INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN LAMINOCULTIVOS LISTOS PARA USAR DA Rev.: Sept BD BBL GO Slide

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1 INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN LAMINOCULTIVOS LISTOS PARA USAR DA Rev.: Sept 2006 BD BBL GO Slide USO PREVISTO BBL GO Slide es un sistema de portaobjetos de dos lados para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae partir de muestras clínicas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. La gonorrea es una enfermedad de transmisión sexual causada por Neisseria gonorrhoeae (gonococos) 1-3. Aunque la infección a menudo puede ser diagnosticada por sus síntomas clínicos, el aislamiento del agente es necesario para suministrar un tratamiento antimicrobiano apropiado. Asimismo, un diagnóstico microbiológico es necesario para los pacientes asintomáticos o pacientes con infección crónica. La Neisseria gonorrhoeae es un organismo exigente, puesto que requiere cisteína, purina, purimidinas y una fuente de energía utilizable (por ej., glucosa o purivato) para su crecimiento; las cepas auxotróficas pueden requerir nutrientes adicionales que por lo general no se suministran en los medios de cultivo. Por tanto, se utiliza generalmente como medio de base el agar chocolate, enriquecido posteriormente con IsoVitaleX. El crecimiento del organismo también se favorece aumentando la humedad y con dióxido de carbono 1-4. La autólisis es común cuando Neisseria gonorrhoeae ha alcanzado la fase de crecimiento estacionario, seguida de una pérdida rápida de viabilidad del cultivo. Por tanto, la utilización de medios apropiados de transporte y crecimiento y, sobre todo, un transporte rápido, son condiciones forzosas para obtener una alta proporción de muestras positivas. Los dos medios incluidos en BBL GO Slide se basan en un agar GC modificado. Mientras que el medio 1 es selectivo para neisseriae patógena e inhibe la mayoría de los organismos acompañantes contenidos en la muestra, el medio 2 no es selectivo y favorece el crecimiento de todas las bacterias y hongos. El medio 2 se utiliza principalmente para el aislamiento de cepas de N. gonorrhoeae sensibles a los inhibidores incluidos en el medio 1. En ambos medios, la peptona de proteasa Nº 3 proporciona los nutrientes generales. IsoVitaleX aporta vitaminas, aminoácidos, purinas y purimidinas, además de glucosa, que es la fuente de energía utilizable. El almidón de maíz absorbe los compuestos tóxicos que pueden estar incluidos en la muestra. El cloruro sódico mantiene el equilibrio osmótico. En el medio 1, la vancomicina, colistina y trimetoprima inhiben las bacterias acompañantes, y la pimaricina (natamina) inhibe los hongos. Después de la inoculación, se agrega una tableta de CO 2 a cada tubo para proporcionar una atmósfera enriquecida con CO 2. BBL GO Slide se utiliza para el aislamiento de N. gonorrhoeae a partir de muestras clínicas. Después de la inoculación, BBL GO Slide puede ser enviado desde la consulta del médico a un laboratorio de análisis para otros análisis. DA

