El Laboratorio en la Vigilancia de Influenza

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Ramón Ríos Peña
hace 7 años
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1 El Laboratorio en la Vigilancia de Influenza QBP MANUEL ARROYO ROJAS Laboratorio de Virus Respiratorios del

2 TIPOS DE MUESTRAS Exudado Faríngeo Exudado Nasofaríngeo Aspirado Bronqueoalveolar Suero (pareados)

3 Tipo de muestra Método Medio/contenedor/ forma de envío Tiempo Técnica Nasofaríngeo o Faríngeo Hisopo: usar sólo s hisopo estéril de dacrón o rayón n con mango de plástico Viales estériles en 2.5 ml de medio de transporte viral. Enviar con refrigerantes de 4 a 8 C Durante la fase inicial de la enfermedad (primeros 4 días de iniciado los síntomas). Inmunofluorescencia Cultivo viral RT-PCR Lavado bronquioalveolar La muestra debe ser tomada sólo s por un médico o una persona experimentada en el proceso (Hospital). Viales estériles en 5 ml de medio de transporte viral. Enviar con refrigerantes de 4 a 8 C Cuando sea clínicamente apropiado en paciente intubado, con enfermedad pulmonar severa. (primeros 4 días d de iniciado los síntomas). s Inmunofluorescencia Cultivo viral RT-PCR Conjuntiva Hisopo: usar sólo s hisopo de dacrón o rayón n con mango plástico. Viales estériles en 2.5 ml de medio de transporte viral. Enviar con refrigerantes de 4 a 8 C En caso de conjuntivitis, tan rápido r como sea posible en el curso de la enfermedad. (primeros 4 días de iniciado los síntomas). Inmunofluorescencia Cultivo viral RT-PCR Suero Por venopunción,, en tubos sin anticoagulante >1ml Enviar con refrigerantes de 4 a 8 C Fase aguda: tan rápido r como sea posible (hasta 7 días) Detección n de anticuerpos totales por inhibición n de la hemaglutinación Tejido (autopsia) Pulmón Contenedor estéril con medio de transporte viral fresco, congelado a -70 C (primeros 4 días d de iniciado los síntomas). s Inmunofluorescencia. Cultivo viral RT-PCR

4 EXUDADO FARINGEO 4-8 C SE RECOMIENDA PARA NIÑOS MAYORES DE 5 AÑOS Y ADULTOS

5 EXUDADO NASOFARINGEO Hisopo de Rayon o dacrón 4-8 C RECOMENDADO PARA NIÑOS MENORES DE 5 AÑOS

6 EXUDADO CONJUNTIVAL Girar el hisopo Hisopo de rayón o dacrón

7 Título Viral y Severidad de los Síntomas de la Influenza. SEVERIDAD DE LOS SÍNTOMAS TÍTULO VIRAL INICIO SÚBITO DE LOS SÍNTOMAS PICO DE REPLICACIÓN VIRAL TIEMPO (DIAS) TÍTULO VIRAL Y SEVERIDAD DE LOS SÍNTOMAS

8 TÉCNICAS USADAS PARA LA IDENTIFICACION DEL VIRUS DE INFLUENZA Inmunofluorescencia Indirecta Aislamiento en Cultivo Celular Inhibición de la Hemaglutinación RT-PCR RT-PCR En Tiempo Real

9 PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO Inmunofluorescencia Indirecta Células epiteliales infectadas con virus de influenza tipo A Tiempo de desarrollo de la técnica: 4 horas Permite identificar entre influenza: Tipo A y B Subtipos: H3, H1 y H5 Importancia clínica y epidemiológica

10 Diagrama de Flujo para el Diagnóstico de Influenza Registro en el laboratorio Registro en Base de datos Tratamiento de la muestra Inmunofluorescencia Indirecta Notificación inmediata al Centro de Salud ó LESP y a la DGE IFI Influenza A/B Positiva IFI Negativo Aislamiento en cultivo de células MDCK o en Embrión de Pollo IFI Subtipificación ( A/H1, A/H3) Captura de resultados Infolab Subtipificación por RT-PCR (A/H1, A/H3, A/H5, B) Subtipificación por Inhibición de la Hemaglutinación Impresión de resultados Entrega de resultados a Recepción de Muestras Envío de cepas al CDC(Atlanta) Para Referencia Internacional

11 ACTIVIDADES DE LA RED DE LABORATORIOS DE INFLUENZA LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL AISLAMIENTO VIRAL: CULTIVO CELULAR (MDCK) HUEVO EMBRIONADO HEMAGLUTINACION: PRESENCIA VIRAL. INHIBICIÓN DE LA HEMAGLUTINACION: SUBTIPIFICACION. RT-PCR PCR en Tiempo Real Secuenciación DIAGNOSTICO DIFERENCIAL (OTROS VIRUS RESPIRATORIOS) LABORATORIOS REGIONALES INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: TAMIZADO Y TIPIFICACION. RT-PCR LABORATORIOS ESTATALES INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: TAMIZADO Y TIPIFICACION. PRUEBAS RAPIDAS

12 ENVÍO DE MUESTRAS

13 TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Asegurarse de mantener la muestra 4-8 C En medio de transporte vial, las muestras se recibirán hasta 5 días después. Las muestras mantenidas en solución salina debe enviarse de inmediato. Utilizar una hielera aislantes y resistente a impactos Debe contener refrigerantes Las muestras deben permanecer en posición vertical La tapa de la hielera debe sellarse con cinta adhesiva.

14 MEDIO DE TRANSPORTE VIRAL Albúmina bovina Gentamicina Penicilina Estreptomicina Fungizona Bicarbonato de sodio Solución n balanceada de Hank s

15 SISTEMA DE TRIPLE EMBALAJE Y UN 4º 4 CONTENEDOR PARA TRANSPORTE EN FRÍO O O EN CONGELACIÓN

16 MANUALES RECOMENDADOS 1999: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC.

17 Equipos Comerciales para el Diagnóstico Rápido R de Influenza Directigen FLU OIA QuickVue ZstatFlu Flu A + B

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