A mi hijo, a mis padres y a mi esposa, por haber estado siempre conmigo, durante todos estos años y por su apoyo constante.

Transcripción

1 UNIVERSIDAD DE LLA HABANA CENTRO DE INVESTII IGACIONES MARINAS HUMUS DE LOMBRIIZ Eiiseniia foetiida PARA CULTIIVAR DOS MIICROALGAS MARIINAS COMO ALIIMENTO DE LARVAS DE CAMARÓN Tesiis presentada en opciión all Tíítullo Académiico de Master en Biiollogíía Mariina con Menciión en Acuiiculltura Auttorr:: Lic.. Missaell Guerrrra Aznay Tuttorras:: Drra.. Lourrdes Pérrez JJarr MC.. Sylvia Leall Lorrenzo LLa Habana,, Cuba Dicci iembrre,, 2011

2 A mi hijo, a mis padres y a mi esposa, por haber estado siempre conmigo, durante todos estos años y por su apoyo constante.

3 AGRADECIMIENTOS Agradezco al Centro de Investigaciones Pesqueras (CIP) por haberme brindado las condiciones para la realización de éste trabajo. A mi tutora Dra. Lourdes Pérez Jar, por su ejemplo de profesionalidad, su dedicación y entrega. Sinceramente gracias. Al personal de la filial Centro Genética de Camarón, donde se realizaron estos experimentos, en especial al técnico Jorge Bobadilla por su apoyo incondicional durante todo el trabajo técnico. A todos mis compañeros de la División de Cultivos Marinos del CIP, en especial al Dr. Barbarito Jaime Ceballos por sus consejos y comentarios respecto a este trabajo. Al Lic. Redney Jiménez Cabrera por la ayuda brindada, y principalmente por su amistad. A los doctores Eduardo Macías y Carlos Abeledo del Centro de Investigaciones Porcinas por su apoyo en la realización de los análisis químicos. A mis amigos y a todos aquellos que de alguna manera contribuyeron con la realización de este trabajo, muchas gracias por haber estado ahí.

4 RESUMEN Para evaluar el extracto líquido de humus de lombriz roja californiana Eisenia foetida como un nuevo medio alternativo de cultivo de las microalgas Tetraselmis tetrathele y Chaetoceros muelleri, se probaron cuatro diluciones (EH50, EH200, EH350 y EH500 ml) empleando como control al medio f/2 Guillard (MG). Las concentraciones celulares de T. tetrathele no mostraron diferencias (p>0.05) entre el tratamiento MG y el tratamiento EH200 ml. Los valores medios ± DS fueron de 1730 ± 5.8 x 10 3 cel ml 1 (EH200 ml) y de 1750 ± 4.5 x 10 3 cel ml 1 (MG). Para C. muelleri se obtuvieron valores inferiores al patrón en todas las diluciones del biofertilizante líquido, por lo que fueron evaluadas dos diluciones más concentradas (EH550 y EH650 ml). Los resultados en este segundo bioensayo no mostraron diferencias (p>0.05) entre los tratamientos. El valor de concentración celular más alto del medio alternativo se obtuvo con la dilución EH550 ml (6580 ± 3.7 x 10 3 cel ml 1 ). En la siguiente etapa se comparó la supervivencia, índice de desarrollo y largo total hasta el subestadío Mysis 1 de larvas de camarón Litopenaeus vannamei alimentadas con las dos microalgas cultivadas en las mejores diluciones del biofertilizante y como control al MG. Todos los parámetros evaluados arrojaron diferencias significativas (p<0.001) entre ambos tratamientos. La supervivencia final, índice de desarrollo (en el paso de PIII M1) y largo total final de las larvas criadas en el tratamiento MG fueron del 79.5 %; 3,55 y 2,8 mm respectivamente, datos inferiores a los alcanzados con el tratamiento que empleó el medio alternativo, donde se lograron valores del 91,05 %; 3,9 y 3.2 mm. Este biofertilizante líquido evaluado a escala piloto en el Centro Genético de Camarón del Mariel, es una novedosa alternativa económica y viable en sustitución del tradicionalmente utilizado medio f/2 Guillard de difícil y costosa adquisición, para el cultivo de las microalgas marinas C. muelleri y T. tetrathele hasta volúmenes de 50 L, las cuales son empleadas en las Empresas de Desove de Camarón del país para alimentar larvas del camarón blanco del Pacífico L. vannamei. Palabras claves. Humus, Eisenia foetida, Tetraselmis tetrathele, Chaetoceros muelleri y Litopenaeus vannamei.

