ESPERMATOBIOSCOPÍA OBJETIVO PARTICULAR. Al finalizar la práctica el alumno será capaz de: OBJETIVOS ESPECÍFICOS CONSIDERACIONES TEÓRICAS

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1 ESPERMATOBIOSCOPÍA OBJETIVO PARTICULAR Al finalizar la práctica el alumno será capaz de: Conocer el uso, utilidad e indicaciones de la espermatobioscopía como método paraclínico diagnóstico. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1. Aprender los valores normales y anormales para el analisis del semen por la OMS 2. De acuerdo a lo aprendido realizar una espermatobioscopía en base al material disponible 3. Aplicar los conocimientos aprendidos para la realización de las diferentes tinciones Introducción CONSIDERACIONES TEÓRICAS El análisis del liquido seminal es un estudio que se utiliza en la evaluación de la fertilidad masculina, deteccion de procesos infecciosos, monitoreo de una vasectomia, realizacion de chequeos pre y post operatorio, entre otros. Consiste en la evaluacion macroscópica y microscópica de una muestra de semen para determinar su estado general. Aun cuando en la mayoria de los laboratorios donde se realiza este tipo de estudio se siguen las normas básicas recomendadas por la Organización Mundial de la Salud (OMS), las interpretaciones y reportes de los resultados obtenidos pueden presentar algunas diferencias, ya que estos dependen de la experiencia del profesional que evalue la muestra, de la diversidad de las caracteristicas de los varones (ubicación geográfica, factores ambientales que lo afectan, hábitos de vida) de los terminos y vocabulario utilizados, asi como el complejo conocimiento necesario para alcanzar los diagnósticos. En México aun no se ha logrado una estandarizacion importante del Análisis de semen en la mayoria de los laboratorios clínicos. Espermatobioscopía La espermatobioscopía es el método utilizado para estudiar las características del semen: El semen está constituido por dos componentes: 1. Componente celular: representado por las células sexuales (espermatozoides). 2. Líquido seminal: medio de transporte para las células sexuales El volumen del líquido seminal depende del aporte de tres glándulas (vesículas seminales, próstatas, glándulas de Cowper)

2 Eyaculación del semen El volumen normal de una eyaculación de un adulto joven es de 1.5 ml a 6 ml. Está compuesto por dos componentes, espermatozoides y plasma seminal, el cual puede ser separado fácilmente por centrifugación. La concentración de espermatozoides en un mililitro es de 15x10⁶ espermatozoides/ml y la cuenta total debe ser mayor a 39x10⁶ espermatozoides. El semen es eyaculado de manera secuencial en tres diferentes colecciones o porciones, la primera es rica en espermatozoides y componentes de la próstata como lo es el ácido cítrico, y es la de mayor volumen. La segunda proporciona un volumen mayor de líquido seminal, sin embargo la cantidad de espermatozoides es menor a la primera. La tercera y última de las colecciones es la más pobre en espermatozoides, pero aporta el mayor volumen de secreción su contenido es rico en fructuosa. Qué debes saber para entender un espermiograma? VARIABLES MACROSCOPICAS LIMITES DE REFERENCIA Volumen >=1.5 ml Color Grisáceo a ligeramente amarillento Coagulo Presente Licuefacción 60 minutos Viscosidad Normal ph VARIABLES MICROSCÓPICAS LIMITES DE REFERENCIA Concentración 15 x 10 6 espermatozoides/ml Cuenta total >39 x 10 6 espermatozoides Motilidad total (progresivos y no >=40% progresivos) Motilidad progresiva >=32% Viabilidad >=58% vivos Morfología >=4% Leucocitos <1 x 10 6 /ml Otros tipos celulares Valores normales Células inmaduras >5 por campo Bacterias Escasas Aglutinación >10%

