Estrategias Biotecnológicas para el Mejoramiento Genético del Ganado Bovino de Tamaulipas

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1 Estrategias Biotecnológicas para el Mejoramiento Genético del Ganado Bovino de Tamaulipas Ana María Sifuentes Rincón*, Manuel Parra Bracamonte, Pascuala Ambriz Morales, Víctor Moreno Medina, Williams Arellano Vera Centro de Biotecnología Genómica del Instituto Politécnico Nacional Blvd. Del Maestro Esq. Elias Piña. Col. Narciso Mendoza. C.P Reynosa Tamaulipas Resumen Un proceso primordial para asegurar el mejoramiento genético animal es la evaluación genética y aunque algunas Asociaciones de productores de Ganado de Registro, han implementado ya el uso de modelos para la obtención de DEPs, el conocimiento científico y tecnológico alcanzado en los últimos años particularmente el relacionado con el análisis del genoma bovino, permite por medio de pruebas de ADN el identificar animales portadores de las variantes génicas asociadas a tener un mejor desempeño para características con importancia económica. El uso eficiente (en términos de ganancia económica para el ganadero y productiva para el hato) de las pruebas de ADN para asistir las estrategias de mejoramiento requiere que el panel de marcadores seleccionados para complementar las evaluaciones genéticas sea probado para medir su efecto en las poblaciones locales. Esto requiere entonces que las poblaciones de evaluación cuenten con registros de los rasgos productivos que se desean mejorar. La cuantificación del porcentaje de la variación genética que explica una prueba de ADN, podría dar al ganadero la posibilidad de evaluar el mérito comercial del producto. El objetivo del proyecto fue establecer un panel de marcadores moleculares que muestren efecto significativo en la ganancia de peso del ganado de carne. Se diseñó un panel de que contiene 258 marcadores 10 variantes de genes con efecto mayor en rasgos productivos incluyendo aquellos que han sido validados para rasgos de calidad de la carne y de leche; 4 marcadores con mutaciones asociadas con enfermedades recesivas; 44 variantes génicas localizadas en genes del eje somato trópico lo que es de interés dado que en México los pesos del animal a diferentes etapas son los parámetros productivos que más se registran y la base de las evaluaciones genéticas y 200 SNP s recomendados por la ISAG para la determinación y verificación de paternidad. Se determinó que algunos de los marcadores del panel (MSTN-Q204x y F94L), CAPN1-316 y 4751, CAST-T1 pueden ser utilizados en como herramienta para el Manejo Asistida por Marcadores en las razas de ganado bovino local. Se identificaron uno y cuatro marcadores asociados a peso al nacimiento y peso al destete, respectivamente, mientras que en la Simmental se asociaron dos marcadores a peso al destete y uno al peso al año, es necesaria la validación de estas asociaciones a fin de determinar su potencial uso para el Manejo Asistida por Marcadores en las razas de ganado bovino

2 Palabras Clave: Bovinos carne, Marcadores moleculares, Introducción En Tamaulipas como en muchos otros estados de México los Programas de Mejoramiento Genético incluyen la compra-venta de sementales clasificados como de Alta calidad Genética. Sin embargo, cuando el material genético no proviene de un proceso de evaluación genética, disminuye la probabilidad de que el progreso genético sea exitoso. En décadas pasadas, la superioridad de un semental se basaba en el número de premios obtenidos en las distintas exposiciones, posteriormente las evaluaciones genéticas se basaron en pruebas de comportamiento en estaciones centrales donde se consideraban únicamente valores fenotípicos; hoy en día las evaluaciones genéticas están dirigidas a mejorar características productivas a través de las diferencias esperadas de la progenie (DEPs) (Lastra et al., 2001; Martínez, 1999) y con la incorporación de las herramientas biotecnológicas en el área pecuaria se han venido desarrollando una serie de herramientas basadas en el análisis del genoma de los animales cuyo objetivo primordial es precisar las predicciones de productividad y/o mérito genético que a la fecha se obtienen con los DEPs. La atención particular sobre el mejoramiento productivo y reproductivo del ganado bovino ha sido realizada desde su aparición como actividad económica, mediante la selección tradicional basada principalmente en el fenotipo del animal, sin embargo el proceso de mejora es lenta y por ende poco eficiente (Van Eenennam, 2007). En la actualidad, la implementación de la biotecnología en la industria pecuaria ha permitido caracterizar la variabilidad genética presente en la secuencia de DNA de los animales, alcanzando una mejor comprensión de la relación genotipo-fenotipo, generando diferencias en la selección de individuos como progenitores candidatos, acortamiento del intervalo generacional y el incremento en la ganancia genética (Dekers y Hospital, 2002). En la actualidad la implementación de programas de mejoramiento genético en en ganado bovino ya incluye el uso de la información biológica, económica y matemática para precisar la determinación del mérito genético del animal a favor de una característica de interés (productivo, reproductivo o estético), lo cual permite llevar a cabo la selección de animales superiores a una edad temprana, alcanzando mayor rendimiento en los sistemas productivos. La búsqueda de los genes asociados con características de importancia productiva es un ámbito dentro de la genómica del ganado que ha sido ampliamente explorado y que pretende en menos tiempo lograr lo que se ha venido haciendo por años en la crianza de bovinos, lo cual ha ayudado a la definición de mapas genómicos cada vez más precisos, y que tienen la ventaja de ser la base para el estudio de otras especies domésticas (Gibbs et al., 2004). Los marcadores moleculares son segmentos de ADN cuya herencia se puede rastrear y sirven como indicador de las diferencias genéticas de los individuos. Las aplicaciones potenciales del Diagnóstico molecular basado en el uso de marcadores