5 TABLA DE CONTENIDO Páginas Agradecimientos Dedicatoria Resumen 1. Introducción Reseña Bibliográfica Acuicultura Especies evaluadas en el estudio Microalgas Empleo de fertilizantes inorgánicos Empleo de fertilizantes orgánicos Respuesta de las larvas de camarón alimentadas con algas Materiales y Métodos Técnicas empleadas Obtención del humus de lombriz Obtención del extracto líquido de humus de lombriz Inóculos de las microalgas Composición química de los medios de cultivos empleados Diseños de los bioensayos Cultivo de microalgas Cría larval hasta el estadio de mysis I Análisis estadístico de los datos Resultados Composición química de los medios de cultivos empleados Bioensayos con microalgas Chaetoceros muelleri. Concentración celular Chaetoceros muelleri. Parámetros poblacionales Tetraselmis tetrathele. Concentración celular... 37

6 Tetraselmis tetrathele. Parámetros poblacionales Bioensayo con larvas Indicadores productivos Discusión Bioensayo de cultivo de microalgas Bioensayo de la cría larval Conclusiones Recomendaciones Referencias Bibliográficas 61

7 1 1. INTRODUCCION Entre los sectores que más aportan a las exportaciones mundialmente se encuentra el pesquero. El bajo costo de la mano de obra y los beneficios que este reporta a la población, obligan a tomar medidas alternativas debido al creciente deterioro de los niveles de captura de peces. Una de estas medidas es el aumento de la producción acuícola, la cual ha experimentado un incremento significativo en los últimos años, caracterizado por una tasa de crecimiento anual del 9 al 10% (FAO, 2010). Dentro de la acuicultura se consideran especies de plantas, peces, moluscos y crustáceos. De estos últimos, el más importante de todos es el camarón blanco del Pacífico Litopenaeus vannamei. Hoy, casi el 65% de la producción mundial, es de camarón blanco y se prevé que esta tendencia se mantenga (Newman, 2010). El sistema de producción de camarón de cultivo tiene dos fases: larvicultura y engorde (Boeing, 2005). La primera es considerada como clave para el buen rendimiento de un ciclo y consecuentemente una garantía de la rentabilidad, por lo que el aspecto nutricional del alimento que se le suministra al cultivo juega un rol importante en la reducción de la mortalidad y la calidad de las larvas, especialmente por su constitución bioquímica-nutricional, lo que les permite tener diferentes grados de resistencia a condiciones adversas. El fitoplancton y la meiofauna constituyen las fuentes de alimento para la productividad secundaria, organismos tales como el zooplancton son utilizados por los camarones para su desarrollo (Treece, 2001).