2 REACTIVOS BBL GO Slide Fórmulas* por litro de agua purificada Medio 1 BD IsoVitaleX Enrichment Bacto Proteose Peptone No. 3 15,0 g Vitamina B 12 0,01 g Almidón de maíz 1,0 L-glutamina 10,0 Fosfato dipotásico de hidrógeno 4,0 Adenina 1,0 Fosfato monopotásico 1,0 Clorhidrato de guanina 0,03 Cloruro sódico 5,0 Acido p-aminobenzoico 0,013 Hemoglobina 10,0 Dinucleótido de nicotinamida adenina 0,25 Agar 13,5 Pirofosfato de tiamina 0,1 Vancomicina 0,004 Nitrato férrico 0,02 Sulfato de colistina 0,009 Clorhidrato de tiamina 0,003 Lactato de trimetoprima 0,006 Hidrocloruro de cisteína 25,9 Pimaricina (= Natamicina) 0,2 L-cistina 1,1 IsoVitaleX Enrichment 10,0 ml Glucosa 100,0 ph 7,2 ± 0,2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. El medio 2 contiene los mismos ingredientes nutritivos y el mismo valor de ph del medio 1, pero no contiene vancomicina, colistina, trimetoprima ni pimaricina. Las tabletas de CO 2 contienen como ingredientes activos (en una base formada por cera de carnauba y estereatato de magnesio): Acido cítrico 24,8% Carbonato de hidrógeno sódico 26,7% Cada unidad envasada contiene 10 tabletas en un blíster. PRECAUCIONES. Solamente para uso profesional. No utilizar el medio si muestra evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro. Emplear técnicas asépticas y adoptar las medidas de protección contra peligros biológicos durante todo el procedimiento. Usar guantes protectores al recoger y manipular las muestras y los portaobjetos positivos con agentes infecciosos. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. Cuando se utilice BBL GO Slide como medio de transporte desde la consulta del médico al laboratorio de diagnóstico, cumplir las normas locales para el envío de muestras infecciosas. Advertencia: No ingerir las tabletas de CO 2! ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir BBL GO Slide, almacenarlo en un lugar oscuro a 2 8 C en el envase original hasta momentos antes de su utilización. No congelar, sobrecalentar, deshidratar ni someter a fluctuaciones de temperatura. Los portaobjetos pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del envase) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Los portaobjetos sin abrir de envases abiertos almacenados en un lugar limpio a 2 8 C pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad. Los portaobjetos abiertos deben utilizarse de inmediato. Almacenar las tabletas de CO 2 a 2 8 C. Se debe tener en cuenta que las tabletas deben ser utilizadas directamente después de romper el blíster. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Preparar las suspensiones equivalentes al patrón N 0,5 de McFarland con las cepas mencionadas a continuación. Para cada organismo preparar un tubo (lo suficientemente ancho DA

3 para permitir la inserción de un soporte de agar BBL GO Slide) con 20 a 25 ml de solución salina estéril y añadir 1 ml de la suspensión anterior de la cepa. Abrir un BBL GO Slide, retirar el soporte de agar, sumergirlo brevemente en la suspensión de la cepa de prueba, insertar una tableta de CO 2 en los tubos para las cepas de Neisseria y continuar según se describe en la sección Procedimiento de análisis. Incubar durante h a C. Examinar si las superficies de agar presentan crecimiento según lo descrito en Resultados e interpretación. Cepa de prueba Medio 1 Medio 2 Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria sicca Inhibición completa ATCC 9913 Escherichia coli Inhibición de parcial a completa ATCC Proteus mirabilis Inhibición de parcial a completa; ATCC inhibición de la proliferación Enterococcus faecalis Inhibición de parcial a completa ATCC Staphylococcus epidermidis Inhibición de parcial a completa ATCC Candida albicans ATCC Inhibición de parcial a completa PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BBL GO Slide. Con control microbiológico. Tabletas de CO 2 ; se utiliza una tableta por tubo para suministrar una atmósfera enriquecida con CO 2. Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo según lo descrito. Se puede utilizar Oxidase Dropper Reagent, 50 ampollas, N de cat ; también, BD DrySlide Oxidase test (N de cat , 75 pruebas). Tipos de muestras BBL GO Slide puede ser utilizado para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae a partir de todos los tipos de muestras clínicas. Las muestras frecuentes incluyen torundas de las vías genitourinarias, el recto y la orofaringe (véase también CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO) 1-4. Recogida de muestras Utilizar torundas Dacron. Las torundas de algodón y alginato de calcio no deben ser utilizadas porque pueden contener residuos de compuestos tóxicos para N. gonorrhoeae 1. Mediante una torunda o un asa estériles, recoger las muestras de la uretra de ambos sexos, cuello del útero, glándula de Bartholin, el recto o la faringe. Consultar en las referencias los detalles 1-4. Para una óptima recuperación, inocular BBL GO Slide después de la recogida de las muestras. Procedimiento de análisis 1. Examinar a simple vista las superficies de agar con el tubo BBL GO Slide cerrado. Desechar los portaobjetos que muestren reducción de los medios o contaminación. 2. Etiquetar el tubo con el nombre del paciente, el número de muestra y la fecha de inoculación. 3. Desenroscar la tapa y retirar el portaobjetos del tubo de plástico sin tocar las superficies de agar. 4. Mediante una torunda o asa, primero inocular el medio 1, luego el medio 2. La torunda debe girarse en ambas superficies de agar ejerciendo una leve presión. Las muestras tomadas con el asa se deben extender sobre ambas superficies de agar. 5. Insertar una tableta de CO 2 en cada tubo. No colocar la tableta sobre los medios de agar en el soporte de plástico. No añadir agua! DA