3 de ADN van desde el establecimiento exacto de paternidades, hasta la determinar si los progenitores son portadores de enfermedades genéticas o algún defecto o para establecer la presencia de variantes génicas asociadas a características económicamente importantes. Una de las principales ventajas de esta tecnología, es que se pueden alcanzar en menor tiempo los objetivos del mejoramiento deseado en un hato sobre todo en el caso de aquellas características que son que son difíciles o costosas de medir, por ejemplo: composición y calidad de la canal, eficiencia alimenticia, eficiencia reproductiva, resistencia y predisposición a enfermedades genéticas. Objetivos Establecer un panel de marcadores moleculares que muestren efecto significativo en la ganancia de peso del ganado de carne. Objetivos específicos Tabla 1.- Poblaciones de Tamaulipas analizadas Raza Id Hato Ubicación H1 Guemez Charolais H2 San Fernando H3 Gustavo Díaz Ordaz H4 Cd. Victoria H5 Cd. Victoria Brangus H6 Guemez H7 Cd.Victoria Simmental-Simbrah H8 Aldama Caracterización genético-molecular de la población parental con marcadores SNPs. Determinación del efecto de los genotipos sobre los parámetros productivos considerados en el estudio. Materiales y Métodos Material biológico En el presente estudio se analizaron poblaciones de ganado de carne del estado de Tamaulipas. De acuerdo a la disponibilidad de participación se incluyeron hatos de las razas Charolais, Brangus Rojo y Simmental-Simbrah. En total se obtuvieron muestras de pelo de 429 animales de ranchos ubicados en diferentes municipios (Tabla 1). En de la mayoría de los hatos se obtuvo información productiva de pesos al año, peso al destete y cuando fue posible peso al año.

