TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN Y CONSERVACIÓN DE SANGRE

Transcripción

1 Procedimiento Operativo Estandarizado N 10 TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN Y CONSERVACIÓN DE SANGRE I. Objetivo: Describir los procedimientos y distintas técnicas para la extracción de muestras de sangre en aves y mamíferos y para su adecuada conservación. II. Procedimientos: Cada vez que tome muestras tenga presentes las medidas enumeradas en el PO N 3, Higiene y Profilaxis. A. Consideraciones generales: 1. La sangre puede ser extraída de una vena, arteria o directamente del corazón. La selección del lugar de la extracción dependerá de la especie y el tamaño y estado del animal a muestrear, de la experiencia y habilidad del ejecutor de la maniobra y de la disponibilidad de material. 2. Las aves o mamíferos muestreados deben ser inmovilizados de una manera adecuada mientras se efectúa la extracción con el fin de evitar movimientos que dificulten la tarea y puedan lastimar al operador y/ o animales. 3. El volumen sanguíneo que puede ser tomado de un animal con relativa seguridad depende del tamaño corporal y el estado sanitario del mismo. El volumen sanguíneo total de un animal es de aproximadamente un 10 % del peso corporal total (6 a 15.3 ml / kg). La extracción de una muestra que represente aproximadamente el 1 a 2 % del peso del animal (10% del volumen sanguíneo total) no lo dañará. Recuerde que es ideal contar con un mínimo de 3 ml de sangre para la realización de pruebas toxicológicas básicas (la cantidad de plasma a obtener será aproximadamente el 50% de la muestra de sangre entera). Sin embargo, en aves muy pequeñas, ocasionalmente se pueden obtener muestras mayores a uno o dos tubos capilares. B. Metodología: 1. Las muestras deben tomarse con jeringas es- tériles cuya capacidad y diámetro de la aguja se adecúe a la especie a muestrear. 2. Para facilitar la extracción es recomendable heparinizar las jeringas y agujas antes de tomar las muestras. Las jeringas y agujas se heparinizan cargando aproximadamente 0,1 ml de heparina en la jeringa, corriendo el émbolo lo más atrás posible y sacudiendo la jeringa de manera tal que todas sus paredes tomen contacto con la sustancia. Luego, se vuelve el émbolo a la posición de la jeringa vacía, expulsando cualquier excedente que pudiera quedar en el interior de la jeringa. Antes de sangrar animales, prepare una serie de jeringas, teniendo en cuenta las que puede necesitar durante los procedimientos, dada su habilidad y el número de animales a muestrear. Etiquete o rotule los tubos antes de comenzar el muestreo. 3. El animal debe ser sostenido por un ayudante, que lo mantenga perfectamente inmóvil y en una posición que facilite las maniobras. Moje el área de extracción de la muestra (vena o arteria) con alcohol antes de tomar la muestra. Libere el área de plumas o pelos. De acuerdo al sitio utilizado para la extracción, puede resultar práctico que el ayudante que sostiene al animal presione la vena para ingurgitarla. En otros casos, será más cómodo que sea el tomador de la muestra quien lo haga. 4. Luego de introducir la aguja en la vena, extraiga la sangre muy lentamente, permitiendo que la jeringa se llene sola. Intente no generar vacío o remolinos, ya que esto produce la adherencia del bisel de la jeringa con la pared del vaso sanguíneo y el consiguiente bloqueo del flujo de sangre. Evite maniobras bruscas para prevenir la hemólisis (ruptura de las células sanguíneas). Recuerde succionar con suavidad, sobre todo en aves, puesto que sus venas se colapsan fácilmente. 5. Luego de tomada la sangre, quite la aguja del sitio de inyección y presione suavemente con una gasa o algodón limpios hasta que cese la hemorragia (aprox. 30 segundos). Coloque el capuchón sobre la aguja y 87