4 6. Insertar el portaobjetos inoculado en el tubo de plástico y cerrar la tapa a rosca por completo. La atmósfera húmeda en el tubo de plástico produce la liberación de CO 2 de la tableta, que requieren los gonococos para el crecimiento. También, se puede incubar el portaobjetos en una incubadora de CO 2 con la tapa ligeramente floja para permitir el intercambio de gases. 7. Incubar durante al menos de 24 h a C. Si no se observa crecimiento el tiempo de incubación puede extenderse hasta 48 o 72 h antes de considerar el cultivo como negativo. Se debe tener en cuenta que BBL GO Slide debe ser enviado a un laboratorio de análisis después de la inoculación, pero antes de la incubación. El envío de portaobjetos incubados a los laboratorios de análisis se recomienda solamente si pueden ser enviados y procesados dentro de las 24 h. Resultados e Interpretación Después de la incubación, retirar con cuidado el portaobjetos del tubo para realizar la interpretación. Emplear técnicas asépticas durante todo el procedimiento de examen. Se recomienda utilizar guantes quirúrgicos durante el examen. No tocar las superficies de agar! El crecimiento se demuestra por la formación de colonias en ambos medios del tubo. Cualquier recuento de colonias de Neisseria gonorrhoeae significa infección. Medio 1: Las colonias de Neisseria gonorrhoeae son pequeñas y translúcidas (como gotas de rocío) y tienen resultado positivo a la oxidasa. El cultivo se califica como negativo si no hay colonias visibles después de 72 h de incubación. En casos excepcionales, puede haber crecimiento de estreptococos resistentes a los antibióticos o Enterobacteriaceae en el medio 1. Estos organismos se pueden diferenciar de los gonococos por la forma de las colonias y la reacción negativa a la oxidasa. Medio 2: Dada su naturaleza no selectiva, todos los hongos y las bacterias pueden crecer en este medio. Si no se observa crecimiento de N. gonorrhoeae en el medio 1, debe examinarse el medio 2 para verificar el crecimiento de estos patógenos, porque algunas cepas de gonococo son sensibles a los antibióticos presentes en el medio 1 y, por tanto, crecen solamente en el medio 2. Para la confirmación del diagnóstico realizar lo siguiente: 1. Si se presenta un crecimiento débil de N. gonorrhoeae (de una a tres colonias aisladas) en los medios, se debe realizar un subcultivo para pruebas adicionales (por ej., subcultivar nuevamente en un BBL GO Slide nuevo). 2. Si se encuentran presentes más de tres colonias, una colonia debe ser sometida a una prueba de oxidasa (véase la sección Materiales no suministrados para la disponibilidad). Las colonias gonocócicas o el material de colonias desarrolla un color de azul oscuro a negro dentro de los sec. Aparte de los gonococos, otros microorganismos, por ej., Pseudomonas aeruginosa también son positivos a la oxidasa. Sin embargo, el crecimiento de estas bacterias se inhibe casi totalmente en el medio 1 del portaobjetos. La diferenciación de Pseudomonas aeruginosa de los gonococos es posible mediante tinción de Gram y microcopia. En la tinción de Gram, Neisseria gonorrhoeae se observa como pequeños diplococos gram negativos, mientras P. aeruginosa es un bacilo gram negativo. Para obtener una identificación completa mediante métodos bioquímicos y/o serológicos y para pruebas de sensibilidad, el portaobjetos debe enviarse a un laboratorio bacteriológico. Enviar los portaobjetos positivos sin dilación! Después de su utilización y antes de desecharlos, todos los portaobjetos utilizados y otros materiales contaminados deben ser esterilizados en autoclave o incinerados. Para obtener más detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO BBL GO Slide is used for the isolation of Neisseria gonorrhoeae from clinical specimens. BBL GO Slide se utiliza para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae a partir de muestras clínicas. The media on this system are commonly used formulations for the isolation and cultivation of DA