4 Genotipificación de variantes génicas en genes candidatos Con base a los reportes de la literatura, inicialmente se diseñó un panel de 100 SNPs localizados en genes candidatos para rasgos productivos y reproductivos (Tabla 2). Con base a este diseño se tipificaron muestras de ganado Charolais y Brangus para determinar el grado de polimorfismo en las poblaciones locales. Las muestras fueron tipificadas en Geneseek a Neogen Company usando el Sistema Sequenom MassARRAY utilizando un panel de 100 SNPs localizados en genes candidatos para rasgos productivos y reproductivos. De acuerdo a los %CR (call rate) se seleccionó un panel de 50 SNPs que dieron un promedio de 96.83% de Call Rate (CR). El total de la población muestreada fue tipificada con 258 SNP s que incluyeron 10 variantes de genes con efecto mayor en rasgos productivos incluyendo aquellos que han sido validados para rasgos de calidad de la carne y de leche; 4 marcadores con mutaciones asociadas con enfermedades recesivas, 44 variantes génicas localizadas en genes del eje somato trópico lo que es de interés dado que en México los pesos del animal a diferentes etapas son los parámetros productivos que más se registran y con mucho la base de las evaluaciones genéticas, el análisis de un gran número de animales permitirá llevar a cabo análisis de asociación y de validación de SNP s asociados a estas características y finalmente, 200 SNP s recomendados por la ISAG para la determinación y verificación de paternidad. Una vez obtenidos los genotipos, se estimaron las frecuencias genotípicas y alélicas de los ocho marcadores analizados utilizando el programa Cervus 3.0 (Kalinowski et al., 2007). Se analizó el equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) y se evaluó la diferenciación genética entre las poblaciones de estudio para los tres marcadores asociados a calidad de la carne, utilizando el programa Genepop 4.2 (Rousset, F, 2008). En el análisis de diferenciación genética, la hipótesis nula probada fue Ho = la distribución alélica es idéntica a través de las poblaciones. Para poblaciones, la prueba se realiza automáticamente por medio de tablas de contingencia por pares de poblaciones y se lleva a cabo una estimación no sesgada del valor de P ó Prueba exacta de Fisher como la describen Raymond y Rousset (Rousset, F, 2008). En el caso de los marcadores específicos para verificación y asignación de paternidad, Los parámetros básicos de diversidad como frecuencias alélicas, heterocigocidad esperada (He), contenido de información polimórfica (PIC) y desviación del equilibrio Hardy-Weinberg (HWE) se estimaron con el Cervus 3.0 (Kalinowski et al., 2007). Este programa también se utilizó para determinar los valores de Probabilidad de identidad (PI), las probabilidades de exclusión (PE1) en ausencia del genotipo de un segundo padre y (PE2) dado el genotipo de un segundo padre, así como para realizar las asignaciones y/o verificaciones de paternidad considerando el módulo de alta astringencia, con el fin de incrementar el nivel de confianza en la asignación Asociación genotipo/fenotipo El análisis de asociación entre las características productivas y los genotipos obtenidos, se realizó únicamente en las poblaciones Charolais y Simmental-Simbrah, las poblaciones de Brangus Rojo no fueron contempladas por falta de datos productivos.

5 Las variables fueron considerando diferentes variables como raza, sexo, edad, época de nacimiento y genotipo de los marcadores analizados. Los modelos empleados para el análisis de asociación fueron ajustados utilizando el procedimiento piecewise differentiable method (PDIFF). La estimación de las medias de cuadrados mínimos, la comparación de medias y nivel de significancia (p<0.05) de las variables se realizó con método de mínima diferencia significativa del paquete estadístico SAS 9.0 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Resultados De los 58 marcadores asociados a rasgos productivos, enfermedades genéticas y con potencial de asociación a rasgos de crecimiento, 53, 47 y 48 fueron polimórficos para las razas Charolais,Simmental-Simbrah y Brangus rojo, respectivamente. Tabla 2.- Frecuencia de portadores de dos alelos del gen MSTN en ganado Charolais Hato Frecuencia de portadores Q204X F94L % 22.7% % 9.09% 3 5.4% 2.7% % 28.57% Total 13.13% 17.67% En ninguna de las poblaciones de Brangus y Simmental-Simbrah estudiadas, se encontraron portadores de los alelos asociados a ASS y DUMPS, doble músculo o EAG- V. Sin embargo, en las poblaciones de la raza Charoláis se encontraron animales portadores para las variantes génicas asociadas a la EAG- V y al doble músculo (Tabla 2). Un paso esencial en las estrategias de mejoramiento genético es la selección de los animales con mayor mérito genético.se determinaron los valores de exclusión del panel de 200 SNP s en cada una de las poblaciones y se demostró que este panel tiene poder estadístico para la identificación, verificación y asignación de paternidad en tres razas de ganado bovino de carne. Actualmente los valores genéticos son expresados en forma de Diferencia Esperada en la Progenie y es la forma más exacta de analizar la productividad de un animal y/o un hato y por lo tanto es utilizada como una herramienta muy útil en las decisiones de selección.