8 2 El creciente interés en el desarrollo del cultivo de crustáceos ha centrado su atención en reducir los costos de producción de microalgas. Tradicionalmente se han utilizado diversos medios de cultivo para la producción de fitoplancton, como los reportados por Miquel (1892), Provasoli et al., (1957), Guillard y Ryther (1962) y Stein (1973). Estos medios, generalmente, son preparaciones de laboratorio y su empleo para el cultivo no resulta práctico, incrementando el costo en la alimentación de las larvas protozoeas y la posterior producción de postlarvas de camarón. Además, por ser estos cultivos de tipo intensivo, requieren de un suministro constante de alimento que hace que las microalgas sean cultivadas de forma masiva en laboratorios separados, por lo que mantener este laboratorio adicional también contribuye a incrementar los costos de operación (Lango-Alemán, 1999). Con la finalidad de estudiar la manera más eficiente de reducir el factor de costo sin que se afecte la operatividad del sistema de producción masiva de microalgas, varios autores han descrito medios de cultivo más económicos que los utilizados tradicionalmente, entre ellos podemos mencionar a González-Rodríguez y Maestrini, (1984); Chebil y Yamasaki, (2000); Simental-Trinidad et al., (2001) y Simental y Sánchez-Saavedra, (2003), los cuales recomiendan los fertilizantes agrícolas cuando se requieren volúmenes de microalgas a escala comercial. Sin embargo, Peraza-Díaz (1997) sugiere que en laboratorios comerciales, para volúmenes iniciales, hasta 15 o 20 litros de cultivos de microalgas, deben utilizarse los medios f y el f/2 de Guillard para obtener fitoplancton de buena calidad, ya que al

9 3 utilizar compuestos no tradicionales y de menor costo puede afectarlas en cuanto a su composición y crecimiento. Una alternativa económica viable es la utilización de fertilizantes orgánicos (Tacon et al., 2009). Algunos de éstos son subproductos de origen agropecuario que se utilizan para la fertilización de reservorios donde se desarrolla el cultivo de organismos acuáticos. Cuando el fertilizante orgánico es agregado a las piscinas es descompuesto por las bacterias con lo cual se liberan los nutrientes requeridos para el crecimiento del fitoplancton. Sin embargo, se requiere de un empleo cuidadoso del mismo, pues usualmente no posee una proporción controlada y balanceada de nitrógeno/fosfato. La composición de los nutrientes de los estiércoles de los animales es altamente variable (dependiendo de la dieta, la edad y la especie del animal, el tipo y la proporción de material presente en la paja y el manejo y el tratamiento de los estiércoles antes de ser usados), y por lo que, cada tipo de estiércol se debe considerar como único y ser analizado químicamente como tal (Tacon, 1987). Recientemente, Ruíz (2011), recomienda aplicar en estanques de engorde, antes de la siembra de postlarvas de camarón, un fertilizante orgánico llamado vermicompost fabricado a base de humus líquido de lombriz roja californiana Eisenia foetida (te de humus), cuyo elevado contenido de ácidos húmicos, fúlvicos y producción de hormonas como el ácido indolacético y giberélico, estimulan el crecimiento y funciones vitales de las diatomeas.

10 4 García-Galano et al., (1996) bajo condiciones experimentales, lograron que las protozoeas del camarón rosado Penaeus notialis presentaran un mejor desarrollo cuando consumieron microalgas fertilizadas con harina de lombriz de tierra Eudrilus eugeniae, al compararse con las crecidas en el medio inorgánico Miquel-Matue. Por otro lado, Leal et al., (2005), evaluaron diferentes concentraciones de una zeolita natural cubana enriquecida para el cultivo de las microalgas marinas Tetraselmis suecica y Chaetoceros ceratosporum, adicionándola al medio Guillard y sugieren que para el cultivo de T. suecica no se debe sustituir más del 25% del medio y para C. ceratosporum se puede sustituir hasta un 50%. En Cuba, los reactivos puros para laboratorio requeridos para el cultivo progresivo de las microalgas marinas, son en su gran mayoría de importación y de difícil adquisición, lo que ha traído consigo, en diferentes períodos, el empleo de fertilizantes agrícolas o la búsqueda de alternativas que disminuyan el costo de producción masiva de las mismas. Varios investigadores y especialistas nacionales han realizado estudios para lograr la sustitución total o parcial de alguno de los reactivos de laboratorio, en la búsqueda de alternativas para reducir los costos, implementando el uso de productos nacionales que favorezcan la producción de microalgas marinas. Siguiendo esta línea y para abaratar los costos en el flujo productivo del cultivo de camarón en el país, el Centro Genético de Camarón del Mariel, Cuba, (filial del Centro de Investigaciones Pesqueras), implementó desde el año 2009 el cultivo de lombriz roja californiana Eisenia foetida como un complemento para la alimentación

