Reducción de la transmisión vertical del VIH en Colombia. Proyecto Madre-Hijo. Diagnóstico y seguimiento por laboratorio

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1 Reducción de la transmisión vertical del VIH en Colombia. Proyecto Madre-Hijo. Diagnóstico y seguimiento por laboratorio

2 El VIRUS

3 PRUEBAS PRESUNTIVAS ELISA: es la prueba convencional para la detección de anticuerpos (los cuales aparecen entre 2 y 12 semanas post infección) Sensibilidad mayor del 99.5% Especificidad 98%

4 DETECCIÓN DE ANTICUERPOS La mayoría de las personas desarrollan anticuerpos detectables antes de un período de 3 meses después de infectarse, con un promedio de 25 días. En casos poco comunes, puede tomar hasta 6 meses. Los CDC actualmente recomiendan hacerse la prueba hasta 6 meses después de la última exposición posible.

5 FALSOS POSITIVOS EN LAS PRUEBAS PRESUNTIVAS Personas con anticuerpos anti-hla Lupus eritematoso Transfusiones sanguíneas múltiples Infecciones virales agudas Anticuerpos IgM frente al core del virus B de la hepatitis y frente al virus de la hepatitis A Causas Desconocidas

6 FALSOS NEGATIVOS PRUEBAS PRESUNTIVAS Tratamientos inmunosupresores intensivos o prolongados. Procesos malignos. Transplante de médula ósea. Disfunciones de las células B Pérdida de estabilidad de los componentes del equipo de reactivos

7 gp160 gp120 gp41 Western blot Precursora de la envoltura Glucoproteína externa Glucoproteína transmembrana ENV p55 p24 p17 p66/p51 p32 Precursora del core La mayor proteína de la capside Proteína de la matriz superficie interna de la envoltura Transcriptasa reversa Integrasa GAG POL

8 CRITERIOS MÍNIMOS DE POSITIVIDAD DEL WESTERN BLOT FDA Al menos tres bandas: p24, p32 y gp41 u otra glicoproteína ARC CDC OMS Al menos 3 bandas una por cada uno de los 3 genes estructurales Al menos dos bandas: p24, gp41 y gp160/120 Al menos dos bandas de ENV

9 RESULTADOS El WB puede ofrecer tres tipos de resultados diferentes: Positivo: Cuando cumple los criterios de positividad adoptados por la técnica que se está empleando (presencia de ciertas bandas). Negativo: Cuando ninguna de las bandas presenta reacción. Indeterminado: Cuando no se cumplen completamente los criterios para ser positivo o negativo.

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11 WESTERN BLOT INDETERMINADO El mayor problema WB es la reactividad indeterminada de bandas p24, p55 o p % de las personas con ELISA y PCR negativas Para el VIH pueden encontrarse una o mas bandas en el WB Período de seroconversión para VIH-1 Estadio muy avanzado de la enfermedad Hijos de madres seropositivas Reactividad cruzada inespecífica

12 RESULTADO INDETERMINADO Se recomienda control con WB a los 3 meses y si continúa indeterminado se realiza otro western blot a los 6 meses. Si en éste momento el resultado es nuevamente indeterminado se descarta como negativo. (CDC) Se considera no infectado si presenta Western blot indeterminado por 6 meses o mas a partir de la última exposición, y no se presentan síntomas que sugieran la infección.

13 WESTERN BLOT FALSOS POSITIVOS Falsos positivos muy raro. Estudio donantes sangre: ningún falso positivo Otro estudio población de bajo riesgo: un falso positivo en personas. Una prueba es positiva si ambas presuntiva y confirmatoria son positivas.

14 TRANSMISION VERTICAL Cada día nacen en el mundo 1800 niños infectados por el VIH. Probabilidad de transmisión en ausencia de tratamiento antiretroviral %. En éstos niños desde el nacimiento hasta los 18 meses de edad, es posible detectar anticuerpos que provienen de la madre.

15 DIAGNOSTICO DEL VIH EN RECIEN NACIDOS Aunque no está aprobada para diagnóstico, la Carga Viral se considera como la técnica más ventajosa en la detección de la infección perinatal % positividad en niños con edades entre 1 y 3 meses; a partir de esa edad prácticamente más del 95% de los casos pueden ser diagnosticados por PCR. La mayor confiabilidad de este método se logra cuando el neonato ha cumplido los 60 días de vida. Carga viral negativa infección. en recién nacidos no descarta la

16 Embarazada que acepta la prueba ALGORITMO ALGORITMO DIAGNOSTICO Realizar prueba presuntiva 1ª Positiva Negativa 2ª Positiva WB VIH Negativo Positivo Infección por VIH Consejería Indeterminado Control en 3 meses Consejería post prueba

17 ENTREGA Y MANEJO DE LOS RESULTADOS Confidencialidad en la información. Acceso restringido a los resultados Consejería post test Diligenciamiento del formato por el médico tratante Notificación

18 MEDICIÓN CARGA VIRAL Carga viral CD4+ CD8+ SIDA Seguimiento de pacientes infectados

19 MEDICIÓN CARGA VIRAL RT- PCR (carga viral) Cantidad RNA libre en plasma. Nivel de detección Método Estándar: copias ARN/ ml de plasma. Método ultrasensible: copias ARN/ ml plasma

20 Carga viral Informe del resultado Copias de ARN/ml de plasma 10 Log. Menor de 400 copias ( Método estándar) Menor de 50 copias (Método Ultrasensible) Significa que no se logró detectar RNA viral o que está por debajo de ese número de copias.