6 Determinación del efecto de los genotipos sobre los parámetros productivos considerados en el estudio. En la población de la raza Charolais, el análisis de asociación indicó que el marcador PRLc.+2723T>C tiene un efecto significativo (p=0.0350) sobre el peso al nacimiento. La media del peso en los animales con el genotipo homocigoto CC (44.69 kg) fue 6 kg mayor que el genotipo homocigoto TT y el heterocigoto CT (38.5 Kg) (Tabla 3). Tabla 3.- Medias de minimos cuadrados del efecto genotípico de marcadores del gen de la prolactina sobre peso al nacimiento de becerros Charolais Loci (valor de P) Genotipo n MMC EE PRLc.+2723T>C (P=0.0350) CC a CT b TT b En esta misma raza se encontró que cuatro marcadores localizados en los genes DGTA1, GHR y LTF, tienen un efecto significativo sobre el peso al destete (Tabla 4). En estos marcadores el efecto de los genotipos da diferencias de hasta 19 kg entre la media del peso al destete. Tabla 4.- Medias de mínimos cuadrados del efecto genotípico de marcadores en genes candidatos sobre Peso al destete de becerros Charolais Loci (valor de P) Genotipo n MMC EE DGAT1-K232A_G>A-a AA (P= )18 GA GG 0 DGAT1-K232A_C>A-a AA 0 (P=0.0210)16 CA CC GHR-6.1 AA 0 (P=0.0226) AG GG LTF+32G>C (P=0.0207) GG GC CC 0

7 Para la raza Simmental, no se encontró asociación de los marcadores para peso al nacimiento, pero si para peso al destete y peso al año (Tablas 5 y 6). Los marcadores DGAT1-K232A_C>A-g y LEP-3100C>T localizados en los genes DGTA1 y LEP, respectivamente, tuvieron efecto significativo sobre el peso al destete. La media de los pesos en los genotipos homocigotos CC del marcador DGAT1-K232A_C>A-g fue 18 Kg mayor que el genotipo heterocigoto CA, y para el marcador LEP-3100C>T, la media de los genotipos CT ( Kg) fue de 21 a 25 Kg mayor que los genotipos homocigoto TT y CC, respectivamente. Tabla 5- Medias de mínimos cuadrados del efecto genotípico de marcadores en genes candidatos sobre Peso al destete de becerros Simmental Loci (valor de P) Genotipo n MMC EE DGAT1-K232A_C>A-g (P=0.0377) CC CA AA 0 LEP-3100C>T (P=0.0249) CC CT TT En la raza Simmental, también se encontró asociación del marcador GHR-6.1 con el peso al año. Los animales con genotipo heterocigoto CT fueron más pesados que los animales con genotipo TT (Tabla 6). Tabla 6- Medias de mínimos cuadrados del efecto genotípico del marcadores GHR 6.1 del receptor de la hormona de crecimiento sobre peso al año de animales Simmental Loci (valor de P) Genotipo n MMC EE GHR-6.1 (P=0.0369) AA a AG a GG b

8 Discusión Marcadores asociados a desórdenes genéticos Las pruebas de ADN son una herramienta que permite a las Asociaciones Ganaderas obtener importante información sobre los portadores de enfermedades genéticas lo que hace posible su exclusión como reproductora o manejo adecuado dentro del hato, y de esta forma se puede controlar la diseminación y eventual eliminación de los portadores. En el caso de los alelos asociados al doble músculo de manera muy interesante se encontraron portadores para el alelo Q204X, el cual es un alelo específicamente encontrado en la raza Charolais, así como también portadores del alelo F94L el cual es también un alelo asociado al doble músculo, que se ha encontrado en mayor frecuencia en la raza Limousine, sin embargo hay algunos reportes de su presencia en la raza Charolais (Dunner, et al, 2002). Para el alelo Q204X se encontraron en la población total de 26 portadores (13.13%) y entre hatos las frecuencias de portadoras variaron de 2 a 21.8%. En el caso del alelo F94L, la frecuencia en la población total fue del 17.67%, y entre hatos las frecuencias variaron del 2.7 al 28.5%.La mutación F94L del gen de la miostatina bovina, es una transversión de citosina a adenina en el exón 1 del gen (GDF8g.433C A), que causa una sustitución aminoacidica de Leucina por Fenilalanina (F94L); Grobet et al., 1998; Dunner et al., 2003). La mutación F94L, se presenta en una región de la proteína que se sabe que es un dominio inhibitorio del propéptido de MSTN (Grobet et al., 1998; Dunner et al., 2003;Lee, 2004). Esta mutación se ha reportado en diferentes razas de ganado bovino y se ha demostrado que su efecto no es igual al de otras mutaciones como la Q204X que se asocia a reducida fertilidad y distocia, por lo tanto la F94L, se ha propuesto como un marcador candidato para hacer estrategias de intogresion del alelo y obtener los beneficios que la condición de doble musculo ofrece a la industria de la carne como son mejorar considerablemente las características de la canal. En México es el primer reporte de la presencia de esta mutación en la raza Charolais, recientemente Vankan y cols realizaron un escaneo de esta mutación en diferentes razas de ganado bovino australiano y no detectaron la presencia de la mutación en la Charolais, sin embargo Dunner et al., en el 2003 reportaron la presencia del alelo en esta raza aunque en muy baja frecuencia. En México, los productores de la raza Charolais reportan que han optado por limitar e incluso eliminar su presencia en el hato, debido a los problemas de distocia. Para lograrlo, ellos se han basado en la inspección visual de los animales buscando las características del fenotipo DM. La presencia del alelo en las poblaciones de Charolais analizadas puede ser consecuencia de que los animales heterocigotos o portadores del alelo son difíciles de diferenciar de los portadores normales, ya que los portadores heterocigotos no muestran el marcado desarrollo muscular que es característico de los animales DM. En situaciones como esta, las pruebas de ADN representan una herramienta de valiosa, ya que esta información dará al productor la oportunidad de decidir y manejar de acuerdo al objetivo del hato las ventajas y desventajas productivas y reproductivas asociadas a la presencia de esta condición genética (Keele, 2001).

