ACTIVIDAD PRACTICA No. 7 BIOLOGIA CELULAR CENTRIFUGACIÓN Y ELECTROFORESIS

Tamaño: px
Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "ACTIVIDAD PRACTICA No. 7 BIOLOGIA CELULAR CENTRIFUGACIÓN Y ELECTROFORESIS"

Transcripción

1 Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado Decanato de Ciencias de la Salud ACTIVIDAD PRACTICA No. 7 BIOLOGIA CELULAR CENTRIFUGACIÓN Y ELECTROFORESIS Octubre 2009

2 TÉCNICAS DE FRAGMENTACIÓN Y SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES DE LAS CÉLULAS Fragmentación celular El fraccionamiento subcelular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos, peroxisomas, etc.) una fracción de membrana (membrana total, plasmática, dominio basolateral, dominio apical, etc.), complejos multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros nucleares, etc.). Fases: Preanalítica: Obtención preparación preliminar de la muestra hasta llegar al laboratorio. Analítica: o de aplicación de procedimientos. Toma y tratamiento de datos, recogida de resultados en un informe. Post-analítica: Validación técnica del informe analítico. Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos etapas: Ruptura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación. Separación de la fracción deseada del resto de componentes de la célula o del tejido mediante algún criterio como puede ser una diferencia de densidad (centrifugación en gradientes o centrifugación diferencial), la presencia de algún antígeno (cromatografía de inmunoafinidad, inmunoprecipitación, etc.). Técnicas de ruptura de células y tejidos: El primer paso en la purificación de la mayoría de las proteínas y estructuras subcelulares es la ruptura de los tejidos o de las células para obtener un lisado celular en el que la proteína, el complejo multiproteico o la estructura subcelular se encuentre en condiciones que permitan su aislamiento. Esto se consigue empleando procedimientos mecánicos suaves conocidos generalmente como homogenización. Estos métodos producen la ruptura de las membranas celulares, suavemente, con lo que se libera el contenido celular. Los procedimientos de homogenización más comunes son: La purificación de cada uno de los principales organelos subcelulares, representó un gran logro en la Biología celular al hacer posible el estudio detallado de sus estructuras y funciones metabólicas. La purificación se inicia con la ruptura de la pared celular, de la membrana plasmática, o de ambas. Las células deben estar suspendidas en una solución con ph y concentración de sales apropiada. Normalmente se emplea sacarosa isotónica (0,25%) o una combinación de sales similar a las de la célula. 2

3 El proceso de fraccionamiento consta principalmente de las siguientes etapas: HOMOGENIZACION Se trata de romper las células con la ayuda de un émbolo rotatorio que se ajusta perfectamente a las gruesas paredes de un tubo de cristal especial, el homogenizador. Células anexas: primero se deben romper conexiones con otras células. Células no anexas: pueden separarse teniendo en cuenta forma, densidad o características que puedan marcarse. Existen dispositivos de homogenización en los que está calibrada la separación entre el émbolo y la pared de cristal para producir homogenizados con un tamaño de partícula determinado. Consiste en el procesamiento del tejido y posteriormente de las células con el fin de obtener una mezcla fluida en la cual estén todos los componentes celulares, para lo cual podemos recurrir a diversos métodos físicos. Homogenizador de Esferas Fragmentación celular por acción del choque de las esferas de vidrio con las células. Tamaño de esferas: 0.1 mm: Bacterias, esporas. 0.5 mm: Levaduras, micelio, microalgas, células animales no anexas, células tripsinizadas. 1.0, 2.5 mm: Cerebro, músculo, piel, hojas. La cantidad de esferas debe ser al menos el 50% del volumen total de la biomasa-líquido. Homogenizador de émbolo y tubo Potter, Potter- Elvehjem, Dunce, Ten Broeck. Separación émbolo-pared del tubo calibrada según tamaño de partícula deseado. Los tejidos deben ser previamente disociados y se suspenden en un volumen exceso de medio (4-10 veces). Fraccionamiento de tejidos animales. Preferido en preparación de organelos subcelulares de tejidos frágiles como cerebro e hígado. (Acción suave). Permite un mejor control de la temperatura generada por la fricción. No es eficiente en la fragmentación de microorganismos 3

4 SHOCK OSMOTICO La células se hacen estallar al someterlas a un medio hipotónico, lo cual hace que la membrana no resista la presión osmótica. Puede ocasionar el daño a las membranas de algunas organelas. No se recomienda porque en algunas organelas se lesiona la membrana. Es utilizado para el aislamiento: Mitocondria y Cromosomas Mitóticos MORTERO Y MANO Es un método convencional de rompimiento por fricción. Pueden emplearse materiales abrasivos como cuarzo, vidrio molido, arena, o materiales silíceos. La masa celular contenida en un volumen de buffer se mezcla con un volumen de medio moledor (0.5 1). La fricción sobre las células genera calor que puede afectar la actividad que se desea estudiar. Actualmente se dispone de homogenizadores más sofisticados que emplean el mismo principio, pero que permiten controlar el nivel de fricción y la temperatura del proceso, son conocidos como potters. Los principales problemas de esta técnica son: la eficiencia baja cuando se usan pequeñas cantidades de medio moledor o cuando es baja la concentración celular; la fricción genera calor y pueden presentarse alteraciones en las proteínas. SONICACION Consiste en la aplicación de ultrasonidos a una suspensión celular. La intensa agitación producida destruye las membranas celulares. Dependiendo de la frecuencia, intensidad y energía aplicada se pueden destruir asimismo las estructuras subcelulares e incluso solubilizar complejos proteicos. Se suele aplicar en frio para evitar el sobrecalentamiento de las muestras que 4

5 podría provocar la desnaturalización de las proteínas. Se transmite una corriente eléctrica a un sistema mecánico, que la convertirá en vibraciones de alta intensidad generándose ondas de ultrasonido que generan millones de burbujas microscópicas, las cuales se expanden y colapsan contra las células causando la ruptura de su membrana. Este fenómeno llamado cavitación puede incrementarse adicionando al medio finísimas esferas de vidrio. Ultrasonificación Generación de intensas ondas sónicas en medio líquido. Se transmite una corriente eléctrica a un sistema mecánico, que la convierte en vibraciones de alta intensidad generando ondas ultrasónicas que forman millones de microburbujas que se expanden y colapsan contra las células: CAVITACIÓN. El choque de ondas rompe membranas y aún enlaces covalentes. Mayor acción por adición de esferas de vidrio. El Sonicador tiene dos forma de operar, por Pulsos: Las Vibraciones de ultrasonido pueden transmitirse en una solución en un rango de 0,1 a 0,9 pulsos por segundo, permitiendo una adecuada sonicación sin generación importante de calor y continuo: Puede ser usado de forma continua por hasta 15 minutos. Con este sistema se puede lograr la ruptura de levaduras entre 3 y 10 minutos o de E. coli con 40 segundos. Presenta los siguientes inconvenientes: alta generación de calor de las muestras que se mantienen en congelamiento, los tejidos duros (piel o tendón) se deben macerar previamente; se pueden generar radicales libres, el daño por oxidación de radicales libres puede minimizarse adicionando cisteina, ditiotreitol o algún otro componente -SH en el medio. Por Radicales Libres: Lesión en membrana celular, aberraciones, cromosómicas menores y cambios de tipo Fisiológicas. Uso en Transferencia de DNA plasmídico en Protoplasmos y células intactas; con expresión temporal de un gen testigo. Flexible: Protoplasmos, Células en Suspención y en fragmentos de tejido con la misma sencillez. CONGELAMIENTO-DESCONGELAMIENTO: Requiere de periodos prolongados de tiempo (hasta 36 horas) para el congelamiento y descongelamiento. El líquido al congelarse a -56 C forma cristales muy finos que rompen la célula cuando esta se descongela rápidamente a 37 C. Tejidos animales y vegetales y masas microbianas pueden congelarse con nitrógeno líquido y molerlos en mortero común. Aparato fracturador: pulverizador de tejidos Bessman. Fragmenta 10 mg 10 g de tejido. Procedimiento largo (36 h). SEPARACION DE LOS ORGANELOS: La separación puede ser llevada a cabo empleando la centrifugación. Manejando las variables fuerza centrifuga y tiempo podemos separar primero los organelos de mayor tamaño como el núcleo. En centrifugaciones sucesivas de mayor fuerza gravitacional y mayor tiempo obtendremos las diferentes fracciones de nuestro interés. La etapa final es la obtención del citosol que es un líquido complejo el cual contiene los elementos del citoesqueleto y entre el 25-50% de las enzimas celulares. De acuerdo a la ley de Stokes, también podemos separar las organelas de acuerdo a sus densidades relativas con respecto a un gradiente de densidades. 5

