PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI EN ALIMENTOS UTILIZANDO AGAR VRB-MUG

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Valentín Tebar Miguélez
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1 PRT Página 1 de 8 1. OBJETIVO Enumerar los microorganismos E. coli presentes en una muestra de alimento 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE Muestras de alimentos que se requiera realizar método rápido de Recuento de E. coli 3. FUNDAMENTO La incorporación de 4-methylumbelliferyl- beta- D- glucoronide (MUG) en Agar Rojo Neutro permite la detección de E. coli de entre otras colonias coliformes a través de la detección de la actividad beta- glucoronidasa. E. coli produce la enzima beta-glucoronidasa la cual hidroliza el MUG produciendo un compuesto fluorogénico detectable con luz UV a 366 nm. Las cepas típicas de E. coli, colonias rojas con precipitación biliar, muestran fluorescencia. Los coliformes que no son E. coli pueden producir colonias rojas con zonas de precipitación biliar pero son MUG negativas. 4. REFERENCIAS 4.1 Bacteriological Analytical Manual Online Septiembre 2002 Capitulo 4, letra G 5. TERMINOLOGÍA 5.1 No Aplica 6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 EQUIPOS Todo lo requerido para el método convencional, PRT Lámpara UV 6 Watt 6.2 MATERIALES Lentes UV

2 PRT Página 2 de MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS Todo lo requerido para el método convencional PRT Agar VRB-MUG (100 ug. de MUG/ ml. de medio) 7. DESARROLLO 7.1 TEST PRESUNTIVO Realizar el método convencional descrito en el punto 7 del PRT Método de recuento en placa para la determinación de coliformes en alimentos, utilizando agar VRB-MUG Utilizar cepa de E. coli como control positivo Al término del período de incubación, observar la fluorescencia de las colonias bajo luz UV Anotar los resultados en el Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos 7.2 CÁLCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS Considerar para hacer el recuento aquellas colonias que presentan fluorescencia bajo la luz UV Los resultados del Recuento de E. coli se expresan cuantitativamente en Nº ufc/g o ml. de muestra.

3 PRT Página 3 de 8 8. REGISTROS - Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos - Registro cepas control de incubadoras - Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli - Registro control de ambiente 9. ANEXOS - Anexo Nº 1. RG Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos. - Anexo Nº 2. RG Registro cepas control de incubadoras. - Anexo Nº 3. RG Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli - Anexo Nº 4. RG Registro control de ambiente.

4 PRT Página 4 de 8 Anexo Nº 1. RG Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de alimentos Nº:...Tipo de muestra :...Analista... Fecha /hora recolección...fecha/hora análisis:...tº Ambiental. E. coli y coliformes Medios CLST (S) CBCB Diluyente VRBA Caldo EC C. Tripotona C. RM-VP C. Koser Pipeta 1/5 ml Incubadora/ Baño term. PORCION DE MUESTRA (ml) COLIFORMES PRESUNTIVO CLST o VRBA 24 / 48 hrs.a 35ºC COLIF. CONFIRMATIVO CBVB 24 / 48 hrs. a 35 ºC E.coli CONFIRMATIVO Caldo E.C: a 44,5ºC 24 h / 48 h PRUEBAS BIOQUÍMICAS IMViC Indol RM V. P Citrato

5 PRT Página 5 de 8 Salmonella Medios Pre-enriq. P/A TT Rapa. Iodo Verde Bri. XLD Hecktoen Bismuto TSI LIA MIO Pipeta 1/5 ml Incubadora /Baño ter. Caldos enriquecimiento Agares Selectivos Tetrathionato Rappaport T C T C Agar Bismuto Sulfito Tetrathionato Rappaport T C T C Agar Hektoen Tetrathionato Rappaport T C T C Agar XLD TSI LIA MIO SEROLOGIA Otros N.M.P. Coliformes :...germ/g Rto coliformes...ufc/g N.M.P. E. coli :...germ /g Rto de E. coli...ufc/g P/A E.coli /g:... P/A Salmonella en 25 o 50 g :...Fecha informe

6 PRT Página 6 de 8 Anexo Nº 2. RG Registro cepas control de incubadoras Incub. Nº inventario Incub. Nº inventario Incub. Nº inventario Incub.Nº inventario FECHA CONTROLES CONTROLES CONTROLES CONTROLES INIC: LST BVB VRB LST BVB VRB LST BVB VRB LST BVB VRB (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) (+, - ) Anexo Nº 3. RG Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli FECH A Caldo Lauril Sulfato Triptosa concentra d Caldo Lauril Sulfato Triptosa simple Agar Rojo Neutro Cristal Violeta (VRB) Caldo Bilis Verde Brillant e Cald o EC Cald o A-1 Agar Rojo Neutro Cristal Violeta - Glucosa (VRBG) Agar MacConke y Sorbitol Agar glucosa (enterobacteria) INIC

7 PRT Página 7 de 8

8 PRT Página 8 de 8 Anexo Nº 4. RG Registro control de ambiente LABORATORIO:...MES :...AÑO :... FECHA / LOTE MEDIO CONTROL AMBIENTE MESON DE TRABAJO CONTROL AMBIENTE FLUJO LAMINAR Lado izquierdo Lado derecho Izquierda fondo Izquierda afuera Derecha fondo Derecha afuera INIC abierta cerrada abierta cerrada abierta cerrada abierta cerrada abierta cerrada abierta cerrada

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