9 En el estudio también se encontraron dos portadores (1%) del alelo asociado a la enfermedad de almacenamiento del glucógeno tipo V (EAG-V). Esta es una enfermedad muscular inducida por una mutación puntual en el gen de la enzima glucógeno fosforilasa, lo que causa intolerancia al ejercicio, mialgia y mioglobinuria recurrente. Son pocos los reportes sobre la prevalencia de este desorden recesivo en ganado bovino y en ganado Charolais la mayoría de los reportes son casos de portadores (Distl o, 2005). En México, Sifuentes et al., han reportado la presencia de portadores en ganado Charolais Mexicano, el caso más relevante de este resultado, fue la identificación de un portador macho, el cual a la fecha tiene al menos 38 crías registradas en las bases de datos de la Asociación Charolais HerdBook de Mexico (34 Machos y 4 hembras) y a las cuales no se ha realizado la prueba de ADN para identificar el alelo recesivo. Aun cuando las implicaciones productivas de la enfermedad de almacenamiento del glucógeno tipo V para animales portadores no han sido reportadas, el efecto de la presencia de portadores en los hatos es potencialmente dañino. Marcadores asociados a calidad de carne El desarrollo de pruebas de ADN para predecir la calidad de la carne y la productividad, las que a la fecha han alcanzado mayor difusión son las de rasgos sensoriales de la carne, específicamente suavidad y contenido de grasa intramuscular (marmoleo). La suavidad o terneza de la carne depende fuertemente de la proteólisis llevada a cabo durante su maduración post-mortem (16,17). Para este rasgo, se han reportado una serie de marcadores moleculares que se asocian a mayor suavidad, sin embargo, los dos marcadores localizados en el gen de la micro-calpaína 1 (CAPN1-316 y CAPN1-4751) (Parra et al., 2009; Phocas F 2009) y dos ubicados en el gen de la Calpastatina (CAST), son a la fecha los más estudiados y su efecto sobre la suavidad ha sido validado (Van Eenennaam AL,2007). El marcador CAPN1-316, es una transversión G/C en la posición 5709 del exón 9 del gen CAPN1 mientras que el marcador CAPN es una transición de C/T localizada en la posición 6545 entre el intrón 17 y el exón 18 del mismo gen. En ambos marcadores el alelo C ha sido reportado y validado como favorable para la suavidad de la carne (Van Eenennaam AL, 2007). El marcador UoG CAST es una transversión G/C que se encuentra en la posición 282 entre el exón 5 y 6 y el CAST-T1 es una transición G/A localizada la región 3 no traducible del gen. Los alelos C y A, respectivamente se han identificado como favorables para la suavidad de la carne en bovinos (Van Eenennaam AL, 2007). En México no se cuenta con amplia información sobre la calidad de la carne de bovinos, esto en parte se debe a que aún no están completamente definidos los criterios para su clasificación (Delgado et al.,2005). Sin embargo, dado que la aplicación de la biotecnología ha alcanzado a la industria de la carne y el uso del diagnóstico molecular de genes asociados a su calidad están disponibles para los ganaderos, es de interés dar el primer paso para determinar las frecuencias alélicas de estos marcadores en ganado de registro, ya que de acuerdo a la cadena productiva que prevalece en México, cualquier estrategia de mejoramiento genético empieza en las razas puras y para rasgos complejos como la calidad de la carne, se esperaría que el impacto de este mejoramiento se refleje en el ganado de sacrificio.

