MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA

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1 MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA PROYECTO DE INVESTIGACIÓN: DETERMINACION DE ACIDO OKADAICO (BIOTOXINA DSP) EN MOLUSCOS BIVALVOS EN LOS CRIADEROS DE LA BAHIA GUAYNUNA- CASMA- POR INFLUENCIA DE FACTORES SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº48 BLGO. LUIS CUROTTO LÉVANO ING. QUÍMICO RUTH PÉREZ CALDERÓN ING. ALIMENTARIO CARLOS SANTIAGO CHÁVEZ 2006

2 INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACION Y NUTRICION I. Título :INFORME TÉCNICO Proyecto de investigación: Determinacion de Acido Okadaico (Biotoxina DSP) en moluscos bivalvos en los criaderos de la Bahia Guaynuna- Casma- por influencia de factores ambientales de contaminación. Código : II. Autores Blgo. Luis Curotto Lévano. Certificación y Gestión de Calidad. Centro Nacional de alimentación y Nutrición. Instituto Nacional de Salud. Ingº Químico Ruth Pérez Calderón. Laboratorio de Química. Centro Nacional de alimentación y Nutrición. Instituto Nacional de Salud. Ingº Alimentario Carlos Santiago Chávez. Laboratorio de Química. Centro Nacional de alimentación y Nutrición. Instituto Nacional de Salud. III Resumen El presente trabajo está orientado a determinar la presencia de Acido okadaico en los moluscos bivalvos que se cultivan en el criadero de la empresa Acuacultura y Pesca S.A.C., ubicado en la Bahía Guaynuná en la ciudad de Casma, ubicada en el Km 400 de la carretera Panamericana Norte. Las actividades del proyecto se iniciaron con las salidas para muestreo hacia el criadero en el mes de Diciembre del 2004 en dos oportunidades y en el mes de Enero de 2005, en una sola salida. En vista de que el insumo crítico ( Estandar de Acido Okadaico) no fue adquirido, se tuvo que paralizar el desarrollo del proyecto, razón por la cual se efectuaron sólo tres salidas para las tomas de muestra del material de estudio. La falta del insumo mencionado no permitió la culminación de la validación del método para la determinación del ácido okadaico, motivo del presente estudio. Ante tal situación, se emitieron documentos reiterativos solicitando la compra de los insumos pendientes de entrega, asicomo, las autorizaciones para ingresar al SIGA en el año 2005, a fin de obtener el financiamiento, comprar los insumos faltantes y reiniciar el desarrollo del proyecto, sin ningún resultado. IV.Introducción Desde tiempos muy antiguos se conoce de la ocurrencia de determinadas enfermedades asociadas al consumo de pescados y mariscos en general. Inicialmente los casos y brotes tenían un carácter esporádico y estaban limitados generalmente a zonas costeras e islas; 2

3 sin embargo, como resultado de un aumento en el consumo a nivel mundial de productos del mar y de su mayor comercialización, los organismos de salud (FDA, CEE y otros) ven con preocupación la aparición de brotes de enfermedades ( intoxicación ) por el consumo de mariscos crudos o insuficientemente cocinados (Anselmo R, Barrios, Ferraroti S.) Entre las intoxicaciones de origen marino se encuentra la intoxicación neurotóxica por mariscos (ASP). Es preocupación de las autoridades de nuestro país de efectuar un control de la presencia de esta biotoxina, especialmente de los Moluscos bivalvos que salen de exportación. Las biotoxinas causantes de las biointoxicaciones se sintetizan en el fitoplancton, en el fitobentos o en microalgas. Una vez sintetizadas, las biotoxinas son ingeridas por los depredadores de plancton, entre ellos los moluscos bivalvos. Éstos, en su proceso de filtración, alimentación absorben las biotoxinas y, un hecho característico en ellos, las acumulan en sus tejidos. Esta capacidad para acumular biotoxinas, es lo que les da relevancia especial como fuentes de intoxicación para los humanos que los consumen. La cantidad de biotoxinas en el Plancton varía con los períodos del año y alcanzan niveles tóxicos sólo en los momentos de proliferación intensa y rápida de microalgas que las sintetizan. Esta proliferación puede llegar a ser tan importante que sea posible su reconocimiento a simple vista, dando lugar al fenómeno llamado marea roja. La marea roja es producida por la concentración masiva y esporádica en la superficie del mar de microorganismos fotosintéticos unicelulares (microalgas) constituidos por algunas especies de Diatomeas del género Pseudonitzchia y de Dinoflagelados ( que se encuentran tanto en aguas dulces como saladas) del género Gonyaulax y Gymnodinium, entre otros. Las mareas rojas tóxicas son portadoras de endotoxinas especialmente las algas del género Dinophysis, Prorocentrum y sus variadas especies que provocan la intoxicación diarreica, que pueden causar daños al ser ingeridas por bivalvos filtradores y que son transmitidos posteriormente al hombre mediante el consumo de estos organismos., V. Objetivo General Determinar la presencia de Acido Okadaico en Moluscos bivalvos procedentes de los criaderos de la Bahía Guaynuna-Casma VI. Objetivos Específicos - Validar e implementar la metodología para la determinación de Acido Okadaico por LC/MS. - Determinar niveles de concentración de Acido okadaico en los moluscos en estudio. - Determinar las concentraciones de metales pesados (Pb,Cd,Hg) en la zona de estudio. - Determinar las concentraciones de nutrientes (fosfatos, nitratos, etc.) en la zona de estudio. 3