3 TERMINOLOGIA VARIABLE Aspermia No hay eyaculado Hipospermia <1.5 ml Oligozoospermia <15 x 10 6 espermatozoides/ml Azoospermia Ausencia de espermatozoides Astenozoospermia <40% (Categorias A y B) Teratozoospermia <5% espermatozoides normales Necrozoospermia <58% de viabilidad Oligoastenoteratozoospermia Perturbación de tres variables MATERIAL Y MÉTODO Para la óptima realización de la práctica se contara con: Muestra de semen por equipo Recipiente estéril para muestra Tres tiras de papel ph por equipo Microscopio óptico Diluyente de espermatozoides Hemocitometro Eosina nigrosina Pipetas Portaobjetos y cubreobjetos Pipeta pasteur Kit de tinción rápida INDICACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA Recolección de la muestra de semen humano. La recolección de las muestras de semen es importante para un buen análisis seminal, por ello es necesario cubrir una serie de pasos que nos permitirán obtener un buen resultado. Instrucciones a los pacientes. a) Abstinencia sexual de 2 a 7 días b) Efectuar lavado genital con agua y jabón c) Colectar la muestra por masturbación d) Depositar la muestra de semen en un recipiente de polipropileno estéril e) Si la muestra es colectada desde su hogar: entregar al laboratorio con un máximo de 1 hora después de haber sido colectada y mantenerla lo más cercano a temperatura corporal.

4 Características macroscópicas Olor: Ocre. Coagulación: Instantánea. Licuefacción: Dentro de los primeros 60 min. Aspecto: Gris o Blanco opalescente. Volumen: 1.5 a 6 ml. Viscosidad: 2 cm aproximadamente. ph: 7.2 a 8. El análisis macroscópico del semen se debe hacer con la muestra fresca es decir que no debe pasar más de una hora entre la toma de la muestra y su análisis, ya que de lo contrario no se podrán evaluar algunos aspectos como la licuefacción, y se podrían alterar los parámetros de movilidad y viabilidad, ya que transcurrido cierto periodo de tiempo los espermatozoides comienzan a pararse y morir debido a las condiciones ambientales, es especial de temperatura, por lo que también es muy importante que se mantenga a 37 C durante su evaluación. Parámetros macroscópicos Su evaluación se realiza a simple vista y con la ayuda de algunos instrumentos de laboratorio, como pipetas Pasteur, tiras indicadoras de ph o tubos para centrifuga graduados. Coagulación.- El semen se emite en estado líquido pero rápidamente se trasforma en un estado semisólido. Licuefacción.- La muestra se licua a 37 C dentro de los primeros 60 minutos de su obtención. Aspecto.- Se refiere al color que presenta el eyaculado. Una muestra normal es de color gris o blanco opalescente o ligeramente amarillenta con el incremento de los días de abstinencia. Volumen.- Se mide transfiriendo directamente la muestra completa a un tubo cónico de 15 ml. El volumen normal del eyaculado tras 3 a 5 días de abstinencia sexual es de 1.5 a 6 ml. Viscosidad.- Para medir la viscosidad se aspira la muestra con una pipeta Pasteur permitiendo la caída libre de gotas, en las que se observa la longitud del filamento y se clasifica como: Normal, Disminuida o Aumentada.

5 ph.- Se coloca una gota de la muestra de semen, previamente homogenizada en la tira reactiva de ph, colocada la gota se compara el color obtenido de la tira con la escala del contenedor del papel indicador. El rango que abarca el ph de semen debe estar de 7.8 a 8. Análisis microscópico Se realiza para el correcto análisis de la viabilidad, morfología y concentración de los espermatozoides en la muestra de semen humano. Viscosidad espermática.- Es el grado de coagulación que tiene una muestra, la cual debe pasar por un proceso de licuefacción para su manejo en el laboratorio. La valoramos al dejar caer la muestra de una pipeta Pasteur a una probeta cónica graduada, los valores de referencia son: Viscosidad normal: Gota a gota Viscosidad aumentada: Forma filamentos Viscosidad disminuida: Cae a chorro Técnica de Valoración de Viscosidad: 1. Tomar con una pipeta Pasteur una cantidad considerable de muestra del frasco de polipropileno estéril 2. Dejar caer el semen de la pipeta Pasteur a la probeta cónica graduada 3. Verificar la viscosidad y el volumen. Movilidad espermática.- Los espermatozoides deben presentar movilidad para poder migrar por el moco cervical en el tracto vaginal femenino y penetrar el cumulus oophorus que rodea al ovocito. Para la evaluación de la movilidad; estos se deben contar en dirección a las manecillas del reloj y se clasifica en porcentajes en las siguientes categorías: A. Movilidad progresiva B. Movilidad no progresiva C. Inmóviles La movilidad total se expresa en porcentaje y es la suma de la movilidad A más la movilidad B. Técnica de Valoración de Movilidad: 1. Colocar en un portaobjetos una gota de semen 2. Colocar encima un cubreobjetos 3. Valorar en un objetivo de 40x Viabilidad espermática.- La viabilidad espermática nos proporciona información de la cantidad de espermatozoides vivos, estos se someten a un colorante vital según las