10 Los marcadores de calidad de la carne analizados en este estudio están incluidos en las pruebas comerciales para suavidad y marmoleo de la carne, por lo que se ha reportado el efecto favorable de cada variante alélica (Van Eenennaam AL, 2007). De acuerdo a las frecuencias alélicas y genotípicas obtenidas en las poblaciones analizadas, las frecuencias de los alelos favorables para los marcadores CAST-T1 (alelo A) y CAPN (alelo C), fueron de moderadas a altas en las tres razas; mientras que para el marcador CAPN316 el alelo reportado como desfavorable fue el de mayor frecuencia en la raza Simmental y moderado en la Charolais y Brangus. Recientemente, dos de los cuatro marcadores analizados en este trabajo han sido estudiados en toretes de ganado Charolais Mexicano (31) encontrándose que el marcador CAPN tiene efecto significativo sobre el área del músculo Longissimus dorsi (REA) y grasa intramuscular (IMF) medidos por ultrasonografía; mientras que el marcador TG5 mostró una tendencia de asociación al grado de rendimiento (YG), Las frecuencias encontradas para los tres marcadores de suavidad de la carne en las poblaciones de las razas Charolais y Brangus estudiadas justifican la implementación de estrategias de manejo tendientes a aumentar su frecuencia así como para diseñar estudios para evaluar su efecto fenotípico del manejo asistido por marcadores. Recientemente, Tait Jr. Et al., 2014 realizaron un estudio en el que confirmaron en poblaciones sometidas a selección asistida por los marcadores CAPN1 (316 y 4751), CAST-T1 y DGTA1 el efecto de estos marcadores genéticos en la calidad de la carne por lo que los sugieren como herramientas para el manejo asistido por marcadores. Los resultados obtenidos en este proyecto permiten concluir que se cuenta con un panel de SNPs con poder estadístico para la identificación de marcadores asociados con rasgos económicamente relevantes, enfermedades genéticas y para la verificación y asignación de paternidad en tres razas de ganado bovino de carne: Charolais, Simmental-Simbrah y Brangus Rojo. Algunos de los marcadores del panel (MSTN- Q204x y F94L), CAPN1-316 y 4751, CAST-T1 pueden ser utilizados como herramienta para el Manejo Asistida por Marcadores en las razas de ganado bovino local. Se propone que cada Asociación ganadera en México, considere buscar apoyos para implementar programas para el uso de las herramientas de diagnóstico molecular como una estrategia de monitoreo continuo de la salud, productividad y calidad genética de los hatos. Es importante continuar con la validación de los resultados obtenidos a fin de sentar las bases para el uso de tecnologías más avanzadas como la selección genómica en las poblaciones de Tamaulipas.

11 Referencias Dekkers, J.C.M. y Hospital, F. (2002). The use of molecular genetics in the improvement of agricultural populations. Nature Reviews of Genetics. Vol. 3, no., p DOI: /nrg701Review. Naqvi, A.N. (2007). Application of molecular genetic technologies in livestock production: Potentials for developing countries. Advances in Biological Research. Vol. 1, no. 3-4, p Van Eenennaam AL, Li J, Thallman RM, Quaas RL, Dikeman ME, Gill CA, et al. Validation of comercial DNA test for quantitative beef quality traits. J Anim Sci 2007; (85): Soethout EC, Verkaar ELC, Jansen GH, Mueller KE, Lenstra JA. A direct StyI polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) test for the myophosphorylase mutation in cattle. J Vet Med A 2002; (49): Keele JW y Fahrenkrug SC. Optimun mating systems for the myostatin locus in cattle. J Anim Sci 2001, 79: *Director Técnico.