11 5 de reproductores, juveniles y postlarvas avanzadas del camarón L. vannamei, mantenidos en dicha instalación para el desarrollo de trabajos investigativos, según la técnica descrita por Reinés et al. (2006). Teniendo en cuenta la escasa información sobre la utilización de fertilizantes orgánicos en la acuicultura y conociendo las bondades, importancia y efectividad del humus de lombriz como fuente de nutrientes para los vegetales (FAO, 1987), se propuso realizar la evaluación de un extracto líquido del humus de la lombriz E. foetida como biofertilizante, para determinar su efecto en el crecimiento poblacional de células de las microalgas marinas Chaetoceros muelleri y Tetraselmis tetrathele, cultivadas en el propio Centro Genético de Camarón y usualmente utilizadas en la larvicultura. Por otro lado, para conocer el valor nutricional de estas microalgas, se diseñó un bioensayo para evaluarlas como alimento en larvas de camarón blanco del Pacífico Litopenaeus vannamei. Por ello, para desarrollar este estudio se partió de la siguiente hipótesis de trabajo: El extracto líquido de humus de lombriz roja Eisenia foetida, es una alternativa novedosa de medio de cultivo para el crecimiento de las microalgas marinas Chaetoceros muelleri y Tetraselmis tetrathele al utilizarlas como alimento para larvas del camarón blanco L. vannamei a escala piloto. La propuesta de objetivo general en la presente investigación es: Evaluación de un extracto líquido del humus de lombriz roja Eisenia foetida como biofertilizante, para determinar su efecto en el crecimiento poblacional de células de las microalgas marinas Chaetoceros muelleri y Tetraselmis tetrathele y su posterior

12 6 efecto como único alimento de larvas del camarón Litopenaeus vannamei hasta el subestadio de mysis 1. Por consiguiente, los objetivos específicos son: Comparar el crecimiento celular de C. muelleri y T. tetrathele al emplear diferentes diluciones del extracto líquido de humus tomando como control el medio de cultivo Guillard f/2. Probar la efectividad de las microalgas obtenidas con la dilución del extracto líquido de humus seleccionado, en el desarrollo y la supervivencia de larvas de camarón L. vannamei a escala piloto cuando son suministradas como alimento.

13 7 2. RESEÑA BIBLIOGRÁFICA 2.1. Acuicultura La acuicultura sigue siendo un sector productor de alimentos creciente, vigoroso e importante. Según la información proporcionada por FAO (2010), la producción acuícola mundial de pescado comestible, alcanzó los 52,5 millones de toneladas en 2008 aumentando a un ritmo anual medio del 8,3 %, mientras que la población mundial lo hizo en promedio un 1,6 % anual. En los países ricos la acuicultura ayuda a ofrecer una mayor variedad de alimentos En los países en vías de desarrollo el problema es totalmente diferente, ya que en ellos es indispensable producir alimento urgentemente a bajo costo, por lo que la acuicultura puede resultar de gran utilidad (FAO, 2003). La Acuicultura Cubana, tuvo sus primeros pasos a comienzos de la segunda década del siglo XX y adquiere una mayor importancia a partir de 1960 con la introducción de manera progresiva de diferentes especies foráneas cuyos sistemas de cultivos ya contaban con tecnologías reconocidas mundialmente para poder responder así a las necesidades y características del país (MIP, 2005). Dentro de la acuicultura los camarones tienen una gran importancia en el sector debido a que tienen un alto valor comercial, lo cual es atractivo desde el punto de vista de un productor. El cultivo de camarón experimentó un crecimiento acelerado en la última década, con un valor estimado del 10 % anual en los últimos cinco años.

