TEMA 17. Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de muestras fecales.

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1 TEMA 17 Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de muestras fecales.

2 Tema 17. Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de muestras fecales. 1. Características generales del tracto gastrointestinal (TGI) 2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal 3. Afecciones del tracto gastrointestinal 4. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador 5. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador 5.1. Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los los antibióticos) 6. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del tracto gastrointestinal 7. Toma de muestras 8. Transporte de muestras al laboratorio 9. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis 10. Cultivo de materia fecal

3 1. Características generales del tracto gastrointestinal (TGI)

4 2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal 3. Afecciones del tracto gastrointestinal Gastroenteritis Diarrea Disentería Enterocolitis 4. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador Acidez del estómago Peristaltismo Mucosa IgA secretora Presencia de eosinófilos

5 5. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador Microbiota normal es un factor importante Si disminuye se reduce resistencia a infecciones intestinales (favorece crecimiento de Candida, estafilococos, Pseudomonas y enterobacterias) 5.1. Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los antibióticos) Casi exclusivamente tras tratamiento con antimicrobianos Toxinas de Clostridium difficile (otros clostridios y Staphylococcus aureus) C. difficile número escaso y controlado por microbiota normal resistente natural a muchos antibióticos microbiota reducida, Clostridium prolifera y sintetiza toxinas enterotoxina y citotoxina provocan diarrea moderada (remite tras suspender tratamiento)

6 5.1. Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los antibióticos) Citotoxina Enterotoxina 1. Liberación de las dos toxinas por C. difficile. 4. La destrucción tisular y la respuesta inflamatoria producen diarrea por la salida incontrolada del contenido intestinal. 2. Degradación de la mucosidad intestinal por acción de la enterotoxina. Salida del contenido intestinal PMN PMN 3. Destrucción celular por acción de la citotoxina. Se produce respuesta inflamatoria.

7 6. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del tracto gastrointestinal a) Producción de toxinas (afectan a secreción de líquidos, funciones celulares o funciones neurológicas) b) Invasión del epitelio de la mucosa (destrucción celular, sangre, enfermedad sistémica) Además de bacterias, pueden provocar infecciones: Virus (rotavirus, hepatitis A, B, C, Norwalk) Protozoos (Entamoeba histolytica, Giardia lamblia) Parásitos (Anisakis, Taenia)

8 7. Toma de muestras 5 ml (2-15 ml) (líquidas), volumen equivalente a nuez (sólidas) Envase de cartón encerado o plástico (con cuchara) Muestras sospechosas de contener sigelas (muy delicadas), si es posible, sembrar al lado de la cama del paciente Si no hay heces hisopado rectal no válido detectar parásitos o antígenos virales válido para virus Diagnóstico de parásitos: aspirado duodenal o proctoscopia Si no se aísla patógeno en el primer cultivo, enviar dos muestras adicionales en días siguientes

9 7. Toma de muestras

10 8. Transporte de muestras al laboratorio Muestra no procesada en dos horas: colocar en medio de transporte (Cary- Blair); mantener a temperatura ambiente, no refrigerar Muestras para cultivo de virus no procesada en dos horas: refrigerar Hisopo rectal para cultivo de virus: colocar en medio Stuart modificado Si se sospecha presencia de Campylobacter: colocar inmediatamente hisopo en medio de transporte (evitar desecación) Muestras para detectar citotoxina de C. difficile: deben congelarse ( 70ºC ó 20ºC) hasta procesamiento (pueden ser descongeladas, centrifugadas y filtradas y el filtrado nuevamente congelado)

11 9. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis Preparaciones en fresco: detectar parásitos Microscopio de contraste de fases o campo oscuro: morfología y movilidad de Campylobacter y Vibrio Presencia de leucocitos indica existencia de proceso inflamatorio (relacionado con microorganismos de carácter invasivo) Tinción de Gram Neutrófilos PMN y acúmulos de cocos Gram positivos: posible infección por estafilococos Muchos bacilos Gram negativos delgados y curvos: posible infección por Campylobacter Gran número de bacilos Gram positivos grandes y delgados con paredes paralelas: presencia de Clostridium difficile

12 9. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis ELISA útil para detectar: Bacterias: Helicobacter pylori, Campylobacter, E. coli verotoxigénica. Toxinas: Clostridium difficile. Virus: rotavirus, adenovirus y astrovirus. Parásitos: Giardia, Cryptosporidium, Entamoeba histolytica. Sondas genéticas disponibles para: Campylobacter, Salmonella, Shigella, Yersinia, E. coli. PCR: Virus de la hepatitis B y C.

13 10. Cultivo de materia fecal Rutinariamente: investigar presencia de Campylobacter, Salmonella y Shigella Buscar Yersinia enterocolitica en áreas con incidencia elevada Cuando se solicite: búsqueda de vibrios, C. difficile y micobacterias Detección Salmonella y Shigella: agar sangre (permite crecimiento de levaduras, estafilococos, enterococos y bacilos Gram negativos) medio moderadamente selectivo (MacConkey o EMB) Agar de MacConkey Agar sangre Agar EMB

14 10. Cultivo de materia fecal Detección Salmonella y Shigella: medio selectivo y diferencial (agar entérico de Hektoen, agar XLD) medio muy selectivo (depende del coste) (agar SS, agar verde-brillante, agar sulfito de bismuto) Agar entérico de Hektoen Agar XLD Agar SS Agar verde brillante Agar sulfito de bismuto Detección bacterias Gram positivas: agar CNA Agar CNA

15 10. Cultivo de materia fecal Detección Campylobacter: Agar Campy Agar Campy (con sangre) (CO 2 y 42ºC) Agar Skirrow Agar Campy con sangre Agar Skirrow Detección Vibrio cholerae: Oxidasa sobre agar sangre (positiva) Agar TCBS Agar TCBS Prueba de la oxidasa sobre agar

16 10. Cultivo de materia fecal Agar CIN: Yersinia enterocolitica Agar CIN Agar CCYE: Clostridium difficile Caldos de enriquecimiento para aumentar probabilidad de detección de Salmonella, Shigella (caldo Gram negativos, caldo selenito) y Campylobacter (caldo tioglicolato Campy) Caldo selenito Agar CCYE Caldo tioglicolato Campy

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