5 Neisseria gonorrhoeae.los medios en este sistema son fórmulas utilizadas comúnmente para el aislamiento y cultivo de Neisseria gonorrhoeae 1,3,4. Neisseria gonorrhoeae es muy sensible a las condiciones ambientales adversas. Si los portaobjetos inoculados o inoculados e incubados han de ser enviados a un laboratorio para un diagnóstico posterior, esto debe hacerse inmediatamante después de la inoculación o después de efectuar la lectura. La temperatura de transporte óptima es de C. No refrigerar! En raras ocasiones, los organismos diferentes Neisseria gonorrhoeae (por ej., Neisseria lactamica) pueden crecer en el medio selectivo (medio 1) del portaobjetos, y pueden ser similares a N. gonorrhoeae 1. La diferenciación de estas especies es posible mediante métodos bioquímicos o inmunológicos exclusivamente. Se debe tener en cuenta que esto se producirá principalmente con muestras de la orofaringe, porque las especies de Neisseria no patógenas forman parte habitual de la flora de las vías respiratorias superiores. El medio 2 no es selectivo; en este medio, la flora normal puede superar en crecimiento a N. gonorrhoeae. Si se obtienen cultivos mixtos, puede ser necesario realizar subcultivos en medios en placa apropiados. Se debe tener en cuenta que las especies de Neisseria similares morfológicamente pero no patógenas y organismos relacionados forman parte habitual de la flora bucal humana y pueden crecer en el medio 2 de las muestras tales como las torundas bucales. BBL GO Slide está diseñado para ser utilizado para el aislamiento primario y transporte. Para las pruebas adicionales y especialmente si se producen cultivos mixtos, se deben realizar subcultivos en medios de placas apropiados para obtener cultivos puros, lo que es obligatorio para obtener la identificación y realizar pruebas de sensibilidad 1,3. Tener en cuenta que son necesarias pruebas adicionales tales como procedimientos bioquímicos y/o al microscopio son necesarias para la identificación de patógenos aislados en este portaobjetos 1,3. La mayoría de estos métodos sólo están disponibles en los laboratorios de diagnóstico y por lo general no pueden realizarse en la consulta del médico. Por tanto, todos los laminocultivos con resultados dudosos o claramente positivos deben enviarse a un laboratorio de análisis apropiado. BBL GO Slide no está diseñado para ser utilizado para el aislamiento de patógenos diferentes de Neisseria gonorrhoeae. REFERENCIAS 1. Janda, W.M., and J.S. Knapp Neisseria and Moraxella catarrhalis. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Halle, E. et al Genitalinfektionen Teil I: Infektionen des weiblichen und männlichen Genitaltrakts. In: Mauch, H., R. Lüttiken, and S. Gatermann (eds.). MiQ Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 10. Urban und Fischer, München. 3. Halle, E. et al Genitalinfektionen Teil II: Infektionserreger. In: Mauch, H., R. Lüttiken, and S. Gatermann (eds.). MiQ Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol 11. Urban und Fischer, München. 4. Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ENVASE Y DISPONIBILIDAD BBL GO Slide. N de cat portaobjetos INFORMACION ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. DA

6 Becton Dickinson GmbH BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: , Fax: Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo, BBL, IsoVitaleX and DrySlide are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Bacto is a trademark of Difco Laboratories, divison of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection Becton, Dickinson and Company DA

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