6 LISIS CELULAR Las células se lisan y los componentes subcelulares se separan mediante una serie de centrifugaciones que van aumentando de velocidad. Después de cada centrifugación, los orgánulos que se han sedimentado en el fondo del tubo, se recogen en forma de precipitado sólido. El sobrenadante se centrifuga a una mayor velocidad para sedimentar la siguiente organela más grande. Se sedimentan las estructuras más grandes y pesadas con mayor rapidez. 6

7 VERIFICACION DE LA PUREZA DE LOS ORGANELOS SEPARADOS MORFOLOGIA Se verifica la pureza mediante microscopía electrónica. MARCADORES ENZIMATICOS: Cada organela presenta unas enzimas exclusivas, las cuales pueden ser empleadas como marcadores de su pureza. METODOS INMUNOQUIMICOS Se pueden obtener grados máximos de pureza en los organelos y macromoléculas mediante técnicas de separación como la cromatografía de afinidad. ELECTROFORESIS La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa. Fue empleado por primera vez en el año 1937, pero su importancia vino a incrementarse cuando en los años cincuenta E. L. Durrum y Arne W.K. Tiselius, impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asignó a la separación de materiales en un campo eléctrico en presencia de algún tipo de soporte; aunque este termino se limitó originalmente al análisis de coloides y partículas submicroscópicas, se ha convertido en estos últimos años en una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular. 7

8 1. Fundamentos de la electroforesis La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico; estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional. Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas de ácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otros parámetros como peso molecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas de las proteínas. La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio. V = q E / f La movilidad electroforética (Me) es un caso particular de la velocidad de migración de un ión, cuando se aplica un campo eléctrico de 1 V/cm. Su signo es igual al de la carga de la partícula. La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel de electroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muy prolongado de la corrida electroforética. La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y catiónicos capaces de disociarse. La carga neta de la partícula está dada por el ph del medio y puede ser modificada por la interacción con pequeñas moléculas de iones u otras macromoléculas. De lo anterior se deduce que el ph influye sobre la velocidad de migración de las moléculas. En el punto isoeléctrico de la biomolécula, ph al cual su carga neta es 0, esta no migra. Por debajo del punto isoeléctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el cátodo, y por encima del punto isoeléctrico tienen carga neta negativa y migra hacia el ánodo. 8

9 2. Métodos electroforeticos zonales. Son los más comunes, dada su alta aplicabilidad en diferentes campos. Son útiles para lograr la separación de mezclas complejas. Se aplican pequeñas cantidades de la disolución de proteínas a un soporte sólido, que se impregna con una solución tampón. Los soportes son en general polímeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las moléculas a través del medio durante la electroforesis y disminuyen los flujos de convección del solvente. Como soporte han sido utilizados papel (celulosa), almidón, poliacrilamida, agarosa y acetato de celulosa, entre otros. Este método tiene gran poder resolutivo porque se aplica una cantidad pequeña de proteína a una zona estrecha, mientras que la longitud del trayecto es mucho mayor que la zona de aplicación. El equipamiento requerido es simple, fuente de poder, cubeta vertical u horizontal donde se colocan el soporte y dos electrodos Los más utilizados son: 9

10 2.1 Electroforesis en gel de poliacrilamida. Los geles de poliacrilamida se forman por polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecuzador, es químicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros, se puede modificar de manera controlada en el tamaño del poro, lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxicidad Formación del gel de poliacrilamida Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización vinílica del monómero acrilamida CH 2 =CH-CO-NH 2 y del monómero entrecruzador N, N'- metilen-bis-acrilamida CH 2 = CH- CO - NH - CH 2 - NH - CO - CH = CH 2. La polimerización se inicia con la formación de radicales libres del monómero, que se producen por radicales libres de oxígeno, por causa de la acción de iones persulfato. Las aminas terciarias como el N, N, N, N -tetrametilen-diamina (TEMED) se emplean como catalizadores de esta reacción, porque causan la formación de radicales libres del persulfato. Esta reacción es fuertemente inhibida por altos niveles de oxígeno, por lo que la solución debe ser desgasificada para lograr una formación de gel reproducible. Hay muchos factores que desempeñan una función importante en la separación electroforética, como son ph, fuerza iónica, gradiente de potencial, tiempo de corrida, concentraciones de acrilamida y bis-acrilamida, etc. Las condiciones óptimas de una buena separación, en la práctica se determinan experimentalmente, con el análisis de cómo influyen los diferentes factores en 10

11 la electroforesis en cuestión. La naturaleza de la muestra sirve de guía para alcanzar las condiciones en la que se deben obtener los mejores resultados Significación de % T y % C La concentración de acrilamida (% T) representa el porcentaje en peso del monómero total empleado (acrilamida + entrecruzador en gramos por 100 ml) y determina la longitud promedio de la cadena del polímero. La concentración de bis-acrilamida (% C) representa el porcentaje de este monómero en el gel y determina el grado de entrecruzamiento. La estructura del gel comienza a ser evidente a 4 % T; 0,2-5 % C. Los factores que gobiernan la talla del poro del gel son complicados, pero en general el tamaño del poro disminuye con el incremento del % T. Las proporciones en que ambas se encuentran determinan las propiedades físicas del gel como su densidad, elasticidad, resistencia mecánica y el tamaño del poro. En general se recomiendan valores de T de 5 a 15 % y de C de 2 a 4 %. para separar moléculas por tamaño, es necesario tomar en cuenta la relación entre el poro efectivo del medio y el tamaño de la molécula que se pretende separar. Si el poro del medio es significativamente mayor que la molécula, la separación electroforética será sobre la base de diferencias de carga y el tamizaje molecular será mínimo. Al aplicar muestras biológicas en un gel con gradiente de acrilamida, todas las macromoléculas comienzan su migración a bajo porcentaje y en la medida en que avanzan se encuentran con poros más pequeños que retardan su movimiento. Las moléculas menores comienzan a tener alta fricción cuando los poros son más pequeños, mientras que las grandes comienzan la fricción en los poros de mayor tamaño Catalizadores empleados en la formación del gel de poliacrilamida La polimerización se lleva a cabo con la utilización de sistemas catalíticos redox como por ejemplo: Persulfato de amonio (agente oxidante) y TEMED como agente reductor. Persulfato de amonio y 3-dimetilamino propio-nitrilo (DMAPN). Peróxido de hidrógeno, sulfato de hierro y ácido ascórbico. La polimerización no ocurre a bajo ph, ya que requiere radicales de monómeros libres formados por catálisis básica de radicales oxígeno del persulfato. La fotopolimerización con riboflavina no es inhibida por el oxígeno, sin embargo, en ambos casos el TEMED actúa como agente reductor suave y acelera la polimerización. 11

12 2.5 Sistemas de tampón que se emplean en la electroforesis en geles de poliacrilamida La fuerza iónica (m) determina el potencial electrocinético ya que reduce la carga neta de los grupos con cargas efectivas. Se ha determinado que la movilidad de las partículas cargadas es inversamente proporcional a la raíz cuadrada de la fuerza iónica, a baja m se eleva la velocidad de migración y es menor la difusión, de manera que la zona de separación es más ancha y mayor la resolución. Con el aumento de la m, se incrementa el desprendimiento de calor y la evaporación. En la electroforesis, los efectos de absorción de agua, no-homogeneidad del material, intercambio iónico con grupos cargados del soporte y electroendósmosis, pueden influir sobre la movilidad y la calidad de la separación. La electroendósmosis generalmente ocurre porque grupos cargados del soporte se ionizan en soluciones tampón, neutras o ácidas y los contraiones libres hidratados (H 3O + ) migran hacia el cátodo, esto provoca un movimiento relativo del solvente respecto al soporte sólido y que las moléculas no cargadas sean transportadas hacia el cátodo a pesar de no tener grupos ionizados. La electroforesis en geles de poliacrilamida puede realizarse en el rango de ph de 2 a 11, sin embargo la desaminación de las proteínas o las reacciones hidrolíticas pueden ser severas a valores de ph inferiores a 3 y superiores de 10. La mayoría de las proteínas con puntos isoeléctricos comprendidos entre ph 4 y 7,5, son separadas en geles con ph entre 8 y 9. La fuerza iónica del sistema tampón debe mantenerse a un nivel adecuado para garantizar la solubilidad de la muestra y suficiente capacidad amortiguadora. Es usual utilizar concentraciones de tampón en un rango entre 0,025 y 0,1 mol/l, pero pueden emplearse concentraciones sobre 0,5 mol/l en sistemas fuertementes ácidos, pues a bajos valores de ph muchos ácidos débiles (que son los más empleados) están débilmente ionizados y es necesaria una alta concentración para obtener la adecuada capacidad amortiguadora Sistemas de electroforesis. Electroforesis de múltiples zonas (MZE) El sistema de electroforesis a emplear depende de los objetivos a alcanzar, los más empleados son gel uniforme y tampón homogéneo, y gel y tampón heterogéneo. La principal desventaja del primero, es que la resolución es menor que con los sistemas heterogéneos, porque no hay efecto concentrador en la primera parte de la corrida. En el sistema discontinuo o heterogéneo se varían el poro del gel y los iones del tampón, por lo que se puede concentrar la muestra. Cuando no es necesaria una gran resolución, los sistemas homogéneos tienen la ventaja de ser rápidos, sencillos. Las bandas, especialmente de proteínas pequeñas, son más anchas en el sistema homogéneo que en el heterogéneo, efecto que se compensa con la mayor pendiente de este último. 12