2 mezcle bien el contenido (para que no se coagule) en la jeringa, con movimientos suaves de inversión. La sangre debe ser transferida a los tubos de ensayo en los cuales se la va a centrifugar y luego debe ser refrigerada. La transferencia de la sangre a los tubos debe ser muy lenta, dejando que la sangre se deslice sobre la pared del tubo, para evitar la hemólisis. De ser posible, quite la aguja de la jeringa para esta maniobra. 6. En casos de aves muy pequeñas, las muestras deben ser recogidas directamente en tubos capilares o papel de filtro, según lo descripto en la sección siguiente, Técnicas de Extracción. C. Técnicas: 1. Punción yugular Las venas yugulares recorren el largo del cuello de los animales a ambos lados. Es un sitio de extracción ideal para mamíferos (salvo casos excepcionales como suidos, mamíferos marinos, etc.) y también para aves grandes (patos) y medianas (perdices). Por lo general, en las aves la vena yugular derecha es mayor que la izquierda y debe ser preferida para la extracción. Esta vena es preferida para la extracción en aves, puesto que permite colectar un mayor volumen de sangre en menor tiempo y es muy rara la formación de hematomas si la maniobra se realiza adecuadamente. En mamíferos pueden utilizarse cualquiera de las dos, según la comodidad del operador. Izq.: Punción yugular / Der. Punción de la vena braquial Aves: lo ideal es contar con la ayuda de un asistente que sostenga el ave. Si el ave es pequeña, puede ser sostenida y sangrada por la misma persona sin mayor dificultad. En ese caso, sostenga el ave con una mano, con el abdomen hacia arriba y la cabeza levemente inclinada hacia abajo, extendiendo el cuello para estabilizar la vena. Moje las plumas del cuello con alcohol y separe las plumas. Mantenga firme la yugular entre los dedos pulgar e índice. Generalmente se utilizan jeringa y aguja para la extracción de este sitio (por ej. Aguja 25G y jeringa de 3 a 1 ml). Inserte la aguja en la vena suavemente y sin mover, tire del muy lentamente del émbolo hasta completar el volumen deseado de muestra. Quite la aguja de la vena y presione suavemente con un dedo o gasa sobre la herida hasta que cese el sangrado. Mamíferos: haga presión sobre la parte inferior del cuello con el dedo pulgar de una mano y palpe la vena. Mantener el cuello del animal extendido e inmóvil facilita las maniobras. Canalice la vena con la aguja y extraiga el volumen de muestra deseado. Presione suavemente sobre la herida para evitar el sangrado y posterior hematoma. 2. Punción de la vena braquial En las aves esta vena se denomina vena basílica y corre sobre el húmero hacia el codo justo por debajo de la piel en la superficie ventral del ala y se divide en 3 ramas sobre el cúbito y radio. Esta vena se utiliza principalmente en aves medianas a grandes. Generalmente es necesario hacer presión prolongada sobre el sitio de extracción para evitar la formación de grandes hematomas. En los mamíferos, sobre todo en caninos y felinos, se la ve atravesando el antebrazo (cúbito y radio) en la superficie dorsal de los miembros anteriores. Aves: limpie la zona de la articulación del codo con alcohol para poder visualizar la vena. Canalice la vena con una aguja o butterfly y colecte la sangre que sale del cono directamente en un tubo de ensayo o con una jeringa. Las muestras que se obtienen por este método son pequeñas (generalmente 1 ml) y suelen ser colectadas directamente en tubos de microhematocrito. Para esto, se pincha la vena con una aguja y luego se apoya el tubo capilar directamente sobre la gota de sangre. Pueden llenarse varios tubos capilares de esta manera. Presione sobre el sitio de extracción para reducir el hematoma que suele aparecer con frecuencia, aún realizando las maniobras correctas. 88 Editoras: MARCELA UHART y MARÍA E. ZACCAGNINI

3 Punción de la vena metatarsiana dorsal Esta vena se encuentra en la región dorsomedial de la pata de las aves, justo por encima de la articulación del tarso. Es un buen sitio de muestreo en aves de presa. Para visualizar la vena, se debe presionar sobre el sitio de la punción para obstruir el paso de la sangre. La punción se realiza generalmente con una aguja (generalmente 25 G) y la sangre se colecta directamente en tubos capilares o en una jeringa de 1 ml. Se debe aplicar presión sobre el sitio de la punción al retirar la aguja. La formación de hematomas está restringida por la musculatura de la zona. Punción de la vena braquial Mamíferos: especialmente caninos y felinos, es un buen sitio de muestreo. Haga sobresalir (ingurjite) la vena, haciendo presión sobre el antebrazo, cerca del codo, con una mano o con una banda elástica. Canalice la vena con una aguja o butterfly y colecte la sangre con una jeringa hasta obtener el volumen de muestra deseada. Presione sobre el sitio de extracción para reducir el hematoma. El animal debe estar bien inmovilizado para esta maniobra, preferentemente sentado o en decúbito esternal. 3. Punción de la vena safena Es una técnica de extracción para mamíferos, sobre todo caninos y felinos. La vena safena cruza el miembro posterior, por debajo de la articulación del tarso (tobillo), en su superficie dorsal-lateral. Proceda de igual manera que con la vena braquial. El animal debe estar bien inmovilizado para esta maniobra, preferentemente acostado sobre uno de sus lados. 4. Punción de la vena femoral Es una técnica de extracción para mamíferos, sobre todo para suidos y felinos. La vena femoral baja desde la articulación del miembro posterior y la cadera (coxofemoral) por la cara interna del miembro posterior (entrepierna). Presione con el dedo índice sobre la parte medial de la pierna buscando sentir el pulso de la arteria femoral que corre cercana a la vena. Ingurgite la vena y proceda a la extracción de la muestra. El animal debe estar bien inmovilizado para esta maniobra, acostado sobre uno de sus lados. 5. Punción cardíaca Es una maniobra peligrosa y estresante para aves y mamíferos, por lo que se la debe elegir en casos de sacrificio del animal. Es una buena técnica para animales recién muertos o sacrificados. Es aconsejable anestesiar los animales previamente a la realización de esta maniobra. Aves: sostenga el ave sobre su superficie dorsal. Inserte una aguja de 3 a 5 cm de largo con jeringa en la parte ventral del tórax, cerca de la «V» que forma la quilla, dirigiéndola hacia la cabeza y la columna. Al tocar el corazón pueden sentirse sus vibraciones. Al aspirar con la jeringa se verá un flujo masivo de sangre. Una opción es matar primero al ave y luego incidir rápidamente la cavidad abdominal. Levante la caja torácica exponiendo el corazón e inserte la aguja en cada cámara para obtener una muestra completa. Mamíferos: es un poco más complicado por el grosor de la pared del tórax. Utilice agujas largas (dependiendo de la especie) e insértela donde vea latir el corazón en un espacio intercostal (aprox. entre 2da y 4ta costilla). La posición del animal durante la manio- 89