6 estimaciones de la evaluación de la integridad de la memebrana de las células, se puede determinar rutinariamente en todas las muestras pero es especialmente importante para las muestras con menos de 40% espermatozoides con movilidad progresiva. Técnica de Valoración de vitalidad: 1. Se homogeniza la muestra con una pipeta Pasteur 2. Se colocan 10 µl o un gota de Eosina en un portaobjetos 3. Se añaden 10 µl o una gota de semen 4. Se homogenizan ambas muestras con un hisopo 5. Se cubre con un cubreobjetos 6. Se deja estabilizar por 1 minuto 7. Se hace el conteo de espermatozoides vivos y muertos a través del microscopio. Morfología espermática: Debido a que existe una gran variabilidad en la morfología espermática es difícil establecer la apariencia normal de los espermatozoides con capacidad fertilizante. Las características morfológicas para definir a un espermatozoide como normal se basan en la apariencia de los observados en el moco del canal endocervical durante una prueba postcoital. La determinación de la morfología permite distinguir la cabeza, pieza media y la cola del espermatozoide. En el espermatozoide ideal la cabeza debe ser ovalada tener una longitud de entre 4-5 µm, tomando en cuenta el cambio de tamaño que induce la fijación y el teñido; y un ancho de µm, debe presentar una región acrosomal claramente definida, delgada, con un ancho menor a 1 µm, colocada en la región apical de la cabeza y cubrir más de la mitad de la misma. La pieza intermedia es delgada y representa menos de la tercera parte del ancho de la cabeza, se encuentra alineada con el eje longitudinal de la cabeza. Las gotas citoplasmáticas deben ser menores que la mitad de una cabeza normal. La cola debe ser derecha y uniforme, más estrecha que la pieza media y medir aproximadamente 45 µm de largo. Técnica de valoración de morfología espermática: 1. Realiza un barrido de la muestra de semen en un portaobjetos y dejar secar completamente 2. Colocar tinción de Wright previamente rebajada con agua destilada, la tinción debe de cubrir toda la laminilla 3. Esperar 5 minutos 4. Lavar con solución de buffer 5. Esperar 5 minutos 6. Secar completamente y observar al microscopio

7 Realizado por: García Antonio Carlos Daniel

8 Análisis de semen Paciente Edad: Fecha ANALISIS MACROSCOPICO VALORES DE REFERENCIA Dias de abstinencia 3-7 Aspecto Normal (blanco, gris blanco opalescente o ligeramente amarillenta) Anormal (colores distintos) Licuefaccion 15 a 60 minutos Viscosidad Normal (gotas definidas) Disminuida (consistencia de agua) Aumentada (filancia >2 cm) Volumen >1.5 ml ph ANÁLISIS MICROSCÓPICO Motilidad >=40% A: B: C: A + B: Concentración: >= 15 mill/ml Concentración total: >= 39 mill/eyaculado Vitalidad >=58% Aglutinacion <5% Agregación <5% Otras celulas: Leucocitos Eritrocitos Céls. Epiteliales Céls. Germinales Detritus celulares: Bacterias Morfologia Normales: Anormales: Defectos de cabeza: Defectos de pieza media: Defectos de flagelo: - -<5 céls/campo - - Escasa (+) Moderadas (++) Abundantes (+++) >=4% Observaciones: Diagnostico

9 Bibliografia: World Health Organization, Department of Reproductive Health and Research. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen Fifth edition (Citado el 18 de Agosto del 2015) Obtenido de: n/ OMS (2002). Manual de Laboratorio de la OMS para el examen del semen humano y de la interacción entre el semen y el moco cervical. Editorial Panamericana 4ta edición, Madrid, España Remohí, J., Bellever, J., Matorras, R., Ballesteros, A. & Pellicer, A. (2012). Manual practico de Esterilidad y Reproduccion Humana. 4ta edición. Editorial Medica Panamericana. España.