TEMA 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos

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1 TEMA 12 Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos

2 Tema 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 1. Nacimiento de la era de los antibióticos 2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 2.1. En surco 2.2. Con tiras de papel 2.3. En caldo Cálculo de la CMI Cálculo de la CMB 2.4. Con discos de papel Estandarización del medio de cultivo Estandarización del inóculo Estandarización de los discos Concentración de algunos antimicrobianos Condiciones de incubación y lectura de los resultados Cepas bacterianas para control de calidad de las pruebas Fundamento de la prueba de Bauer-Kirby Correlación entre el halo de inhibición y la CMI Ejemplos de sensibilidad/resistencia Resultados atípicos Limitaciones de la prueba de Bauer-Kirby

3 Tema 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 3. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos con determinación de la CMI 3.1. Técnica de dilución en caldo 3.2. Técnica de dilución en agar 3.3. Técnica de microdilución en caldo 3.4. Test Épsilon

4 1. Nacimiento de la era de los antibióticos Penicilina 1929 Estreptomicina 1943 Gramicidina y tirocidina 1943 Clortetraciclina 1944

5 2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 2.1. En surco 2.2. Con tiras de papel Realizada por Fleming

6 2.3. En caldo Efectuar diluciones dobles del antibiótico en un medio de crecimiento líquido Concentración (mg/l) Añadir una concentración baja (aproximadamente /ml) de las colonias de prueba a cada dilución Concentración (mg/l) Observar el crecimiento tras h de incubación a 37 ºC Concentración (mg/l) CMI = 0,25 mg/l

7 Cálculo de la CMI CMI = 2 mg/l

8 Cálculo de la CMB CMB = 1 mg/l

9 2.4. Con discos de papel Prueba de Bauer-Kirby Zona de inhibición

10 Estandarización del medio de cultivo Agar de Müeller-Hinton Infusión de carne de vaca Casaminoácidos Almidón Agar 300 g/l 17,5 g/l 1,5 g/l 17 g/l Características Permite crecer a la mayoría de los patógenos Transparente No tiene PABA ph Espesor

11 Estandarización del inóculo Tomar 4-5 colonias Resuspender en TSB Incubar hasta turbidez 0,5 de MacFarland Sembrar tres veces rotando la placa 120º

12 Estandarización de los discos Colocación manual desde el tubo Discos de alto poder ( µg de los antibióticos) Control calidad (FDA) Posición Colocación manual o con un dispensador No mover Colocación con un dispensador automático Colocación manual con pinzas estériles

13 Concentración de algunos antimicrobianos

14 Condiciones de incubación y lectura de los resultados Incubación Observación de los halos de inhibición Medida de los diámetros de los halos

15 Cepas bacterianas para control de calidad de las pruebas

16 Fundamento de la prueba de Bauer-Kirby

17 Correlación entre el halo de inhibición y la CMI Elaborado por el CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute)

18 Ejemplos de sensibilidad/resistencia Para Staphylococcus aureus

19 Resultados atípicos Microorganismos invasores Colonias aisladas dentro del halo

20 Resultados atípicos Superposición de halos de inhibición Placas deficientemente inoculadas

21 Limitaciones de la prueba de Bauer-Kirby Microorganismos de desarrollo lento Microorganismos anaerobios Antibióticos de difusión lenta Los resultados se refieren a los niveles de antibióticos que se pueden conseguir en suero Los resultados no se extrapolan necesariamente a todos los antibióticos de un mismo grupo

22 3. Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos con determinación de la CMI Técnica de dilución en caldo Técnica de dilución en agar Técnica de microdilución en caldo Test de Épsilon (E-test) 3.1. Técnica de dilución en caldo

23 3.2. Técnica de dilución en agar 32 µg/ml 16 µg/ml 8 µg/ml 4 µg/ml 2 µg/ml Inoculación Incubación Lectura

24 3.2. Técnica de dilución en agar Replicador manual Replicador de Steers

25 3.2. Técnica de dilución en agar

26 3.2. Técnica de dilución en agar Ventajas microorganismos Control de calidad Placas comerciales Barata Automatización Adecuada para laboratorios con gran volumen de trabajo CMI

27 3.3. Técnica de microdilución en caldo Ventajas antibióticos diferentes Más microorganismos a menos antibióticos Pipetas multicanal Lectura automatizada Resultados en 4 horas

28 3.4. Test Épsilon E-test (tiras patentadas, AB Biodisk, Suecia) Gradiente logarítmico de concentración Zona de inhibición elipsoidal (no circular) Valor de la CMI en la escala Método cómodo, pero caro, no para uso rutinario CMI

29 3.4. Test Épsilon CMI = 2 mg/l CMI = 0,64 mg/l

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