4 bra varía de acuerdo al tamaño del animal. Puede ser con el animal de pie, o en decúbido lateral derecho (lado izquierdo hacia arriba). Al tocar el corazón pueden sentirse sus vibraciones. Al aspirar con la jeringa se verá un flujo masivo de sangre. En mamíferos pequeños proceda igual que con las aves. Vuelva a anestesiar a los animales muestreados hasta asegurarse de que han muerto. 6. Uña Es una técnica que sirve sólo para aves y reptiles y proporciona una cantidad de muestra muy limitada (como para un extendido). Aunque es una muestra fácil de obtener y que requiere mínima manipulación del animal, es dolorosa y puede dañar la uña del animal. Aves: limpie la uña con mucho cuidado, utilizando alcohol y espere a que se seque. Tome el dedo con suavidad, evitando cortar la circulación al miembro. Corte la uña hasta que se obtenga una gota de sangre y descarte esta primera gota. Colecte las gotas siguientes con un tubo capilar. No haga presión a modo de ordeñe sobre el dedo. Aplique alguna solución hemostática (que favorezca la coagulación, como polvillo hemostático o barra de nitrato de plata, etc.) 7. Punción de piel Es una buena técnica para aves con venas muy pequeñas como para ser canalizadas o punzadas con aguja y jeringa, pero proporciona un volumen de muestra muy pequeño. Es fácil de realizar y requiere mínima manipulación del animal. Generalmente no produce hematomas ni hay pérdida importante de sangre. Aves: desinfecte la piel con alcohol en la zona de la vena mediana metatarsal (en fig. pág. anterior). Punce la piel con una aguja, suavemente, apenas alcanzando la vena. Colecte las gotas de sangre directamente en tubos capilares o en papel de filtro. D. Identificación y conservación de las muestras: 1. Mantenga las muestras refrigeradas o en una heladera con hielo hasta que las pueda centrifugar. 2. En cuanto sea posible, proceda a centrifugar la sangre a 2000 a 3000 rpm durante 15 a 20 minutos. Las centrífugas de campo (funcionan a 12 volts) son ideales para estas maniobras. Puede utilizarse también cualquier tipo de centrífuga fija. 3. Separe el centrifugado con pipetas descartables y vierta el plasma y las células (si se las requiere para determinaciones analíticas) en tubos para congelado (criotubos). 4. Coloque los tubos capilares dentro de tubos de ensayo, tapónelos y centrifugue. 5. Guarde los tubos capilares centrifugados en frío o congelados (evite que se rompan) 6. Seque los papeles de filtro con muestra de sangre directamente al aire y guarde en una bolsa ziplock (R) o whirl-pack (R) para que no se ensucie o contamine. 7. Guarde en frío hasta que se pueda acceder a un freezer o termo de nitrógeno líquido según lo detallado en POE N 12 (Conservación de las Muestras). 8. No olvide transferir la información de la etiqueta o rótulo al nuevo envase de las muestras. Complete las etiquetas según PO N E 11 (Etiquetado e Identificación de las Muestras). NOTA: si no pudiera centrifugar la muestra a campo con cetrífuga portátil (12v) puede hacerlo con centrífuga fija, teniendo en cuenta que su procesado no debe realizarse pasado dos horas desde su extracción. NO CONGELE SANGRE ENTERA (ANTES DEL CENTRIFUGADO) NO CONGELE SANGRE ENTERA. 90 Editoras: MARCELA UHART y MARÍA E. ZACCAGNINI

5 E. Materiales necesarios: Indispensable * varias copias Formulario N 2: Muestras animales * jeringas descartables: 1, 3, 5, 10, 20 cc * agujas descartables: a) aves: 23, 25, 27G x 1.0 a 3.0 cm b) mamíferos: 18, 20, 21, 23, 25 G * tubos de ensayo con o sin heparina * tubos capilares con o sin heparina * heparina * papel de filtro * alcohol / etanol * gasa / algodón * marcador indeleble * criotubos * pipetas plásticas descartables para la transfe rencia del suero y/o plasma a los criotubos. * centrífugas de campo (12 volts) * conservadora con hielo * etiquetas, cinta de papel Optimo * termo de nitrógeno líquido 91