14 8 Alrededor de 3,5 millones de TM son cosechadas en la actualidad mundialmente. Aproximadamente el 85 % del total es producido en China y en el Sudeste Asiático. Otro 10 % es producido en la India y Bangladesh y el 5 % restante en el Hemisferio Occidental. Durante muchos años, el camarón tigre negro, Penaeus monodon, dominó la producción mundial. En el cambio de siglo, la industria traslada sus producciones a la del camarón blanco del Pacífico Litopenaeus vanname, siendo esta especie introducida a varios países asiáticos. Hoy casi el 65% de la producción mundial es de camarón blanco y se prevé que esta tendencia se mantenga o se incremente (Newman, 2010). Hasta el año 2003 la especie de camarón autóctona de importancia comercial cultivada en Cuba fue Litopenaeus schmitti, la cual se caracterizó por bajos rendimientos productivos en estanques de engorde lo que conspiró con la rentabilidad de la actividad, lográndose la producción más alta en el año 2000 con una captura total de TM. Es por ello que se introduce al país la especie de camarón blanco Litopenaeus vannamei reconocida internacionalmente como una de las más cultivadas por sus altos rendimientos y por presentar precios superiores en el mercado internacional. Desde los inicios del cultivo de esta especie de camarón marino en el país, se han logrado resultados superiores en las Empresas Camaroneras llegándose a alcanzar un peso promedio final de 17.2 g en ciclos de 90 a 100 días de duración y una captura total de TM de camarón en el año 2006 (GEDECAM, com.pers.)

15 Especies evaluadas en el estudio Litopenaeus vannamei (Boone, 1931): Pertenece a la Clase Malascostraca, Orden Decápoda, Familia Penaeidae, Género Litopenaeus (Pérez Farfante y Kensley, (1997). Especie nativa de la costa oeste del Océano Pacífico con distribución desde el Golfo de California hasta las costas de Perú. Se cultiva a temperaturas entre 25 y 30 C, capaz de tolerar un amplio rango de salinidades, aunque el óptimo se ubica entre 15 y 30 ups (Martínez-Córdova, 1999). Pueden alcanzar una talla comercial de 20 g en 4 a 6 meses. Su cultivo puede hacerse de manera extensiva hasta superintensiva (Martínez-Córdova, 2002). Chaetoceros spp.: Pertenece a la Clase Bacillariophyceae. Chaetoceros es un género abundante entre las especies marinas. Forma cadenas cortas aunque en cultivo, generalmente se ven aisladas. Poseen setas rígidas, que pueden ser más o menos curvadas. Pueden medir de 6 a 10 micrómetros de longitud. La utilización de las diferentes especies de Chaetoceros está muy difundida en las larvas de camarón (C. muelleri, C. Calcitrans, C. ceratosporum). Tomado de Alfonso y Leal (1999). Tetraselmis spp.: Pertenece a la Clase Prasinophyceae. Son especies unicelulares, de color verde brillante. Poseen cuatro flagelos de igual tamaño que le permiten su movimiento. La forma de la célula es de elipsoidal a ovoide. Pueden tener de 10 a 18 micrómetros de longitud. A pesar de su morfología definida, en cultivo, puede presentar variaciones. Es un género eurihalino, con capacidad para formar esporas. Tienen una tolerancia muy amplia a las variables físicas. Entre las especies utilizadas