21 UTILIDAD CARGA VIRAL Detección de RNA viral en hijos de madres infectadas Decidir el inicio tratamiento Verificar respuesta al tratamiento Verificar resistencia a la terapia No existen valores de referencia. Cada paciente es individual

22 Seguimiento Pacientes Caso 1 Mujer de 35 años de edad. 35 sem de gestación. ELISA No reactivo. Febrero 2/2004 Western blot: indeterminado. Febrero 2/2004 ELISA: No reactivo. Julio 29/2004 Cual es la conducta mas adecuada con ésta paciente?

23 Seguimiento Pacientes Caso 2 Paciente 2 meses edad hijo madre VIH positiva. ELISA: Reactivo Western blot: Positivo Carga viral: menor de 400 copias /ml plasma. Que prueba recomendaría a éste paciente y a qué edad?

24 Seguimiento Pacientes Caso 3 Paciente de 3 meses de edad hijo de Padre VIH positivo. Estudio en la madre: ELISA No Reactivo Abril 28 /2004 ELISA No Reactivo Julio 22 /2004. Carga Viral: Menor de 50 copias de ARN/ml de plasma. Julio 30/2004 Actualmente su hijo presenta diarrea y malestar general. Qué prueba se le debería realizar al bebé para descartar la infección?

25 Seguimiento Pacientes Caso 4 Paciente 5 días nacido. Hijo de madre VIH positiva la cual no recibió tratamiento antiretroviral. Carga viral madre: copias ARN/ml plasma Carga viral niño: menor de 400 copias ARN/ ml plasma. Que conducta se debería seguir en éste caso?

26 Seguimiento Pacientes Caso 5 Paciente de 18 meses de edad. No se conoce el estado serológico de la madre. ELISA Reactivo 6 meses de edad Western blot positivo 6 meses de edad. 12 meses de edad, hospitalizado por infección oportunista. Inició tratamiento antiretroviral. 14 meses edad Carga viral menor de 400 copias ARN/ml de plasma 18 meses de edad ELISA No reactivo

27 Flujograma de muestras para el proyecto

28 Pruebas presuntivas Ultramicroelisa Tecnosuma Internacional Suero o plasma no hemolizado ni contaminado. Se puede almacenar 2-8ºC por 5 días. Períodos mayores requieren congelación -20ºC Enviar al laboratorio departamental de salud Pública de Antioquia.

29 RECOLECCION DE LA MUESTRA suero gel Paquete células Mezclar por inversión para facilitar la formación del coágulo. Dejar en reposo 30 mns. Centrifugar durante 10 mns a 3000 rpm. Sólo centrifugar una vez. Enviar 4 C

30 Pruebas confirmatorias Western blot Se realizarán en el laboratorio departamental de salud pública de Antioquia. Resultados: 8 días.

31 Mujeres gestantes con WB positivo Al momento del diagnóstico y antes del parto: CD3, CD4 y CD8 Carga Viral

32 Hijos de madres infectadas Carga viral: 1 mes 6 meses de edad. CD3, CD4 y CD8 Una medición a los 6 meses de edad.

33 Carga Viral y Recuento CD4/CD8 Por el momento se encuentran centralizadas en Bogotá, en el centro de análisis molecular. Se suministran los tubos libres de DNAsas y RNAsas Anticoagulante EDTA La muestra debe estar en 24 horas en Bogotá.

34 PRUEBAS RÁPIDAS. Determine HIV 1-2 SENSIBLIDAD 100% ESPECIFICIDAD SUERO % PLASMA 100%

35 DETERMINE HIV 1-2 Inmunoensayo cualitativo de lectura visual inmunocromatografía in-vitro por FASE SÓLIDA Antígenos recombinantes y peptidos sintéticos inmovilizados C Positivo Antígenos y péptidos sintéticos inmovilizados Muestra Acs Anti VIH1/2 Ag-AC Conj. Anti Ac marcado con enzima Sustrato Rxn Color

36 DETERMINE HIV 1-2 Suero o Plasma EDTA Añada 50 ul sobre la superficie absorbente señalada con flecha- Espere mínimo 15 minutos hasta máximo 60 minutos y lea el resultado Lectura 1. Presencia en muestra de Anticuerpos HIV 2. No presencia en muestra de Anticuerpos HIV 3. Prueba Inválida 4. Prueba Inválida P P P P C C C C Cualquier tonalidad, aún si es más débil la línea del paciente que la del control indica Positivo

37 El LDSP de Antioquia brindará la asesoría necesaria en cuanto a la interpretación de las diferentes pruebas de laboratorio; sin embargo éstas no deben reemplazar una buena historia clínica y manejo adecuado del paciente por parte del clínico y personal de salud.

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