LA UNICA HERRAMIENTA QUE ESTANDARIZA LOS BANCOS DE SANGRE : CALIDAD ALDREDO MARTINEZ LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS CEMIC
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- Martín Ferreyra Barbero
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1 LA UNICA HERRAMIENTA QUE ESTANDARIZA LOS BANCOS DE SANGRE : CALIDAD ALDREDO MARTINEZ LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS CEMIC
2 La única fuente de obtención de sangre es el ser humano, por lo cual la misma debe emplearse en condiciones de equidad, raciocinio e igualdad, de este modo la disponibilidad de la misma y sus componentes se transforman en una problemática de orden público e interés nacional dada su calidad de irreemplazable y necesaria. Marcos Andrés Bujas; Revista Argentina de Transfusión, prologo de la editorial Guias Nacionales para el uso apropiado de sangre y sus hemocomponentes Volumen XXXIII/ Nº 3,4/ 2007, Pag. 193
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11 UN HIJO LE ESCRIBE A SU MADRE: MAMÁ AYUDAME A SABER QUE PASA CON ESTE AMIGO QUE NO ALCANZO A ENTENDERLO, PORQUE SE DIVORCIÓ DE SU MUJER SE ENAMORÓ DE LA HERMANA DE SU CUÑADA QUE ES MADRE DE SUS SOBRINOS, NIETOS DE SU EX SUEGRO
12 LA MADRE LE CONTESTA A SU HIJO: NO SE SI PUEDO AYUDARTE HIJO MIO, PORQUE TAMBIEN YO TENGO ALGUNAS INCOGNITAS, YO SE QUE ERES MI HIJO, PERO YO ESTUVE ENAMORADA DE TU PADRE, QUE FUE MI CUÑADO, AUNQUE NO ERA EL TIO DE TUS PRIMOS PERO SI EL HIJO DE TU ABUELO Y EL HERMANO DE MI CUÑADA
13 NO ENTENDER!! RESULTADOS QUE DEBEMOS HACER?
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15 EN EL BANCO DE SANGRE EXISTEN MÉTODOS: -CUANTITATIVOS - CUALITATIVOS
16 Métodos Cualitativos : Definición METODOS CUALITATIVOS RESPUESTA BINARIA: SI - NO PRESENCIA - AUSENCIA POR ARRIBA DE UNA DETERMINADO NIVEL (CONCENTRACIÓN)a
17 EXISTEN GUÍAS CLARAMENTE DEFINIDAS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS CUANTITATIVOS. NO EXISTEN LINEAMIENTOS CLAROS PARA LOS MÉTODOS CUALITATIVOS. LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO QUE CARACTERIZAN A LOS MÉTODOS CUALITATIVOS Y CUANTITATIVOS SON DISTINTOS.
18 VALIDACION VERIFICACION
19 Validación. Definición VALIDACION ES LA CONFIRMACIÓN MEDIANTE EL EXAMEN Y LA PROVISIÓN DE UNA EVIDENCIA OBJETIVA DE QUE SE HAN SATISFECHO UNOS REQUISITOS PARTICULARES PARA UN USO PRETENDIDO Y ESPECIFICO Verificación. Definición Verificar las especificaciones provistas por el fabricante y asumimos que el ensayo puede ser incorporado al laboratorio DEFINICION DE VALIDACION SEGUN LA NORMA ISO 8402
20 LAS PREGUNTAS A CONSIDERAR SON: -CUMPLE ESE ENSAYO CON NUESTROS REQUERIMIENTOS DE CALIDAD? -DE ACUERDO A LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO VOLCADOS POR EL FABRICANTE EN SUS INSERTOS (QUE SE TRANSFORMARAN EN NUESTRAS ESPECIFICACIONES A VERIFICAR), PODEMOS DECIR QUE EN FORMA TEÓRICA EL ENSAYO CUMPLE CON NUESTROS REQUERIMIENTOS DE CALIDAD - CÓMO PODEMOS ASEGURAR ESTO?
21 FABRICANTE VALIDACION VERIFICACION PARAMETROS DE DESEMPEÑO BIAS, CV, RANGO REPORTABLE SE INCORPORA AL BANCO DE SANGRE
22 Los métodos cualitativos o semi-cualitativos se suelen emplear como métodos de screening Separan o discriminan muestras de un grupo más grande. -Uno o más analitos por encima o por debajo de un valor preestablecido. - Este valor preestablecido puede haber sido establecido de distintas formas: 1) Organismo oficial 2) Control de Calidad Interno 3) Requerimientos del Cliente VALOR DE CORTE CUT OFF
23 Como pueden Verificarse los parámetros de un ENSAYO ESTÁNDAR INTERNACIONAL PANELES DE SEROCONVERSIÓN MUESTRAS CLINICAS
24 REQUERIMIENTOS MINIMOS PARA LA VALIDACION Y/O VERIFICACION DE UNA PRUEBA
25 Parámetros de Desempeño: -Veracidad: Se define como el grado de acuerdo entre una cantidad medida o calculada y a su valor estimado (mejor estimación del valor verdadero), mediante análisis de materiales de referencia o comparación de resultados con los obtenidos por un método de Referencia.
