Requisitos de las muestras y condiciones de análisis
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- Diego Duarte del Río
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1 Requisitos de las muestras y condiciones de análisis Página 1
2 INTRODUCCION A continuación se indican los requisitos generales que han de cumplir las muestras para poder ser analizadas en el Servicio de Espectrometría de Masas del Instituto de Química General (IQOG). Asimismo, se especifican los métodos de análisis de rutina que se aplicarán en cada uno de los espectrómetros y para cada tipo de muestra. En cualquier caso, si se desea el análisis de la muestra con un determinado equipo y en unas condiciones específicas tendrá que ser indicado en el formulario, ya que de lo contrario se aplicarán los procedimientos de rutina y siguiendo el criterio del responsable del Servicio. Si la muestra no fuese analizable por los métodos de rutina y requiriese una optimización del método, pasaría a la cola de espera, analizándose cuando se dispusiese del personal, tiempo y equipo necesarios para ensayar nuevas configuraciones o condiciones de análisis. Todas las pruebas necesarias se facturarán como muestras diferentes. En cualquier caso, el solicitante ha de ser consciente de que los resultados obtenidos pueden no ser satisfactorios. Página 2
3 A. LC MS QTOF Muestras a analizar sólidas o líquidas. Cantidad mínima 5 µg, indicando cantidad aproximada que se suministra y el disolvente a utilizar. disoluciones. Volumen mínimo de 100 µl a un nivel de concentración de mg/l. Se presentarán en viales compatibles con el automuestrador. Los disolventes más adecuados son metanol, acetonitrilo y agua. Moléculas analizables masa molecular hasta u si producen iones monocargados y hasta u si son iones policargados sustancias tanto polares (ESI) como apolares (APCI) volatilidad media o baja admite moléculas lábiles Interferentes en el análisis Evitar: ácidos y bases inorgánicos, TFA, fosfatos, boratos, citratos, SDS, poliacrilamida, detergentes, reactivos no volátiles (como los agentes alquilantes, reductores y tampones usados en la extracción y digestión de muestras biológicas), CH 2 Cl 2, etc. Tolerables (< 20 mm): tampones de sales volátiles como NH 4 Ac y NH 4 HCOO No interfieren: HCOOH, HAc, NH 4 OH, metanol, ACN Condiciones de análisis de rutina Análisis directo muestra sólida o disuelta preferiblemente en H 2 O:ACN, sin interferentes procedimiento: inyección por bucle en un caudal de 100 µl/min de acetonitrilo:h 2 O. En aquellos casos que sea necesario la potenciación de la ionización se empleará como regla general 0.5 % de HCOOH, 0.1 % de NH 4 OH o 10 mm de NH 4 HCOO Página 3
4 modo de registro: Full scan (ESI+/ o APCI+/, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) LC MS muestra sólida o disuelta preferiblemente en H 2 O:ACN, sin interferentes programa de elución: 100 % ACN con 0.1% HCOOH caudal = 100 µl/min tiempo (min) columna cromatográfica: C18 (100 x 2.1 mm, 3 µm) modo de registro: Full scan (ESI+/ o APCI+/, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) Página 4
5 B. LC MS Triple Cuadrupolo Muestras a analizar disoluciones. Volumen mínimo de 50 µl a un nivel de concentración de µg/l. Se presentarán en viales compatibles con el automuestrador. Los disolventes más adecuados son metanol, acetonitrilo y agua. Moléculas analizables masa molecular hasta u si producen iones monocargados y hasta u si son iones policargados sustancias tanto polares (ESI) como apolares (APCI) volatilidad media o baja admite moléculas lábiles Cantidad de muestra necesaria y niveles de concentración 1 como regla general, requiere un volumen mínimo de 100 µl a un nivel concentración de 1 pg/µl. Interferentes en el análisis evitar: ácidos y bases inorgánicos, TFA, fosfatos, boratos, citratos, SDS, poliacrilamida, detergentes, reactivos no volátiles (como los agentes alquilantes, reductores y tampones usados en la extracción y digestión de muestras biológicas), CH 2 Cl 2, etc. tolerables (< 20 mm): Tampones de sales volátiles como NH 4 Ac y NH 4 HCOO no interfieren: HCOOH, HAc, NH 4 OH, metanol, ACN 1 Son datos indicativos, pues también son función de los aditivos, contaminantes, sales, etc. presentes en las muestras. Cuando existan interferentes, el solicitante deberá intentar purificar las muestras para su eliminación o reducción. Sólo en casos aislados, se podría suplir la presencia de algún interferente con un volumen o una mayor concentración de la sustancia en la muestra. Página 5