13 En la actualidad es común que la electroforesis discontinua se realice con 2 tipos de geles, un gel concentrador (de poros grandes) y un gel separador (de poros pequeños). Esto se fundamenta en que los constituyentes iónicos de las soluciones tampones utilizadas en ambos geles son iguales, pero el ph de estas y el tampón de corrida empleado en los electrodos es diferente. La separación ocurre en el gel separador, donde la migración está determinada por la carga y el tamaño molecular de las partículas. Encima de este gel se sitúa el gel concentrador, generalmente de una menor altura (1/3 del gel separador), en el que la muestra se concentra en una zona muy estrecha; lo que determina la separación en bandas finas en el gel separador y alto poder de resolución. El proceso general en PAGE-SDS discontinuo consta de 3 etapas: concentración, desconcentración y resolución. La teoría de MZE fue formulada por Jovin. Al aplicar esta teoría a un sistema con tris-hcl en ambos geles y tris-glicina como tampón de corrida, se observa que las 2 especies iónicas existentes Cl - (iones conductores) y glicinato (iones rezagados) migran en la misma dirección que las moléculas de la muestra. Al comenzar la electroforesis, los iones Cl - tienden a moverse rápidamente, separándose del resto de las especies iónicas y dejando tras de sí una zona de baja conductividad. La conductividad específica es inversamente proporcional a la fuerza del campo eléctrico, se forma un gradiente de voltaje en esta región que acelera el movimiento de los iones rezagados, lo que hace que estos migren en seguida detrás de los iones conductores y a la misma velocidad; de esta manera se forma el denominado límite de Kohlraush, entre los iones conductores y los rezagados (entre las regiones de alto y bajo gradiente de voltaje). Las movilidades de los componentes de la muestra son intermedias entre las de los iones conductores y rezagados, por lo que se encontrarán en la región límite, en capas de solo algunos micrones de grosor. Cuando la muestra concentrada llega a la interfase entre el gel concentrador y separador, ocurren cambios en la movilidad de los constituyentes por causa del ph, la fuerza iónica y el efecto de tamizaje del gel. Dependiendo de los componentes individuales de la muestra estos migran en bandas discretas. La principal ventaja de la teoría de MZE es la flexibilidad con que puede ser aplicada en el fraccionamiento analítico o preparativo Formatos de la PAGE Existen 3 formas diferentes de realizar electroforesis en geles de poliacrilamida: lámina vertical, varilla cilíndrica y lámina horizontal. Los geles más finos son más económicos porque emplean menos reactivos y pueden ser eficientemente refrigerados durante la corrida, por lo tanto pueden ser corridos a mayor voltaje, lográndose así una alta resolución en corto tiempo. Los tiempos de tinción y decoloración son menores también porque la difusión es muy rápida; sin embargo como el gel es tan fino es más propenso a perturbaciones y problemas en la polimerización. 13

14 Se ha planteado que la resolución de las moléculas generalmente aumenta con la disminución del grosor del gel Comportamiento de las proteínas en la electroforesis en geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (PAGE-SDS) La electroforesis con SDS es un excelente método para identificar y monitorear las proteínas durante un proceso de purificación; también se emplea para la determinación del peso molecular de las subunidades de proteínas. La estructura del detergente SDS empleado en esta variación de la electroforesis en gel de poliacrilamida es CH 3 (CH 2 ) 10 CH 2 = SO 3 -N a +. El anión se une a las proteínas por absorción no específica (aproximadamente una molécula de SDS por cada dos residuos de aminoácidos, con una relación SDS/proteína máximo de 1,4 g/g). El SDS desnaturaliza por completo las proteínas y rompe las interacciones no covalentes que determinan la estructura terciaria y cuaternaria. Los grupos alifáticos dodecil se colocan en el interior, mientras que los grupos sulfato en la superficie y todos los complejos SDSproteína toman carga neta negativa (que excede la carga intrínseca de las cadenas de aminoácidos). Las proteínas reaccionan con SDS a relativamente alta concentración, pero se ha demostrado que 0,4 % de SDS es el nivel mínimo necesario para saturar los sitios de unión de la proteína, sin embargo, se emplea 1 % para lograr un margen de seguridad. El Rf es una medida convencional de la movilidad de la proteína relativa al frente de migración y se define como la distancia desde el inicio del gel separador hasta el centro de cada banda dividida entre la distancia a la que ha migrado el ión líder. La concentración apropiada de SDS en el tampón superior, se determina incrementando la cantidad de SDS hasta que no exista variación en el Rf. Se ha demostrado que concentraciones en el rango de 0,02 a 0,025% de SDS en el tampón superior es suficiente, sin embargo se utiliza 0,03 % para obtener un margen de seguridad. El complejo SDS-proteína tiene forma de varilla con un diámetro aproximado de 18 Å y una longitud proporcional al peso molecular de la cadena polipeptídica. El tratamiento concomitante con un agente reductor de puentes disulfuro, como el beta mercaptoetanol (ß ME) o el DTT desnaturaliza las proteínas y las rompe en las subunidades que la componen. Por lo que el complejo SDS-proteína tiene generalmente mayor densidad de carga y menor tamaño que las proteínas nativas. Se ha determinado que con 5 min a o C es suficiente para la formación de enlaces estables SDS-proteína a una concentración de 1 % de SDS, en presencia de EDTA y condiciones reductoras. El complejo SDS-proteína, es estable durante 3 meses a 4 o C. El 14

15 SDS migra más rápido que el complejo proteína-sds en un gel restrictivo, por lo que el SDS no es necesario adicionarlo en los geles si este está presente en la muestra y en el tampón superior, lo que da la ventaja de asegurar las condiciones y la eficiencia de polimerización de los geles sin SDS. La migración de los derivados proteína-sds hacia al ánodo es inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular (log PM). La relación carga/masa es aproximadamente igual para todas las proteínas de la muestra por lo que la talla de esta deviene en el factor determinante de la separación. El SDS-PAGE se emplea para estimar el peso molecular de las proteínas y se compara con un patrón. No obstante ha sido reportado que diferentes proteínas de igual talla pueden migrar como una banda única. Bajo iguales condiciones de ph y temperatura, el SDS y las proteínas se concentran en la misma zona, pero como la cantidad de SDS es muy grande comparada con la de proteínas y su concentración en el gel concentrador se puede regular, se forma una zona de concentración amplia caracterizada fundamentalmente por ser estable con el frente de corrida y que continuamente aumenta durante la electroforesis dependiendo de la cantidad de SDS introducido en el tampón. Se aprecia una progresiva difusión del borde de migración en la medida en que aumenta la concentración de T. Las condiciones pueden ajustarse dependiendo de como se necesite separar las proteínas (en estado completamente desnaturalizada, parcialmente desnaturalizada o nativa). Las asociaciones covalentes entre las unidades de proteínas pueden mantenerse omitiendo el ßME del tampón de muestras. En ausencia de este agente reductor los puentes disulfuro intracatenarios e intercatenarios de la muestra de proteínas permanecen intactos; la movilidad electroforética del complejo SDS proteína se altera bajo estas condiciones de disociación y durante la electroforesis la movilidad de los oligómeros SDS proteínas es menor que con los componentes SDS polipéptidos completamente desnaturalizados. Las proteínas pueden mostrar una respuesta individual característica a la reducción, lo que se determina al comparar los geles corridos con ßME o sin este. Adicionalmente las proteínas no reducidas, pueden no estar del todo saturadas con SDS por lo que puede variar su relación peso/peso en su interacción con el detergente. Esto hace que las determinaciones de peso molecular con estas características no tengan la misma confiabilidad que el análisis hecho con polipéptidos del todo desnaturalizados. Es necesaria la existencia de patrones y proteínas conocidas de igual configuración para una comparación válida (marcadores de peso molecular, PM). EL SDS-PAGE bajo condiciones reducidas y no reducidas es un método muy útil para el análisis de los puentes disulfuro que contienen las proteínas. Fuentes de error en la electroforesis. La electroforesis es una técnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores experimentales, como la temperatura durante la polimerización y la corrida del gel, velocidad de la polimerización, niveles de catalizador, pureza del reactivo, tiempo de corrida y preparación de las muestras. 15