4 - Efectuar el cruce de variables entre los niveles de concentración del plancton portador de la biotoxina en estudio frente a los niveles de concentración ácido okadaico, para prevenir el consumo de moluscos bivalvos. VII. Metodología La metodología empleada en la toma de muestras del estudio, se realizó de la siguiente manera: Primera salida de Muestreo: Fecha : Viaje Lima Casma (12:30 hrs.) Fecha : :00 Hrs. Salida de la ciudad de Casma hacia el criadero de moluscos bivalvos, en Guaynuná. 07:45 Hrs. Llegada al criadero Hechas las coordinaciones con el Jefe de la Estación, quien autorizó nos dieran las facilidades para el uso de una embarcación con dos tripulantes y un buzo. 09:30 Hrs. Salida del embarcadero de Acuapesca-en Guaynuná, en un bote de fibra de vidrio hacia la zona de trabajo. 09:50 Hrs Ubicamos la primera Estación ( B-313-se encuentra inscrito en una boya), la embarcación se fija a esta boya para realizar el trabajo. 10:00 Hrs. Procedemos al muestreo de agua, moluscos y fitoplancton marino. Toma de muestras de agua de profundidad: La botella Niskin es sumergida abierta, hasta la profundidad de la linterna y mediante un sistema de mensajería se cierra automáticamente, atrapando aproximadamente tres litros de agua.la botella es izada hasta la cubierta de la embarcación y a través de una pequeño caño se toma la muestra de agua, la misma que se fija con ácido nítrico y se guarda para su transporte posterior. Toma de muestras de moluscos Mientras tanto el buzo ya se encuentra tomando las muestras de moluscos de la linterna ubicada bajo de la boya nº B-313 a unos cinco metros de profundidad. El buzo coge al azar de cada uno de los diez pisos de la linterna las conchas de abanico, haciendo en total de treinta individuos con un peso aproximado de ochocientos gramos. Esta muestra es colocada en una bolsa plástica de primer uso debidamente rotulada y sellada. Luego es acondicionada en una caja térmica (cooler) con cadena de frío para su transporte al laboratorio. Toma de muestras de plancton Las muestras de plancton se colectaron con una red de fitoplancton que permitió capturar estos organismos en el área cercana a la linterna (en la estación del muestreo). 4

5 La red se sumerge hasta llegar a la profundidad donde se encuentra la linterna y se levanta verticalmente hasta el borde de la embarcación, para luego hacer una serie de lavados internos con el fin de desprender el plancton adherido a las paredes de la malla, se elimina el exceso del agua y se concentra el volumen de los organismos del fitoplancton en el frasco embudo fijado en el extremo de la red, se trasvasa el contenido a los frascos de colección debidamente rotulado. Las muestras son fijadas con una solución de formol comercial al 5% a fin de que se conserven en buenas condiciones para su identificación. De la misma manera se procede con las demás estaciones, trabajo que es resumido en la siguiente tabla: Tiempo empleado en muestreos ESTACION Moluscos Agua de mar Fitoplancton inicio término inicio término inicio término B :00 10:15 10:08 10:12 10:15 10:17 (09º ) (78º ) B-30 10:36 10:47 10:35 10:39 10:41 10:45 (09º ) (78º ) F :04 11:15 11:04 11:05 11:00 10:11 (09º ) (78º ) 24 (09º ) (78º ) 10:30 10:40 11:29 11:30 11:34 11:35 Temp. ambiente: 22.6 ºC Temp.agua fondo: 17.0 º C. Segunda salida de Muestreo: Fecha : Viaje Lima Casma (12:30 hrs.) Fecha : :00 Hrs. Salida de la ciudad de Casma hacia el criadero de moluscos bivalvos, en Guaynuná. 08:00 Hrs. Llegada al criadero Hechas las coordinaciones con el Jefe de la Estación, quien autorizó en esta oportunidad salir en compañía con inspectores de CERPER y de DIGESA con quienes haríamos el muestreo programado dando las facilidades para el uso de una embarcación con dos tripulantes y un buzo. 10:00 Hrs. Salida del embarcadero de Acuapesca-en Guaynuná, en una embarcación de fibra de vidrio hacia la zona de trabajo. 10:25 Hrs Ubicamos la primera Estación ( B-313-) y fijamos el bote a la boya. Procedemos al muestreo de agua, moluscos y fitoplancton marino. 5

