FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA

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1 Citoquímica II 2016

2 LMC

3 FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA Hidroliza monoésteres del ácido fosfórico a ph alcalino (9,1-9,6) Marcadora de la granulación específica de los neutrófilos. Actividad asociada con un componente tubular, membranoso, irregular e intracitoplasmático.

4 FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA Muestra: frotis de sangre periférica Procesar, SIEMPRE, en paralelo un frotis control conservado en idénticas condiciones. Fundamento: α naftil fosfato ácido de sodio (veronal sódico ph 9) FAG α naftilo + fostato Fast Blue RR precipitado negro

5 FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA Se observa: Citoplasma: patrón difuso o granular que varía desde el grisáceo al negro-parduzco intenso en neutrófilos y excepcionalmente en metamielocitos Núcleos: teñidos de color verde.

6 FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA Grado 0 Grado 1 Grado 2 Grado 3 Grado 4

7 FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA Cómo se determina el score de una muestra? Observar 100 neutrófilos y establecer la intensidad de reacción de cada uno. Multiplicar el n de neutrófilos por su grado de intensidad Sumar el resultado Grado Neutrófilos observados Intensidad de reacción 0 30 X 0 0 I 25 X 1 25 II 30 X 2 60 III 10 X 3 30 IV 5 X 4 20 V. de Ref = 95 +/- 20 TOTAL: = SCORE

8 FOSFATASA ALCALINA GRANULOCÍTICA SCORE DISMUNUIDO: LMC (valores muy bajos o nulos) diagnóstico diferencial con reacciones neutrofílicas HPN (a veces) Hipofosfatemia hereditaria. Síndrome de Adisson. LES Anemias sideroblásticas Eritroleucemias SCORE ELEVADO: Neutrofilias 2ª a infecciones, neoplasias, cirrosis hepática y síndrome de Down. PV Reacciones leucemoides. Enfermedad de Hodking. Infartos de miocardio Síndrome de Cushing Embarazo Corticoides

9 POLICITEMIA VERA Mutación Jak 2 V617F Descartar poliglobulias secundarias

10 TROMBOCITEMIA ESENCIAL Trombocitosis Plaquetas dismórficas y macroplaquetas Leucocitosis

11 SÍNDROMES MIELOPROLIFERATIVOS CRÓNICOS CITOGENÉTICA - Cromosoma Filadelfia : traslocación recíproca t(9;22) - Mutación Jak2V617F BIOLOGÍA MOLECULAR - Gen de fusión BCR-ABL

12 SÍNDROMES LINFOPROLIFERATIVOS CRÓNICOS

13 SÍNDROMES LINFOPROLIFERATIVOS CRÓNICOS

14 FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA Fosfomonoesterasa con actividad a ph 4,7-5,0 Presente en los lisosomas de: mielocitos, neutrófilos, linfocitos, células plasmáticas, megacariocitos, plaquetas, monoblastos, promonocitos, monocitos y macrófagos.

15 FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA Método de LoeffLer modificado Fundamento α naftil fosfato ácido de sodio (citrato a ph 4,9) FAL α naftilo + fosfato Fast Garnett (granate fijo) Gránulos rojo-parduzcos citoplasmáticos

16 FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA Reacción positiva: granulocitos, Linfocitos T, monocitos Reacción negativa: GR, Linfocitos B Eosinófilo Monocito

17 FOSFATASA ÁCIDA LEUCOCITARIA Aplicación diagnóstica Diferenciar población linfocítica: LT (++++) de LB (+ débil/-) Excepción: Tricoleucemia (++++), tartrato R

18 β-glucuronidasa Enzima lisosómica presente en los leucocitos y en la serie roja excepto los hematies. Fundamento Naftol AS-BI β-d glucurónido β-glucuronidasa Pararosanilina hexazotizada Naftol AS-BI-HPR (complejo cromogénico insoluble Rojo)

19 Resultados β-glucuronidasa Se observa: patrón focal o granular difuso de color rojo. Reacción Positiva: timocitos maduros, LT circulantes y LB inmaduros Reacción Negativa: monocitos y granulocitos Corre en paralelo con la fosfatasa ácida, excepto en los tricoleucocitos (FAc aumentada y β-glucuronidasa disminuída)

20 LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA Sombras de Gumprecht

21 LLC: Inmunofenotipo

22 Síndromes mielodisplásicos Son un grupo de enfermedades clonales que se caracterizan por una hematopoyesis inefectiva y displásica

23 Síndromes mielodisplásicos Displasia de la serie granulocítica

24 Síndromes Mielodisplásicos Displasia de la eritropoyesis

25 Síndromes Mielodisplásicos Displasia de la serie megacariocítica

26 Reacción de Perls

27 GRACIAS POR SU ATENCIÓN.

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