16 Anexo 1: (a) Material de electroforesis vertical: (b) Montaje del sistema; (c, d) preparación del gel separador; (e-g) concentrador; (h-ñ) electroforesis; (o-s) tinción del gel 16

17 ACTIVIDADES 1.- Mucho de lo que sabemos acerca del funcionamiento celular, depende de experimentos que utilizan células específicas (p.ej., orgánulos) de las células. Qué técnicas utilizan para aislar comúnmente los científicos las células y los orgánulos de mezclas complejas y cómo trabajan estas técnicas? 2.- El aislamiento de las proteínas de membrana requiere el uso de detergentes; el aislamiento de otras puede lograrse con el uso de soluciones salinas concentradas. Qué tipos de proteínas de membrana pueden ser aislados con soluciones salinas concentradas? Describa cómo las propiedades químicas de los detergentes y la concentración elevada de sales facilitan los procesos de aislamiento de cada tipo de proteína de membrana. 3. Numerosas técnicas pueden separar proteínas según sus diferencias de masa. Describa el uso de dos de estas técnicas, la centrifugación y la electroforesis en gel. Las proteínas de la sangre transferían (PM: 66 KDa) y las lisosimas (PM: 15 KDa) se pueden separar mediante centrifugación por zonas de velocidad o por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS. Cúal de las dos proteínas sedimentará más rápidamente durante la electroforesis? Cuál migrará más rápidamente durante la electroforesis? 4. Interprete los geles del Anexo 2. Mida y anote la distancia recorrida por el frente del gel (Df), y por cada una de las proteínas estándar (Dp). Calcule el correspondiente valor de Rf para cada una de ellas y anótelo en una tabla. 17

18 Anexo 2. 18

Electroforesis en gel de poliacrilamida y electrotransferencia

Electroforesis en gel de poliacrilamida y electrotransferencia Electroforesis en gel de poliacrilamida y electrotransferencia INDICE ELECTROFORESIS Fundamento y características Tipos de electroforesis: libre y de zona Electroforesis en papel, acetato de celulosa Electroforesis

Más detalles

TEMA 6. PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

TEMA 6. PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS TEMA 6. PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS 1. Introducción 2. Métodos de rotura celular y extracción de proteínas 3. Métodos cromatográficos 4. Métodos electroforéticos 1. Introducción La mayor parte de las investigaciones

Más detalles

ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA SDS-PAGE. Presencia de Sodio Dodecil Sulfato bajo condiciones reductoras (SDSPAGE)

ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA SDS-PAGE. Presencia de Sodio Dodecil Sulfato bajo condiciones reductoras (SDSPAGE) ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA SDSPAGE Presencia de Sodio Dodecil Sulfato bajo condiciones reductoras (SDSPAGE) Método rápido, reproducible y de bajo costo Utilizado para cuantificar, comparar

Más detalles

ELECTROFORESIS WESTERN BLOT ELISA

ELECTROFORESIS WESTERN BLOT ELISA ELECTROFORESIS WESTERN BLOT ELISA INTEGRANTES: Arguelles, Rocío Assandri, Matías Almirón, Marianela Buonanduci, Facundo Gómez, Alan Miller, Florencia López, Rocío Vidal, Sol Sillingardi, Leonardo Soria,

Más detalles

Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida. Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida: Introducción y técnica básica

Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida. Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida: Introducción y técnica básica Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida: Introducción y técnica básica La electroforesis de proteínas en geles con una matriz de poliacrilamida,

Más detalles

MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS: 1. Exclusión molecular 2. Intercambio iónico 3. Afinidad SSN

MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS: 1. Exclusión molecular 2. Intercambio iónico 3. Afinidad SSN MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS: 1. Exclusión molecular 2. Intercambio iónico 3. Afinidad SSN Propiedades de una proteína que son útiles para su purificación por cromatografía Peso molecular Carga iónica Hidrofobicidad

Más detalles

1. Concepto de sistema tampón. Cita algunos ejemplos biológicos de tampones inorgánicos.

1. Concepto de sistema tampón. Cita algunos ejemplos biológicos de tampones inorgánicos. VALENCIA (COMUNIDAD VALENCIANA) / JUNIO 00. COU / BIOLOGIA / BIOMOLECULAS / OPCION A / EJERCICIO 1 OPCION A 1. Concepto de sistema tampón. Cita algunos ejemplos biológicos de tampones inorgánicos. La actividad

Más detalles

Western Blotting (o inmunotransferencia) es un procedimiento estándar de laboratorio que permite a

Western Blotting (o inmunotransferencia) es un procedimiento estándar de laboratorio que permite a Introducción Western Blotting (o inmunotransferencia) es un procedimiento estándar de laboratorio que permite a los investigadores verificar la expresión de una proteína, determinar la cantidad relativa

Más detalles

PROTEÍNAS. Las proteínas están constituidas por la unión de numerosas moléculas sencillas (monómeros) denominados aminoácidos.

PROTEÍNAS. Las proteínas están constituidas por la unión de numerosas moléculas sencillas (monómeros) denominados aminoácidos. PROTEÍNAS 1. INTRODUCCIÓN Las proteínas son los constituyentes químicos fundamentales de la materia viva. Constituyen alrededor del 50% en peso seco del cuerpo. Los glúcidos y lípidos se encuentran en

Más detalles

Inmunología Clínica T.P.Nº4 2009

Inmunología Clínica T.P.Nº4 2009 Inmunología Clínica T.P.Nº4 2009 Separación de Inmunoglobulinas Separación n de Inmunoglobulinas Métodos basados en la diferencia de solubilidad Métodos basados en el tamaño molecular Métodos basados en

Más detalles

15. Electroforesis: electroforesis en papel de proteínas séricas

15. Electroforesis: electroforesis en papel de proteínas séricas 15. Electroforesis: electroforesis en papel de proteínas séricas Isaac Túnez Fiñana Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Córdoba, Avda. Menéndez Pidal s/n,

Más detalles

CICLO 2 : Fraccionamiento subcelular

CICLO 2 : Fraccionamiento subcelular Curso de Fisicoquímica Biológica 2006 Licenciatura de Bioquímica. Facultad de Ciencias. CICLO 2 : Fraccionamiento subcelular OBJETIVOS GENERALES: 1) Obtención de preparados enriquecidos en fracciones subcelulares

Más detalles

AIREACIÓN C = 475. 33,5 x t. C = expresado en partes por millón

AIREACIÓN C = 475. 33,5 x t. C = expresado en partes por millón 1 AIREACIÓN El rol de los dispositivos de aireación colocados en los fermentadores, es de proveer a los microorganismos del oxigeno necesario para su crecimiento. Por otra parte el fin de la agitación

Más detalles

Para qué romper células?

Para qué romper células? Para qué romper células? Para obtener productos que se encuentran en el interior de las células. La técnica de RC seleccionada determina el tamaño de los desechos y la influencia que tendrán en las operaciones

Más detalles

CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL

CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL 1.- FUNDAMENTO TEÓRICO CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL Filtración en gel - 1 (Farmacia) La cromatografía de exclusión o filtración en gel es una clase de cromatografía sólido-líquido que permite la

Más detalles

Estructura y propiedades de las proteínas

Estructura y propiedades de las proteínas Estructura y propiedades de las proteínas Matilde Julián Seguí Introducción Las proteínas son las macromoléculas biológicas más importantes. Hay gran variedad de proteínas y cumplen gran variedad de funciones

Más detalles

AMINOÁCIDOS SE PUEDEN UNIR POR ENLACES PEPTÍDICOS

AMINOÁCIDOS SE PUEDEN UNIR POR ENLACES PEPTÍDICOS Tema 4. Proteínas: funciones biológicas y estructura primaria. Enlace peptídico. Péptidos y proteínas. Diversidad de funciones biológicas. Niveles de organización estructural de las proteínas. Separación

Más detalles

Conductividad en disoluciones electrolíticas.