6 Condiciones de análisis de rutina análisis directo muestra sólida o disuelta preferiblemente en H 2 O:ACN, sin interferentes procedimiento: inyección por bucle en un caudal de 100 µl/min de acetonitrilo:h 2 O. En aquellos casos que sea necesario la potenciación de la ionización se empleará como regla general 0.5 % de HCOOH, 0.1 % de NH 4 OH o 10 mm de NH 4 HCOO modo de registro: Full scan (ESI+/ o APCI+/, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) LC MS muestra disuelta preferiblemente en H 2 O:ACN, sin interferentes programa de elución: 100 % ACN con 0.1% HCOOH caudal = 100 µl/min tiempo (min) columna cromatográfica: C18 (100 x 2.1 mm, 3 µm) modo de registro: Full scan (ESI+/ o APCI+/, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) Condiciones de análisis para el desarrollo metodológico debido a su particular naturaleza, en caso de llevar a cabo algún desarrollo de metodologías analíticas sobre el equipo, será responsabilidad del usuario proporcionar la columna cromatográfica y las condiciones analíticas de partida Página 6
7 el plan de trabajo a seguir será establecido de mutuo acuerdo entre el usuario y los responsables del servicio, de manera que la consecución de los objetivos se compatibilice con la disponibilidad y posibilidades del equipo el análisis de resultados será llevado a cabo por parte del usuario será responsabilidad del personal técnico del Servicio procurar un satisfactorio desarrollo de los análisis encomendados, así como poner a disposición de los usuarios los resultados que se vayan obteniendo Página 7
8 C. GC MS Muestras a analizar gaseosas, líquidas o sólidas en disolución. Volumen mínimo de 100 µl a un nivel de concentración de 10 mg/l. Se presentarán en viales compatibles con el automuestrador. Los disolventes más adecuados son los orgánicos volátiles de baja polaridad. moléculas analizables masa molecular hasta u sustancias de polaridad media o baja volatilidad media o baja sólo moléculas térmicamente estables interferentes en el análisis Evitar ácidos, bases y sales inorgánicos, así como cualquier sustancia no volátil condiciones de análisis de rutina muestra (volátil a 300 C y presión atmosférica): líquida, gaseosa o disuelta en disolventes volátiles (metanol, n-hexano, acetona, etc.), sin interferentes programa de elución: 300 Temperatura columna ( C) caudal = 1 ml/min tiempo (min) columna cromatográfica: Rtx-5 (Restek) 30 m x 0.25 mm x 0.25 µm modo de registro: Full scan (EI+) Página 8
9 Condiciones de análisis para el desarrollo metodológico debido a su particular naturaleza, en caso de llevar a cabo algún desarrollo de metodologías analíticas sobre el equipo, será responsabilidad del usuario proporcionar la columna cromatográfica y las condiciones analíticas de partida el plan de trabajo a seguir será establecido de mutuo acuerdo entre el usuario y los responsables del servicio, de manera que la consecución de los objetivos se compatibilice con la disponibilidad y posibilidades del equipo el análisis de resultados será llevado a cabo por parte del usuario será responsabilidad del personal técnico del Servicio procurar un satisfactorio desarrollo de los análisis encomendados, así como poner a disposición de los usuarios los resultados que se vayan obteniendo Página 9
Los enlaces C F son polares pero la geometría tetraédrica
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