16 10 en el cultivo larval de camarón tenemos a T. tetrathele, T. suecica y T. chuii. Tomado de Alfonso y Leal (1999). En los laboratorios de producción de postlarvas de camarón el primer alimento que se emplea en la etapa de cría larval son las microalgas, las mismas son suministradas teniendo en cuenta el tamaño de la boca del crustáceo, la dureza y forma de las células fitoplanctónicas y los nutrientes en cantidad y calidad que aporta cada una, como las proteínas, lípidos, carbohidratos y vitaminas, además de la influencia de otros factores no nutricionales desconocidos que mantienen un buen desarrollo de las especies en un cultivo (Saracco-Álvarez, 2007) Microalgas Las microalgas corresponden al primer eslabón en la cadena trófica de los océanos por ser organismos fotoautótrofos obligados, es decir, requieren de la energía proveniente de la luz para realizar sus procesos biológicos. Al simular las condiciones naturales donde crecen es posible realizar su cultivo en condiciones semi-controladas o controladas, para de esta forma obtener una biomasa tal que permita usarlas como alimento para otros organismos por sus excelentes características, tales como tamaño adecuado, contenido proteico y lipídico (perfil de ácidos grasos), contenido de vitaminas y pigmentos (D Souza y Nelly 2000; Farías- Molina, 2001; Renaud et al., 2002). Además, pueden ser aprovechadas como filtros biológicos para la eliminación de excesos de nutrientes (López y Lucas, 2000).

17 11 Son numerosos los trabajos que se han realizado sobre algunos de los factores que condicionan el crecimiento y la composición química de las microalgas, entre los cuales se destacan la calidad e intensidad de la luz (Sánchez-Saavedra y Voltolina., 1996), la salinidad (Leal et al., 1992), la temperatura (López-Muñoz et al., 1992), la concentración y tipo de nutrientes del medio de cultivo, además de la concentración del inóculo y del tipo y volumen del recipiente de cultivo (Godinez, 2000; Thomas et al., 2003). La cantidad de células de microalgas y su composición química puede variar en función de la respuesta metabólica y fisiológica propia de cada especie a las condiciones ambientales en las cuales se lleva a cabo su cultivo (López-Elías et al., 2003; Shain-Mercado et al., 2007; Nieves et al., 2009). Hoy en día, la producción de microalgas en grandes volúmenes es una de las actividades que ocupan el mayor porcentaje de los gastos de operación en los laboratorios de los larvicultores, llegando a constituir más del 30% - 35% del costo total de producción de las especies cultivadas (Lango-Alemán, 1999). Coutteau y Sorgeloos, (1992) no tuvieron éxito al tratar de reemplazar el alimento vivo con productos inertes como microencapsulados o microalgas conservadas o preservadas. Sin embargo en el de cursar de los años, diferentes autores que han trabajado con larvas de camarones peneidos, han valorado que la sustitución parcial de las microalgas por otro tipo de alimento vivo (Sunilkumar, 1996; D'Souza et al.,

18 ), microparticulado (Jaime et al., 1996; Jones, 1998; Robinson et al., 2005; Jaime, et al., 2006) o microencapsulado (Boeing, 2005) es factible. La necesidad de producir grandes cantidades de fitoplancton con buena calidad a bajos costos ha traído como consecuencia la aplicación de diversos medios de cultivo (López-Elías et al., 2008). El más usado para cultivar especies de agua salada, es el medio f de Guillard y Ryther (1962), del cual se utilizan diluciones y variantes como las llamadas f/2 y h/2 (Guillard, 1975) pues reducen a la mitad las proporciones del original y contienen todos los elementos necesarios para el crecimiento de estos microorganismos. Otros como Stein (1973); McKeon (1984); Vonshak (1986); Alfonso y Martínez (1988) y Becker (1994), han realizado estudios para la búsqueda de medios de cultivo de menor costo y buenos resultados en el crecimiento y calidad celular de microalgas. Wilkenfeld et al., (2001) afirman que uno de los aspectos más importantes a tener en cuenta en la producción de microalgas, es el de seleccionar el medio de cultivo química y económicamente apropiado para utilizar en los diferentes volúmenes del sistema de producción masiva. Los medios que utilizan reactivos de grado analítico encarecen el proceso de obtención de cultivos masivos de especies utilizadas a escala comercial, por lo que se ha hecho habitual y necesario utilizar fertilizantes agrícolas a esos volúmenes (González-Rodríguez y Maestrini, 1984 y Simental- Trinidad et al., 2001).

