar ganglios linfáticos residuales que no se han disecado en fresco Cortar sección central o ½ del ganglio para procesado histológico convencional Lymph nodes Se determinará el estadio ganglionar pn utilizando los cortes teñidos con H&E (fresco y post-fijación en formol) 1 x H&E *Store one slice in case needed to IHQ CK19 analysis 11

12

13 Diagrama de flujo Fixation of a central section in formalin Study of a central section by H&E Resection of the surgical segment Identification of lymph nodes in fresh segments 1 mm central section Fixation of remaining segment in formalin Freezing of rest of lymph node Identification of residual lymph nodes Study of residual lymph nodes by H&E Study of the frozen nodes by OSNA

14 1 MM

15 15

16 1 MM Sysmex Life Science OSNA colon cancer C-CLOSER I Portugal 16

17 CK 19

18 Resultados - OSNA ptnm n % ptis pt pt pt pt pt4a Total

19 Resultados - OSNA Estadiaje Hematoxilina- n % Eosina pn pn1a pn1b pn1c pn2a Total

20 Resultados - OSNA Estadiaje OSNA Hematoxilina- pn0 pn1a pn1b pn2a pn2b Total Eosina pn0 62 (56.88) 21 (19.27) 19 (17.43) 4 (3.67) 3 (2.75) 109 pn1a 7 (53.85) 2 (15.38) 4 (30.77) 13 pn1b 1 (25.00) 3 (75.00) 4 pn1c 1 (25.00) 1 (25.00) 2 (50.00) 4 pn2a 2 ( (33.33) 3 Total 63 (47.37) 30 (22.56) 26 (19.55) 10 (7.52) 4 (3.01) 133

21 Estadiaje ganglionar e CCR Rahbari et al JCO Molecular detection of tumor cells in regional lymph nodes is associated with disease recurrence and poor survival in nodenegative colorectal cancer: A systematic review and Meta-Analysis Meta-análisis 39 estudios pacientes Estadios I o II con H&E (pn0) Detección metástasis ganglionares con IHC (30), RT-PCR (7), ambas (2) Supervivencia global HR Supervivencia libre de enfermedad HR Supervivencia asociada a enfermedad HR Métodos moleculares de estadiaje ganglionar identificarían pacientes pn0 con H&E, con riesgo de progresión: candidatos a quimioterapia adyuvante El significado pronóstico de la detección molecular de células tumorales es independiente del método utilizado, de la diana molecular, y del número de ganglios linfáticos aislados

22 Conclusiones El método OSNA es más sensible que la tinción con H&E para detección de metástasis ganglionares Objetivamos un 43,12% de sobreestadiaje ganglionar molecular con el método OSNA versus el estadiaje patológico con H&E La presencia de metástasis ganglionares detectadas por método OSNA podría ayudar a seleccionar aquellos pacientes con cáncer de colon en estadios I y II candidatos a tratamiento adyuvante La disección en fresco de los ganglios linfáticos del mesocolon es factible y no representa una sobrecarga de trabajo

23 Agradecimientos Equipo humano de SYSMEX Dr. Jordi Tarragona - H. Universitari Arnau de Vilanova, Lleida Dra. Teresa Pereda - H. Costa del Sol Dr. Kepa Elorriaga I. Oncológico de San Sebastián Dra. Noemí García / Dr. José Palacios - H. Ramón y Cajal Dra. Laia Bernet - H. Lluis Alcanyis Dra. Isabel Guerra / Dr. Jose Domingo Sardon - H. Universitario Alava-Txagorritxu Dra. Carolina Ibarrola /Dra. Guadalupe López Alonso /Dra.Yolanda Rodriguez - H. 12 de Octubre Dra. Sofía Pereira/ Dr. Ricardo Gonzalez - H. Virgen Macarena Dra. Maria Carmen Méndez/Dra. Elvira Gonzalez - H. Severo Ochoa Dr. Carlos Villar / Dr. Manuel Medina - H. Universitario Reina Sofía 23

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