TRABAJO PRÁCTICO Nº 5 ESTUDIO DE ANEMIAS. Emilse Ledesma Achem

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1 TRABAJO PRÁCTICO Nº 5 ESTUDIO DE ANEMIAS Emilse Ledesma Achem

2 EVALUACIÓN CLÍNICA: Cuándo fue el último análisis sin anemia? Origen étnico Antecedentes personales y heredofamiliares ESTUDIO DE LAS ANEMIAS Tratamiento previo con hierro, ácido fólico, vitamina B12. ESTUDIOS DE LABORATORIO: 1) Hemograma. Buena observación del frotis. 2) Reticulocitos 3) Estudio del metabolismo del hierro 4) Determinaciones especiales: - Electroforesis de Hb - ROE

3 Toma de muestra Hemograma Reticulocitos Frotis Electroforesis de Hb Fe TIBC % Saturación Ferritina ROE

4 RECUENTO DE RETICULOCITOS 3 gotas de sangre entera + Incubar 37 ºC 3 gotas de Azul Brillante de Cresilo 15 minutos Extendido Reticulocitos % = Nº Reticulocitos Contados x 100 Nº Hematíes observados Ret. corregidos Reticulocitos Contados % x Hto pac. = Hto. Promedio Normal

5 RETICULOCITOS

6 Estudio del Metabolismo del hierro Determinación de la concentración de hierro sérico Método Colorimétrico: Fundamento Fe 3+ Fe 3+ TF Buffer ph 3,7 Reductor TF + Fe 2+ Fe 2+ Fe 2+ + PBTS Complejo Fe 2+ coloreado

7 Muestra Limpieza del material TECNICA Blanco Standard Desconocido H 2 O 500 ul Standard ul Muestra ul Buffer/Reductor 2 ml 2 ml 2 ml Mezclar y leer a 560 nm PBTS 1 gota 1 gota 1 gota Blanco de suero Mezclar y leer a 560 nm contra agua destilada Varones: μg/dl Mujeres: μg/dl Niños (1-12 años): μg/dl

8 TIBC : CAPACIDAD TOTAL DE UNIÓN DE HIERRO A TRANSFERRINA Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ TF Fe 3+ TF Fe 3+ + Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ ph>7,2 TF Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 3+ TF TF TF TF Fe 3+ TF Fe 3+ Fe 3+ TF Fe 3+ Fe 3+ + Agente quelante r.p.m. SEGUIR CON TECNICA DE HIERRO SERICO VR: ug/dl

9 % de Saturación de la Transferrina % Saturación = Fe sérico ug/dl Transferrina ug/dl x 100 VR: % INTERPRETACIÓN Fe sérico Anemia ferropénica A.T.C. Talasemia Anemia Sideroblástica N o TIBC % Saturación N o N N o N

10 Estadios de la deficiencia de hierro Estadio 1 Estadio 2 Estadio 3 PARÁMETROS Depleción de los depósitos de Fe Depleción del transporte de Fe Depleción del Fe funcional Hemoglobina Fe sérico TIBC Ferritina N N N N Anemia Ferropénica

11 Prueba 1 RESISTENCIA OSMÓTICA ERITROCITARIA Medida de la capacidad de una población de hematíes para resistir el efecto hipotónico del medio g/L 0 % de hemolisis Soluciones de NaCl de concentración decreciente 0 g/l [NaCl] 100 % de hemolisis

12 Para cada eritrocito la ROE depende de la relación existente entre su superficie y el volumen. Esta prueba proporciona información sobre el cambio de forma del eritrocito (relación superficie / volumen) a partir de su forma normal (disco bicóncavo). -Esferocitosis hereditaria -AHA Anemias microcíticas hipocrómicas

13 ROE Normal ROE Disminuida ROE Aumentada

14 La ROE se expresa como la concentración de NaCl necesaria para producir un 50% de hemólisis (H 50 ). Valores de Referencia Hemólisis 50% inmediata: 4,0 4,5 g/l Hemólisis 50% post-incubación: 4,6 5,9 g/l Paciente Talasémico: disminución de la fragilidad osmótica (aumento de la ROE) H 50 % = 3,4g/L. 2-Paciente Normal: H 50 %= 4,4 g/l. 3-Paciente con Esferocitosis hereditaria: Aumento de la fragilidad osmótica (disminución de la ROE) H 50 %= 5,9 g/l.

15 ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINA Electroforesis de hemoglobina a ph alcalino Electroforesis de hemoglobina a ph ácido Muestra: sangre entera (EDTA, heparina). Las muestras deben ser lavadas 3 veces en solución salina isotónica. Hemolizado: se puede usar una solución lisante (EDTA, KCN y agua) o lisar por congelamiento y descongelamiento en el freezer. Siempre procesar, simultáneamente, una muestra control. Tiras de acetato de celulosa o gel de agar Coloración

16 PATRÓN ELECTROFORÉTICO A PH ALCALINO - + NORMAL b-talasemia MENOR RASGO FALCIFORME ENFERMEDAD SC SANGRE NORMAL DE CORDÓN RASGO C CONTROL º CA 1 A 2 S F A C D E-O G º: Indica el origen

17 PATRÓN ELECTROFORÉTICO A PH ÁCIDO + - NORMAL RASGO FALCIFORME RASGO D ENFERMEDAD SC ENFERMEDAD SE SANGRE NORMAL DE CORDÓN RASGO C CONTROL C S º A F D-O E-G º: Indica el origen

18 ELECTROFORESIS DE HB A PH ALCALINO A F A 2 1-b-talasemia menor (Hb A2 aumentada) 2- b-talasemia homocigota (Hb F únicamente, Hb A y Hb A2 ausentes) 3-Normal

19 Hb disminuida 3 Regenerativas IPR 1 Arregenerativas A. Posthemorrágicas Agudas Intracorpusculares A. Hemolíticas Extracorpusculares HPN (HAM) D-A-D (A.Ferropénica) Fe-Tf-Ferritina N/A D-D ó N-A (ATC) P. Especiales (ROE, Elect. Hb) Inmunes PCD No Inmunes D (A.Sideroblástica- R. de Perls) VCM A (A.Megaloblástica) N (A.Aplásica, por ocupación) D= disminuido A= Aumentado N=Normal

20 Anemia Ferropénica RBC: 1.66 M/µL HGB: 3.0 g/dl HCT: 11.0 % MCV: 63 fl MCH: 18.1 pg MCHC: 28.0 g/dl RDW: 20.0 % RBC

21 RBC: 2.94 M/µL HGB: 10.2 g/dl HCT: 31.8 % MCV: 108 fl MCH: 34.7 pg MCHC: 32.1 g/dl RDW: 22.8 % Anemia Megaloblástica

22 Hemoglobinopatía S heterocigota

23 GRACIAS POR SU ATENCIÓN!