19 Empleo de fertilizantes inorgánicos para la producción de microalgas Como una alternativa económica y viable para reducir los altos costos en la producción de microalgas en laboratorios comerciales, autores como Peraza-Díaz, (1997) y González, B. (1999), sugieren la utilización de fertilizantes agrícolas. Iriarte y Buitrago (1992), López-Elías y Voltolina (1993), Martínez-Córdova (1993); Nieves y Vega (1994); Valenzuela-Espinoza et al., (1999) han demostrado que el empleo de fertilizantes como la urea y el sulfato de amonio usados comúnmente en la agricultura, pueden ser buenos sustitutos como aporte de nutrientes en el cultivo de microalgas marinas en laboratorios y estas ser suministradas como alimento en la larvicultura de los camarones. Conforme a los resultados logrados por González, M. (2006) con la microalga Porphyridium cruentum, y por Simental-Trinidad y Sánchez-Saavedra (2003) con microalgas marinas bentónicas, el uso de fertilizantes agrícolas produjo una biomasa celular, composición química y parámetros poblacionales similares a los alcanzados con el medio completo f/2 de Guillard, lográndose a un costo de producción más bajo, por lo que sugieren que podría ser una alternativa para la producción masiva de estas microalgas. El fertilizante denominado Nutrilake ha sido utilizado en bioensayos con buenos resultados para cultivos masivos de C. muelleri y T. tetrathele (Torres et al., 2005), para favorecer la concentración celular de Thalassiosira weissflogi (Piña et al. 2007), para la obtención de las mayores concentraciones de fitoplancton en estanques de

20 14 tierra destinados para el cultivo de camarón (Jaime-Ceballos et al., 2007) y como sustituto del NaNO 3 en cultivos de C. muelleri y T. weissflogi en ambientes controlados (Leal et al., 2007) Por otro lado, diferentes tipos de zeolitas artificiales y naturales fueron probadas con éxito por Leal, et al., (2003), sobre el crecimiento de la diatomea C. muelleri y el flagelado T. tetrathele Empleo de fertilizantes orgánicos para la producción de microalgas Diversas estrategias han sido probadas para incentivar y mantener altas las densidades de organismos bentónicos que sirven como alimento de los camarones cultivados en estanques, algunas de ellas se han utilizado por mucho tiempo en Asia y consiste en la utilización de desechos orgánicos (Martínez-Córdova, et al., 2004). Aunque los fertilizantes orgánicos son de composición química variable, al igual que su disponibilidad y algunos tienen posibilidades de contaminantes en su contenido, se han desarrollado diversos estudios con el propósito de evaluarlos como medios de cultivo de microalgas marinas producidas en laboratorios. Chebil y Yamasaki (2000) evaluaron la excreta de gallina y la harina de tiburón para la producción masiva de la microalga Nannochloropsis sp., resultando efectivos al lograr un incremento celular mayor del 50 % con esta combinación de compuestos. A su vez, con el objetivo de optimizar el empleo de fertilizantes en la preparación de estanques de tierra y garantizar un crecimiento adecuado de la productividad natural, Jaime-Ceballos et

21 15 al., (2007) probaron la vacaza (10 mg/l) y concluyeron que puede ser empleada con buenos resultados. Muñoz et al., (2009), evaluaron la eficiencia del humus de lombriz y la equinaza, sobre el crecimiento y contenido proteico de Chlorella vulgaris en cultivo. Los resultados mostraron que con el medio de cultivo humus de lombriz se alcanzaron X 10 3 cel/ml en 48 días, y con el medio equinaza obtuvieron X 10 3 cel/ml en el día 18. Son pocos los artículos que hacen referencia a la cría de camarón orgánico, empleándose en esta modalidad el humus de lombriz de tierra como uno de los fertilizantes económicos y amigables con el medio ambiente (Villamar, 2004). El humus de lombriz no es más que los excrementos de las mismas lombrices dedicadas especialmente a transformar residuos orgánicos como restos de cosechas, excrementos de animales de cría, restos de cocina o papelería en desuso. El humus es un estado de descomposición de la materia orgánica, es insoluble en agua. Es una fuente importante de nutrientes. Entre los componentes más esenciales del humus de lombriz están el nitrógeno, fósforo, potasio y el calcio. Esta composición de los nutrientes es altamente variable, dependiendo del tipo y proporción del material presente en el sustrato que se utilice como alimento para las lombrices, así como los factores abióticos, fundamentalmente la temperatura, ph, grado de humedad que inciden en la calidad del humus (Reinés, et al., 2006).