Conductividad en disoluciones electrolíticas. Conductividad en disoluciones electrolíticas. 1.- Introducción 2.- Conductores 3.- Definición de magnitudes 3.1- Conductividad específica 3.2 Conductividad molar " 4. Variación de la conductividad (, ")

Más detalles

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO [ESCRIBIR EL NOMBRE DE LA COMPAÑÍA] CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO Integrantes: Álvarez - Costanzo - Diaz Zegarra -Gerez- Hollman- Hurtado- Lucero- Macuso- Ruggieri- Strack INTRODUCCIÓN. La cromatografía

Más detalles

INTRODUCCIÓN A LA METODOLOGÍA MOLECULAR. 2002 `Derechos Reservados Pontificia Universidad Javeriana Instituto de Genética Humana Bogotá COLOMBIA

INTRODUCCIÓN A LA METODOLOGÍA MOLECULAR. 2002 `Derechos Reservados Pontificia Universidad Javeriana Instituto de Genética Humana Bogotá COLOMBIA INTRODUCCIÓN A LA METODOLOGÍA MOLECULAR 2002 `Derechos Reservados Pontificia Universidad Javeriana Instituto de Genética Humana Bogotá COLOMBIA Equipos de Laboratorio Un equipo de laboratorio es un conjunto

Más detalles

Soluciones Electrolíticas María de la Luz Velázquez Monroy & Miguel Ángel Ordorica Vargas

Soluciones Electrolíticas María de la Luz Velázquez Monroy & Miguel Ángel Ordorica Vargas Introducción Soluciones Electrolíticas María de la Luz Velázquez Monroy & Miguel Ángel Ordorica Vargas Siguiendo los trabajos de Humphrey Davy, sobre electrolisis de metales, en 1834, Michael Faraday inició

Más detalles

ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA. Agustín Garrido. agugarrido@hotmail.com

ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA. Agustín Garrido. agugarrido@hotmail.com 1 ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA Agustín Garrido agugarrido@hotmail.com Introducción En este trabajo práctico se utilizó la técnica de electroforesis. Este proceso se basa en la migración de las moléculas

Más detalles

Bioquímica III- 2009

Bioquímica III- 2009 Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata Bioquímica III- 2009 Trabajo Práctico Nro 4 Extracción de RNA y DNA bacteriano INTRODUCCIÓN El RNA es el ácido nucleico más abundante en la

Más detalles

SOLUBILIDAD DE LAS PROTEINAS: EFECTO DE LA FUERZA IONICA

SOLUBILIDAD DE LAS PROTEINAS: EFECTO DE LA FUERZA IONICA SOLUBILIDAD DE LAS PROTEINAS: EFECTO DE LA FUERZA IONICA La solubilidad de una proteína está influenciada por los siguientes factores: (a) su composición en aminoácidos (una proteína rica en aminoácidos

Más detalles

La Absorción del Agua

La Absorción del Agua La Absorción del Agua Importancia del Agua en las Plantas Es el cons5tuyente principal del protoplasma celular, en ocasiones representa hasta el 95% del peso total de la planta. Es el solvente en el que

Más detalles

Dar a conocer la capacidad de disolución del agua frente a otras sustancias.

Dar a conocer la capacidad de disolución del agua frente a otras sustancias. MINISTERIO DE EDUCACION Actividad 1: Agua en la vida II. Laboratorio: Solubilidad del agua 1. Tema: AGUA DISOLVENTE UNIVERSAL 2. Objetivo: Dar a conocer la capacidad de disolución del agua frente a otras

Más detalles

Procariota y Eucariota

Procariota y Eucariota Célula Todas las células comparten dos características esenciales. La primera es una membrana externa, la membrana celular -o membrana plasmática- que separa el citoplasma de la célula de su ambiente externo.

Más detalles

PRACTICA 4 ELECTROFORESIS EN PAPEL DE AMINOACIDOS

PRACTICA 4 ELECTROFORESIS EN PAPEL DE AMINOACIDOS PRACTICA 4 ELECTROFORESIS EN PAPEL DE AMINOACIDOS 1.- OBJETIVO: El objetivo fundamental de la practica es la comprobación de la migración electroforética de los aminoácidos sometidos a un campo eléctrico

Más detalles

Electrólisis. Electrólisis 12/02/2015

Electrólisis. Electrólisis 12/02/2015 Electrólisis Dr. Armando Ayala Corona Electrólisis La electrolisis es un proceso mediante el cual se logra la disociación de una sustancia llamada electrolito, en sus iones constituyentes (aniones y cationes),

Más detalles

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL OFICINA DE ADMISIONES CURSO DE NIVELACION DE CARRERA SEGUNDO PARCIAL DE QUIMICA Marzo de 2014

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL OFICINA DE ADMISIONES CURSO DE NIVELACION DE CARRERA SEGUNDO PARCIAL DE QUIMICA Marzo de 2014 ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL OFICINA DE ADMISIONES CURSO DE NIVELACION DE CARRERA SEGUNDO PARCIAL DE QUIMICA Marzo de 2014 NOMBRE: PARALELO: FECHA: El presente examen ha sido elaborado para

Más detalles

16. Electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida. Análisis de proteínas de hojas de Arabidopsis thaliana

16. Electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida. Análisis de proteínas de hojas de Arabidopsis thaliana 16. Electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida. Análisis de proteínas de hojas de Arabidopsis thaliana Ana María Maldonado Alconada, Jesús V. Jorrín Novo Departamento de Bioquímica y Biología

Más detalles

FACULTAD DE QUÍMICA DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA. CURSO DE BIOQUÍMICA (CLAVE 1508) Licenciaturas de QFB y QA

FACULTAD DE QUÍMICA DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA. CURSO DE BIOQUÍMICA (CLAVE 1508) Licenciaturas de QFB y QA FACULTAD DE QUÍMICA DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA CURSO DE BIOQUÍMICA (CLAVE 1508) Licenciaturas de QFB y QA Prof. Laura Carmona Salazar Grupos: 03 Semestre: 13-I Este material es exclusivamente para uso

Más detalles

Proteínas. Características generales

Proteínas. Características generales Proteínas Características generales Son las macromoléculas más abundantes en las células. Constituyen hasta el 50% del peso. Forman moléculas específicas en cada especie, incluso entre individuos. Además,

Más detalles

Agua. Agua. Estructura del agua. Estructura del agua. Estructura del agua. Dra. Edith Ponce A. enlace covalente polar (100 kcal/mol).

Agua. Agua. Estructura del agua. Estructura del agua. Estructura del agua. Dra. Edith Ponce A. enlace covalente polar (100 kcal/mol). Agua Agua Dra. Edith Ponce A. Es la sustancia más abundante en la biosfera la encontramos en sus tres estados comprende del 65 y el 95% del peso de la mayor parte de las formas vivas Sus propiedades físicas

Más detalles

Aquí hay química Ficha didáctica del profesorado Segundo ciclo de ESO

Aquí hay química Ficha didáctica del profesorado Segundo ciclo de ESO Ficha didáctica del profesorado Segundo ciclo de ESO www.eurekamuseoa.es Resumen El enlace químico es la forma que tienen los átomos de organizarse, mediante uniones, para dar estructuras estables. En

Más detalles

Los elementos químicos más abundantes en los seres vivos son: Agua y proteínas. Carbono, oxígeno, hidrógeno, nitrógeno, fósforo y azufre.