6 El trabajo de recolección de muestras es similar a lo descrito anteriormente, resumiéndolo en la siguiente tabla: Tiempo empleado en muestreos ESTACION Moluscos Agua de mar Fitoplancton inicio término inicio término inicio término B :25 10:45 10:25 10:26 10:54 10:55 (09º ) (78º ) B-30 11:15 11:35 11:36 11:37 10:38 10:39 (09º ) (78º ) F :42 11:56 11:45 11:46 11:45 10:46 (09º ) (78º ) 24 (09º ) (78º ) 12:24 12:30 12:24 12:25 12:24 12:25 Temp. ambiente: 22.5 ºC Temp.agua fondo: 16.1 º C. Tercera salida de Muestreo: Fecha : Viaje Lima Casma (12:30 hrs.) Fecha : :00 Hrs. Salida de la ciudad de Casma hacia el criadero de moluscos bivalvos, en Guaynuná. 08:00 Hrs. Llegada al criadero Las actividades se desarrollaron en forma similar a las anteriores salidas, recibiendo amplio apoyo por parte de la empresa Tiempo empleado en muestreos ESTACION Moluscos Agua de mar Fitoplancton inicio término inicio término inicio término B :47 10:00 09:48 09:49 09:55 09:57 (09º ) (78º ) B-30 10:15 10:25 10:15 10:16 10:30 10:31 (09º ) (78º ) F :46 10:54 10:48 10:49 10:50 10:51 (09º ) (78º ) 24 (09º ) (78º ) 11:14 11:25 11:18 11:20 11:29 11:31 Temp. ambiente: 23.6 ºC Temp.agua fondo: 16.2 º C. 6

7 Resultados. No podemos emitir resultados en vista que el proyecto paralizó sus actividades por falta de insumos críticos y suspensión de viáticos para continuar con los muestreos. Las únicas muestras que fueron analizadas pertenecen al fitoplancton marino, cuyo resultado se expresa en las siguientes tablas: Identificación de fitoplancton marino Estación/ fecha B-30 (09º ) (78º ) Actinoptychus splendens Corethron criophilum Coscinodiscus concinus Planktoniella sol Detonula cystifera Leptocylindrus danicus PLanktoniella sol Chaetocerus decipiens Ditylum brightwelli Pleurosigma angulatum Pleurosigma intermedia Thalassiosira hyalina Thalassiosira rotula Thalassiosira eccentrica B-313 (09º ) (78º ) Achnanthes c.f. longipes Amphora ovalis Bacteriastum elongatum Coscinodiscus wallessi Chaetocerus brevis Amphora ovalis Bacteriastum elongatum Coscinodiscus curvatulus Coscinodiscus concinnus Chaetocerus brevis Gyrosigma hippocampus Grammatophora marina Navicula sp Pleurosigma angulatum Rhizosolenia delicatula Surirella fastuosa Thalassiosira rotula Euglena oxyuris Actinastrum sp. Ceratium dens Ceratium falcatum Pyrocystis robusta 7

8 Identificación de fitoplancton marino Estación/ fecha F-118 (09º ) (78º ) Actinoptychus splendens Coscinodiscus wailessi Coscinodiscus concinnus Thalassiosira rotula 24 (09º ) (78º ) Chaetocerus decipiens Chaetocerus lorenzianus Detonula cystifera Licmophora abreviata Leptocilindrus danicus Lithodesmium undulatum Chaetocerus decipiens Detonula cystifera Grammatophora marina Hemiaulus membranaceus Pinnularia sp Thalassiosira hyalina Bacteriastum elongatum Coscinodiscus wailessi Coscinodiscus concinnus Coscinodiscus curvatulus Leptocilindus danicus Pleurosigma angulatum Thalassiosira hyalina Coscinodiscus concinus Ditylum brighwelli Hemiallus membranaceus Licmophora abreviata Leptocilindrus danicus Ceratium dens Ceratium furca Protoperidinium excentricum Actinastrum sp Euglena oxyuris Dictyocha fibula Coscinodiscus concinnus Chaetocerus lorenzianus Planktoniella sol Skeletonema costaturm Thalassiosira rotula Thalassiosira nizschioides 8

9 VIII. IX. Conclusiones - Solamente se efectuaron tres salidas de muestreo, colectándose doce muestras de conchas de abanico, doce muestras de agua de mar y doce muestras de fitoplancton marino. - El proyecto suspendió su ejecución en Enero de 2005, por falta del estándar de ácido okadaico, sin el cual no se ha podido realizar la validación del método y por ende la determinación de la toxina en los moluscos. - Se identificaron organismos del fitoplancton marino perteneciente a las divisiones Bacillariophyta, Euglenophyta, Chlorophyta, Chrisophyta y Dinophyta, que se muestra en las tablas. - Estos organismos no son portadores de la toxina DSP, por lo tanto no son nocivos. - No se pudo analizar las muestras de agua de mar y de moluscos por la falta de los reactivos ya mencionados. Recomendaciones. - Es conveniente considerar que las actividades ejecutadas del presente proyecto se considere como una Primera Etapa. - Es pertinente continuar con el desarrollo de las actividades del Proyecto que nos ocupa, solicitada a través de una Adenda que será considerada como una segunda etapa. Lima, 24 Abril Blgo. Luis Curotto Lévano Responsable del proyecto. 9

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