22 16 Los biofertilizantes líquidos como el llamado vermicompost, fabricado a base de humus líquidos (té de humus) de lombriz de tierra, pueden ser utilizados en estanques de engorde antes de la siembra de postlarvas de camarón como lo recomendó recientemente Ruiz, M. (2011). Este autor observó en su estudio que el té de humus por su elevada solubilización debido a la composición enzimática y bacteriana, proporciona una rápida asimilación por el fitoplancton. El vermicompost contiene un elevado porcentaje de ácidos húmicos y fúlvicos y además produce fitohormonas como el ácido indolacético, quinetina y giberelico, que estimulan el crecimiento y funciones vitales de las microalgas. Los extractos acuosos de vermicompost o 'té' son mucho más fáciles de transportar y aplicar que los de vermicompost sólido, debido a que la solubilidad es mayor, la distribución de los nutrientes es más uniforme en la columna de agua y además pueden duplicar los beneficios cuando se aplican a los mismos cultivos (Edwards, et al., 2006). Por otro lado, autores como Casco e Iglesias (2005) han descrito y evaluado diferentes métodos para la obtención de lixiviados y de té de lombricompuestos. En Cuba existen estudios del té de humus y lixiviados derivados del vermicompost de estiércol vacuno, conocido con el nombre de Liplant, el cual fue obtenido en la Universidad Agraria de la Habana, siendo uno de los estimuladores vegetales que se ensayan en Cuba (Arteaga, et al., 2007). El producto Liplant en un litro presenta la siguiente composición: 36.2 % p/v contenido de materia orgánica, de este el % p/v es de extracto húmico total (12.78 % p/v ácidos húmicos y %p/v de ácidos

23 17 fúlvicos). Contiene hormonas del tipo auxinas (AIA, AIP) con mg/l, giberelinas (GA3) con mg/l, citoquininas (Adenina) con mg/l, 8 aminoácidos libres (9.33 mg/l),12 elementos minerales ( mg/l), lo cual demuestra que es un producto con alto contenido nutritivo (Caro, 2004). Sin dudas el humus de lombriz es el mejor fertilizante orgánico conocido en el mundo hasta el momento. Existen en el mercado diferentes tipos de extractos acuosos de humus de lombriz los cuales se diferencian básicamente por el sustrato utilizado para alimentar a las lombrices; existiendo los provenientes de materia vegetal fermentada y estiércol de animal (Alda et al., 2001) Respuesta de las larvas de camarón alimentadas con microalgas cultivadas con diferentes fertilizantes El valor de una microalga, depende de muchos factores, y aunque algunas mediciones químicas de su composición son de gran utilidad, deben ser evaluadas a través de experimentos de alimentación animal donde se determina finalmente su valor biológico (Coll, 1983). Alfonso y Nuñez (1984), en un ensayo realizado con harina de lombriz de Eudrilus eugeniae, plantean que las protozoeas de camarón Penaeus notialis que ingirieron la microalga T. suecica cultivada con este fertilizante orgánico, aceleraron el desarrollo con respecto a las alimentadas con la microalga crecida en el medio inorgánico Miquel-Matue. Los autores sugieren que esto puede ser debido no solamente a que la microalga haya alcanzado un mayor valor nutricional, sino también a la posibilidad