Los elementos químicos más abundantes en los seres vivos son: Agua y proteínas. Carbono, oxígeno, hidrógeno, nitrógeno, fósforo y azufre. Los elementos químicos más abundantes en los seres vivos son: Agua y proteínas. Carbono, oxígeno, hidrógeno, nitrógeno, fósforo y azufre. Glúcidos, lípidos, proteínas, ácidos nucleicos. Oxígeno, calcio,

Más detalles

ELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR. Raquel Asunción Lima Cordón

ELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR. Raquel Asunción Lima Cordón ELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR Raquel Asunción Lima Cordón PCR Polymerase Chain reaction (reacción en cadena de la polimerasa) Sintetizar muchas veces un fragmento de ADN PCR: simulación de lo que sucede

Más detalles

De manera general la teoría celular moderna se resume en tres postulados:

De manera general la teoría celular moderna se resume en tres postulados: De manera general la teoría celular moderna se resume en tres postulados: La célula es la unidad básica estructural de todos los seres vivos, todos los organismos están formados por células. La célula

Más detalles

I) Biomoléculas 2) El agua I-2 EL AGUA

I) Biomoléculas 2) El agua I-2 EL AGUA I-2 EL AGUA IMPRTANCIA DEL AGUA PARA LS SERES VIVS El agua es el líquido más abundante de la corteza y uno de los pocos líquidos naturales. No es de extrañar entonces que el agua sea una sustancia esencial

Más detalles

TEMARIO PARA EL EXAMEN DE BIOQUÍMICA

TEMARIO PARA EL EXAMEN DE BIOQUÍMICA TEMARIO PARA EL EXAMEN DE BIOQUÍMICA PARTE I. ESTRUCTURA BIOLÓGICA Y QUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS 1. CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS DE LA MATERIA VIVA 1. La mayoría de los organismos están compuestos solamente de

Más detalles

Ambientación Universitaria BIOLOGÍA. Guía de Actividades 2014

Ambientación Universitaria BIOLOGÍA. Guía de Actividades 2014 1 Ambientación Universitaria BIOLOGÍA Guía de Actividades 2014 2 I.- INTRODUCCIÓN- CONCEPTO DE CIENCIA Y VIDA 1) Lea el siguiente texto. Mencione ejemplos de lo que considere investigación en ciencias

Más detalles

Soluciones Electroforesis Protocolo y Técnicas Cultek

Soluciones Electroforesis Protocolo y Técnicas Cultek Electroforesis de Proteínas Las proteínas son moléculas cuya carga neta depende del contenido de una serie de aminoácidos (fundamentalmente ácido glutámico, ácido aspártico, lisina, arginina e histidina)

Más detalles

Instrumentos de Medición y Muestreo. Medición de gases y vapores

Instrumentos de Medición y Muestreo. Medición de gases y vapores Instrumentos de Medición y Muestreo Medición de gases y vapores 1 Medición de gases y vapores Para realizar la medición de la presencia de gases y vapores en el ambiente podemos utilizar: Instrumentos

Más detalles

Ablandamiento de agua mediante el uso de resinas de intercambio iónico.

Ablandamiento de agua mediante el uso de resinas de intercambio iónico. Ablandamiento de agua por intercambio iónica página 1 Ablandamiento de agua mediante el uso de resinas de intercambio iónico. (Fuentes varias) Algunos conceptos previos: sales, iones y solubilidad. Que

Más detalles

En el APOENZIMA se distinguen tres tipos de aminoácidos:

En el APOENZIMA se distinguen tres tipos de aminoácidos: 1. Concepto de biocatalizador. Son sustancias que consiguen que las reacciones se realicen a gran velocidad a bajas temperaturas, ya que disminuyen la energía de activación de los reactivos. Pueden ser:

Más detalles

EXTRACCION CON SOLVENTES. Esp. Farm. María Alejandra

EXTRACCION CON SOLVENTES. Esp. Farm. María Alejandra EXTRACCION CON SOLVENTES Esp. Farm. María a Alejandra EXTRACCION CON SOLVENTES Se empezó a emplear durante la segunda guerra mundial. El motor de este cambio de procesos fue la obtención de metales nucleares

Más detalles

BIOQUÍMICA TEMA 3. METABOLISMO CELULAR

BIOQUÍMICA TEMA 3. METABOLISMO CELULAR BIOQUÍMICA TEMA 3. METABOLISMO CELULAR D. Ph. Daniel Díaz Plascencia. Contacto: dplascencia@uach.mx www.lebas.com.mx QUÉ ES EL METABOLISMO CELULAR? El metabolismo se podría definir como el conjunto de

Más detalles

Práctica 3 EXTRACCIÓN DE LA CASEINA Y DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO

Práctica 3 EXTRACCIÓN DE LA CASEINA Y DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO Práctica 3 EXTRACCIÓN DE LA CASEINA Y DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO 1.- OBJETIVO El objetivo fundamental de esta practica es la determinación del punto isoeléctrico de la caseína una vez extraída

Más detalles

PRÁCTICA 7 INSTRUMENTACIÓN BÁSICA EN QUÍMICA

PRÁCTICA 7 INSTRUMENTACIÓN BÁSICA EN QUÍMICA PRÁCTICA 7 INSTRUMENTACIÓN BÁSICA EN QUÍMICA OBJETIVOS En esta práctica se tratarán aspectos de interés relacionados con la instrumentación básica utilizada en química, haciendo especial hincapié en la

Más detalles

Prueba nacional experimental Nivel II. Mendoza, 31 de agosto de 2010. Nombre y Apellido DNI Fecha de nacimiento Escuela Provincia

Prueba nacional experimental Nivel II. Mendoza, 31 de agosto de 2010. Nombre y Apellido DNI Fecha de nacimiento Escuela Provincia Prueba nacional experimental Nivel II Nombre y Apellido DNI Fecha de nacimiento Escuela Provincia Mendoza, 31 de agosto de 2010 Nombre y Apellido DNI Fecha de nacimiento Escuela Provincia No completar

Más detalles

Detección de patógenos en alimentos, utilizando la técnica de PCR, reacción en cadena de la polimerasa.

Detección de patógenos en alimentos, utilizando la técnica de PCR, reacción en cadena de la polimerasa. Detección de patógenos en alimentos, utilizando la técnica de PCR, reacción en cadena de la polimerasa. Lic. Esp. Mariano Diego Massari 1er Congreso Bioquímico Córdoba 2011 8ª Jornada de Actualización

Más detalles

B.17) POLIMERIZACIÓN DE MONÓMEROS SOLUBLES EN AGUA

B.17) POLIMERIZACIÓN DE MONÓMEROS SOLUBLES EN AGUA B.17) POLIMERIZACIÓN DE MONÓMEROS SOLUBLES EN AGUA Importancia y Principales Productos Los polímeros solubles en agua tales como la poliacrilamida: PA, la polivinilpirrolidona: PVP, el poliácido acrílico:

Más detalles

ELECTROQUÍMICA. químicas que se producen por acción de una corriente eléctrica.

ELECTROQUÍMICA. químicas que se producen por acción de una corriente eléctrica. ELECTROQUÍMICA La electroquímica estudia los cambios químicos que producen una corriente eléctrica y la generación de electricidad mediante reacciones químicas. Es por ello, que el campo de la electroquímica

Más detalles

ELECTROFORESIS GENERALIDADES Y APLICACIONES CLINICAS

ELECTROFORESIS GENERALIDADES Y APLICACIONES CLINICAS ELECTROFORESIS GENERALIDADES Y APLICACIONES CLINICAS Marcelo Castillo Navarrrete, T.M. MsCs (C) Facultad de Medicina Carrera Tecnología Médica 18 de Noviembre de 2004 Fundamentos de Electroforesis Alta

Más detalles

3. Principios de medición de la calidad del aire

3. Principios de medición de la calidad del aire 3. Principios de medición de la calidad del aire 3.1. Medición. Medir es contar, comparar una unidad con otra, dar una valoración numérica, asignar un valor, asignar números a los objetos. Todo lo que

Más detalles

TALLER EVALUATIVO- CARBOHIDRATOS

TALLER EVALUATIVO- CARBOHIDRATOS TALLER EVALUATIVO- CARBOHIDRATOS ÁREA/ASIGNATURA: QUIMICA Grado : 11 DOCENTE: Yadira Eugenia Guarin Blanco FECHA: 04/10/2013 1. Realiza la siguiente lectura, copia las preguntas en el cuaderno y responde.

Más detalles

Esterilización por calor. Calor seco (Estufa) Calor húmedo (Autoclave)

Esterilización por calor. Calor seco (Estufa) Calor húmedo (Autoclave) Esterilización por calor Calor seco (Estufa) Calor húmedo (Autoclave) Calor seco (FA8) El mecanismo de acción microbicida se basa en la acción oxidante del aire seco caliente que circula por convección

Más detalles

Tema 7: Electrolitos, equilibrio ácido-base y gases en sangre. Los principales electrolitos que aparecen en el organismo son:

Tema 7: Electrolitos, equilibrio ácido-base y gases en sangre. Los principales electrolitos que aparecen en el organismo son: Tema 7: Electrolitos, equilibrio ácido-base y gases en sangre 1. Análisis cuantitativo de electrolitos. 2. Medida analítica del ph en sangre y orina. 3. Determinación de gases en sangre. 1. Análisis cuantitativo

Más detalles

TRABAJO PRÁCTICO Nº 5: ÁCIDOS NUCLEICOS DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS A UTILIZAR

TRABAJO PRÁCTICO Nº 5: ÁCIDOS NUCLEICOS DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS A UTILIZAR TRABAJO PRÁCTICO Nº 5: ÁCIDOS NUCLEICOS DOCENTES: Andrés Ciocchini, Gabriela Niemirowicz. DESCRIPCIÓN DE LOS MÉTODOS A UTILIZAR Purificación de ácido desoxiribonucleico (ADN) por partición diferencial

Más detalles

FISIOLOGÍA GENERAL Jesús Merino Pérez y María José Noriega Borge

FISIOLOGÍA GENERAL Jesús Merino Pérez y María José Noriega Borge EL AGUA: VOLÚMENES Y COMPOSICIÓN DE LOS LÍQUIDOS CORPORALES La vida comenzó en el agua del mar, y las condiciones que reinaban en aquel ambiente primigenio marcaron las características químicas de la materia

Más detalles

UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FUNCIONALES SECCIÓN DE FISIOLOGÍA

UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FUNCIONALES SECCIÓN DE FISIOLOGÍA UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FUNCIONALES SECCIÓN DE FISIOLOGÍA EL FENOMENO DE LA OSMOSIS Selección de Material Audiovisual Preparado por:

Más detalles

17.- Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa. Aislamiento y caracterización electroforética de DNA plasmídico

17.- Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa. Aislamiento y caracterización electroforética de DNA plasmídico 17.- Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa. Aislamiento y caracterización electroforética de DNA plasmídico Carmen Alicia Padilla Peña, Jesús Diez Dapena, Emilia Martínez Galisteo, José

Más detalles

Proteínas. Tabla 1: Funciones de las proteínas

Proteínas. Tabla 1: Funciones de las proteínas Colegio Lectura Hispano Complementaria Americano Depto. de Ciencias - Biología Nivel: 4to medio Unidad I Proteínas 1 En las células, son las proteínas las macromoléculas más abundantes y las que constituyen

Más detalles

AISLAMIENTO DE ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA) GENÓMICO Y PLASMÍDICO

AISLAMIENTO DE ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA) GENÓMICO Y PLASMÍDICO AISLAMIENTO DE ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA) GENÓMICO Y PLASMÍDICO E l estudio del genoma de los seres vivos a sido uno d los principales objetivos de la Biología. Desde los trabajos de Mendel (1866),

Más detalles

Metodologías básicas del procesamiento de Proteinas

Metodologías básicas del procesamiento de Proteinas Metodologías básicas del procesamiento de Proteinas Alejandra Kun Departamento de Proteínas y Ácidos Nucleicos-IIBCE Unidad Asociada Sección Bioquímica Facultad de Ciencias 13 de octubre 2014 Curso Introducción

Más detalles

CARACTERÍSTICAS DE LA MATERIA

CARACTERÍSTICAS DE LA MATERIA LA MATERIA CARACTERÍSTICAS DE LA MATERIA - Todo lo que existe en el universo está compuesto de Materia. - La Materia se clasifica en Mezclas y Sustancias Puras. - Las Mezclas son combinaciones de sustancias

Más detalles

SEPARACIÓN DE BIOMOLÉCULAS.

SEPARACIÓN DE BIOMOLÉCULAS. CÁTEDRA: BIOQUÍMICA Carreras: Farmacia Profesorado en Química Licenciatura en Química Licenciatura en Alimentos SEPARACIÓN DE BIOMOLÉCULAS. 1) Suponga que desea purificar por cromatografía de intercambio

Más detalles

UNA GUIA PRACTICA PARA MONITOREAR GASES PELIGROSOS

UNA GUIA PRACTICA PARA MONITOREAR GASES PELIGROSOS UNA GUIA PRACTICA PARA MONITOREAR GASES PELIGROSOS El monitoreo de gases peligrosos para calidad del aire en el área de trabajo y seguridad es un tema complejo. A diferencia de otros tipos relativamente

Más detalles

REPASANDO CONCEPTOS : LAS PROTEÍNAS

REPASANDO CONCEPTOS : LAS PROTEÍNAS REPASANDO CONCEPTOS : LAS PROTEÍNAS Drqf. Manuel Fontboté A. Consultor en Ciencias Cosméticas CHILE El uso de materias activas de naturaleza proteica en los cosméticos no es un hecho reciente, antes bien,

Más detalles

Tema 5. Coagulación-Floculación

Tema 5. Coagulación-Floculación Tema 5. Coagulación-Floculación 1. OBJETIVO El objetivo de esta práctica es realizar ensayos de coagulación-floculación a diferentes muestras de agua (potables, residuales o industriales). A partir de

Más detalles

Capítulo 5: BIOMOLÉCULAS

Capítulo 5: BIOMOLÉCULAS Capítulo 5: BIOMOLÉCULAS De qué están hechas las células? Al analizar los átomos y moléculas presentes en las células, se observa que todas ellas se asemejan: una gran proporción es agua; el resto es un

Más detalles

REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES (electrolisis)

REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES (electrolisis) REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES (electrolisis) 1 2 Electrólisis Aplicando una f.e.m. adecuada se puede conseguir que tenga lugar una reacción redox en el sentido que no es espontánea. En una

Más detalles

TRABAJO PRÁCTICO N 10 PILAS-ELECTRÓLISIS

TRABAJO PRÁCTICO N 10 PILAS-ELECTRÓLISIS TRABAJO PRÁCTICO N 10 PILAS-ELECTRÓLISIS Las celdas galvánicas (pilas) son dispositivos armados de tal forma que, usando reacciones redox espontáneas, generan energía eléctrica Ejemplo: Pila de Daniel:

Más detalles

LA NUTRICIÓN CELULAR

LA NUTRICIÓN CELULAR LA NUTRICIÓN CELULAR La composición química de los seres vivos Todos los seres vivos estamos formados por células y constituidos por el mismo tipo de sustancias químicas, las biomoléculas. Estas biomoléculas

Más detalles

J. L. Sánchez Guillén. IES Pando - Oviedo Departamento de Biología y Geología 1

J. L. Sánchez Guillén. IES Pando - Oviedo Departamento de Biología y Geología 1 J. L. Sánchez Guillén IES Pando - Oviedo Departamento de Biología y Geología 1 El agua es la molécula más abundante en los medios orgánicos. Un 70% del peso celular está formado por moléculas de agua.

Más detalles

ACTIVIDAD PRACTICA No. 8 BIOLOGIA CELULAR EXTRACCIÓN DE ADN

ACTIVIDAD PRACTICA No. 8 BIOLOGIA CELULAR EXTRACCIÓN DE ADN Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado Decanato de Ciencias de la Salud ACTIVIDAD PRACTICA No. 8 BIOLOGIA CELULAR EXTRACCIÓN DE ADN Octubre 2009 INTRODUCCION La molécula de ADN (que es la que se

Más detalles

Unidad II Sistemas Dispersos Elaborado por: Q.F.B. Guadalupe Echeagaray Herrera

Unidad II Sistemas Dispersos Elaborado por: Q.F.B. Guadalupe Echeagaray Herrera Química II (Química General y Orgánica) Unidad II Sistemas Dispersos Elaborado por: Sistemas Dispersos istemas Dispersos: Están constituidos por dos o más sustancias puras, unidas físicamente, (mezcladas).

Más detalles

TEMA 13: ESTERILIZACIÓN INDUSTRIAL Dr. Pedro F. Mateos

TEMA 13: ESTERILIZACIÓN INDUSTRIAL Dr. Pedro F. Mateos TEMA 13: ESTERILIZACIÓN INDUSTRIAL Dr. Pedro F. Mateos I. INTRODUCCION Para poder llevar a cabo una fermentación con éxito es imprescindible y obligatorio tener en todas las etapas cultivos libres de contaminantes,

Más detalles

UNIDAD 4. Reparto entre dos disolventes. Separaciones por Extracción

UNIDAD 4. Reparto entre dos disolventes. Separaciones por Extracción UNIDAD 4 Reparto entre dos disolventes. Separaciones por Extracción Introducción En los análisis químicos es necesario, después de la toma de muestra y su disolución en el disolvente adecuado, aislar el

Más detalles

HUMEDALES DE TRATAMIENTO DE DRENAJE DE MINA i. Todd Schrauf y Mark Smith

HUMEDALES DE TRATAMIENTO DE DRENAJE DE MINA i. Todd Schrauf y Mark Smith i Todd Schrauf y Mark Smith Humedales de tratamiento se han demostrado como un método tecnológicamente factible y costo efectivo para tratar el drenaje ácido de roca y otras aguas cargadas con metales.

Más detalles

H + =10-7 y ph=7. H + <10-7 y ph>7.

H + =10-7 y ph=7. H + <10-7 y ph>7. REACCIÓN DEL SUELO Las letras ph son una abreviación de "pondus hydrogenii", traducido como potencial de hidrógeno, y fueron propuestas por Sorensen en 1909, que las introdujo para referirse a concentraciones

Más detalles

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA NACIONAL

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA NACIONAL UNIVERSIDAD TECNOLOGICA NACIONAL FACULTAD REGIONAL ROSARIO DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA CATEDRA DE BIOTECNOLOGIA Trabajo práctico n 2 Esterilización 2009 Jefe de Cátedra: Ing. Eduardo Santambrosio

Más detalles

ELECTROFORESIS. Los procedimientos electroforéticos se basan en la migración de iones bajo la acción de un campo eléctrico

ELECTROFORESIS. Los procedimientos electroforéticos se basan en la migración de iones bajo la acción de un campo eléctrico ELECTROFORESIS ELECTROFORESIS Los procedimientos electroforéticos se basan en la migración de iones bajo la acción de un campo eléctrico La separación se logra por las distintas velocidades de migración

Más detalles

PROPIEDADES FUNCIONALES DE LAS PROTEÍNAS

PROPIEDADES FUNCIONALES DE LAS PROTEÍNAS PROPIEDADES FUNCIONALES DE LAS PROTEÍNAS Que es una Propiedad Funcional? Propiedades físicas y químicas que derivan del comportamiento de proteínas en sistemas alimenticios durante procesado, almacenamiento,

Más detalles

ASIGNATURA: QUIMICA AGROPECUARIA (RB8002) GUÍA N 1: DESTILACION DE DISOLUCIONES

ASIGNATURA: QUIMICA AGROPECUARIA (RB8002) GUÍA N 1: DESTILACION DE DISOLUCIONES I. Presentación de la guía: ASIGNATURA: QUIMICA AGROPECUARIA (RB8002) GUÍA N 1: DESTILACION DE DISOLUCIONES Competencia: El alumno será capaz de ejecutar una técnica de separación y purificación de soluciones

Más detalles

Estudio de la evaporación

Estudio de la evaporación Estudio de la evaporación Volumen del líquido Tipo de líquido Superficie del recipiente Altura del recipiente Forma del recipiente Presencia de una sal disuelta Introducción Todos hemos observado que una

Más detalles

PCR en Tiempo Real. Introducción

PCR en Tiempo Real. Introducción Introducción Página 1 de 6 Introducción general La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en inglés son PCR ("polymerase chain reaction"), es una técnica que fue desarrollada por Kary Mullis

Más detalles

CUERPO SUPERIOR FACULTATIVO OPCIÓN: QUÍMICA. I. TEORIA BASICA SOBRE ANALISIS QUiMICOS INORGANICOS

CUERPO SUPERIOR FACULTATIVO OPCIÓN: QUÍMICA. I. TEORIA BASICA SOBRE ANALISIS QUiMICOS INORGANICOS CUERPO SUPERIOR FACULTATIVO OPCIÓN: QUÍMICA I. TEORIA BASICA SOBRE ANALISIS QUiMICOS INORGANICOS TEMA 1. Volumetrías de neutralización. Aplicaciones. TEMA 2. Volumetrías de oxidación-reducción. Aplicaciones.

Más detalles

Practica la genética Ficha didáctica del profesorado Bachillerato

Practica la genética Ficha didáctica del profesorado Bachillerato Ficha didáctica del profesorado Bachillerato www.eurekamuseoa.es Extracción de ADN Cuál es la función de cada uno de los ingredientes utilizados para realizar la disolución tampón para la visualización

Más detalles

DISOLUCIÓN Y PRECIPITACIÓN DE SALES CAPITULO V. 5.1. Solubilidad 5.2. Disolución de compuestos poco solubles. 5.3. Precipitación Fraccionada

DISOLUCIÓN Y PRECIPITACIÓN DE SALES CAPITULO V. 5.1. Solubilidad 5.2. Disolución de compuestos poco solubles. 5.3. Precipitación Fraccionada CAPITULO V DISOLUCIÓN Y PRECIPITACIÓN DE SALES 5.1. Solubilidad 5.2. Disolución de compuestos poco solubles. 5.3. Precipitación Fraccionada El fenómeno de precipitación, así como el de disolución de precipitados

Más detalles

Unidad 7. Reacciones de transferencia de electrones. Oxidación- Reducción. Ajuste de reacciones de oxidación-reducción.

Unidad 7. Reacciones de transferencia de electrones. Oxidación- Reducción. Ajuste de reacciones de oxidación-reducción. Unidad 7. Reacciones de transferencia de electrones. Oxidación- Reducción Concepto de oxidación-reducción Número de oxidación Ajuste de reacciones de oxidación-reducción. Estequiometría Electroquímica

Más detalles

DANAGENE RNA PURIFICATION KIT

DANAGENE RNA PURIFICATION KIT DANAGENE RNA PURIFICATION KIT REF.0801.1 100 EXTRACCIONES REF.0801.2 500 EXTRACCIONES 1.INTRODUCCION Este kit permite la permite la obtención de ARN total a partir de cultivos celulares, tejidos animales,

Más detalles

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA CÉLULA.

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA CÉLULA. COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA CÉLULA. El 99% del peso de una célula está dominado por 6 elementos químicos: carbono, hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, fósforo y azufre. La química de los seres vivos, objeto de

Más detalles

La fosforilación oxidativa

La fosforilación oxidativa La fosforilación oxidativa arriba ) Bioenergética del transporte de electrones Transportadores de electrones en la mitocondria 4. Hierro. La reacción redox es la siguiente: Fe 2+ Fe 3+ + e - El átomo

Más detalles

4. Preparación de muestras para microscopía óptica

4. Preparación de muestras para microscopía óptica para microscopía óptica Criterios en las técnicas de preparación Técnicas para luz transmitida Técnicas para luz reflejada El objetivo de la preparación de muestras para microscopía óptica es permitir

Más detalles

Hidrosfera. 1) En las aguas epicontinentales se incluyen el mar Caspio, el Aral y el mar Muerto, además de lagos, ríos, etc.

Hidrosfera. 1) En las aguas epicontinentales se incluyen el mar Caspio, el Aral y el mar Muerto, además de lagos, ríos, etc. Hidrosfera Formación Cuando la Tierra se fue formando, hace unos 4600 millones de años, las altas temperaturas hacían que toda el agua estuviera en forma de vapor. Al enfriarse por debajo del punto de

Más detalles

www.elesapiens.com GLOSARIO DE QUÍMICA ABONO: Es cualquier sustancia orgánica o inorgánica que mejora la calidad de la tierra.

www.elesapiens.com GLOSARIO DE QUÍMICA ABONO: Es cualquier sustancia orgánica o inorgánica que mejora la calidad de la tierra. GLOSARIO DE QUÍMICA ABONO: Es cualquier sustancia orgánica o inorgánica que mejora la calidad de la tierra. ANTIBIÓTICO: Es una sustancia química que mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos

Más detalles

TEMA VII. REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES.

TEMA VII. REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES. TEMA VII. REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES. 1. CONCEPTOS DE OXIDACIÓN-REDUCCIÓN. Concepto restringido: Oxidación es la reacción química en la que hay ganancia de oxígeno, y reducción, la reacción

Más detalles

MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS

MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS Objetivos de los Análisis Químicos de Alimentos MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS DE ALIMENTOS De composición: proteínas, lípidos, carbohidratos, minerales, colorantes, etc. De identificación: de un producto

Más detalles

- Polímeros por crecimiento en cadena, se obtienen por adición de monómeros. Los monómeros suelen ser alquénicos.

- Polímeros por crecimiento en cadena, se obtienen por adición de monómeros. Los monómeros suelen ser alquénicos. Tema 10 Se llaman macromoléculas a los productos orgánicos de elevada masa molecular. Polímeros son macromoléculas cuya masa molecular puede alcanzar millones de umas. Son compuestos muy simples químicamente,

Más detalles