26 Precisión LA PRECISIÓN ES CUAN CERCA LOS VALORES MEDIDOS ESTÁN UNOS DE OTROS. Precisión en condiciones de repetibilidad (Sr, SDr) - El mismo procedimiento de medida - El mismo laboratorio - El mismo operador - El mismo equipo - Repeticiones en un intervalo corto de tiempo - Es lo que comúnmente denominamos precisión intra corrida o intra serie
27 VALOR DE CORTE : CUT Off ES EL UMBRAL ESTABLECIDO POR EL FABRICANTE POR ENCIMA DEL CUAL EL TEST ES POSITIVO Y POR DEBAJO DEL CUAL EL TEST ES NEGATIVO CUT OFF : 50%(+)- 50% (-) C 50
28 VALOR DE CORTE CUT OFF IDEAL RESPUESTA NEGATIVA RESPUESTA POSITIVA C= 0,02 CONCENTRACION REAL ZONA DE VERDADEROS NEGATIVOS ZONA DE FALSOS POSITIVOS ZONA DE FALSOS NEGATIVOS ZONA DE VERDADEROS POSITIVOS C= 0,02 CONCENTRACION
29 CURVA DE IMPRESICION
30 CONCENTRACIONES DEL ANALITO CERCANO AL CUT OFF INTERVALO 95 % INTERVALO C 5 -C 95
31 INTERVALO 95% (C 5 -C 95 ) C 5 CUT OFF- (C 5 -C 95 ) C 95 5%(+) 95%(-) 50%(+) 50%(-) 95%(+) 5%(-)
32 VERIFICACION DE PARAMETROS DE ENSAYOS CON MUESTRAS CLINICAS 1- Preparar tres tipos de muestras una con la Concentración del cut off C 50 y las otras dos con un rango de concentraciones 20% por arriba del cut off y 20% por debajo de manera de poder hacer 40 replicados sobre la misma muestra 2-Las muestras deben testearse 40 veces o más por duplicado y determinar el porcentaje de resultados positivos y negativos
33 ES EL C50 PREPARADO EL CORRECTO? REPLICADOS C 50 REPLICADOS (+) % (+) N= C 50 INCONSISTENTE REPLICADOS C50 n=40 18 A 22 (+) 45 % A 55% C 50 CONSISTENTE
34 EL RANGO DE CONCENTRACION +20% -20% CONTIENE EL INTERVALO C 5 -C 95? 1- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL RANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOS ESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20% ESTA DENTRO DEL INTERVALO C 5 -C SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL RANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOS ESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20% CONTIENE EL INTERVALO C 5 -C 95
35 3- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL RANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOS ESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20% ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C 5 -C SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL RANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOS ESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20% ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C 5 -C 95
36 Falso Positivo (FP) Muestras (+) por el test de screening y (-) por el método de referencia Falso Negativo (FN) Muestras (-) por el test de screening y (+) por el método de referencia
37 Tasa de Falsos Positivos Probabilidad de que una muestra con valor verdadero negativo de un valor positivo por el test de screening FP TASA DE FP = FP + TN FP: Falso Positivo FN: Falso Negativo TP: Positivo Verdadero TN: Negativo Verdadero
38 Tasa de Falsos Negativos Probabilidad de que una muestra con valor verdadero positivo de un valor negativo por el test de screening TASA DE FALSON NEGATIVOS = FN FN + TP
39 TABLA DE CONTINGENCIA Método X Diagnóstico Clínico Positivo Negativo Total Positivo A B A+B Negativo C D C+D Total A+C B+D N S= 100% (A/A+C) PVP= 100%{A/(A+B)} E=100% (D/B+D) PVN= 100%{D/(C+D)} EE= 100%{(A+D)/N}
40 CONTROL CALIDAD EN HERRAMIENTAS MOLECULARES
41 FLUJO DE TRABAJO EN EL USO DE HERRAMIENTAS MOLECULARES Pre analítico Analítico Post analítico Toma de muestra Extracción ADN/ ARN Almacenamiento Preparación reacción PCR Amplificación Detección Informe del resultado Informe del resultado Interpretación
42 DESAFÍOS DEL CONTROL CALIDAD EN MÉTODOS MOLECULARES Nuevas tecnologías y de rápida evolución Altas expectativas de precisión en pruebas génicas Falta de materiales de control de calidad y de calibradores estandarizados Posible contaminación de muestras, equipos y aerosoles Presencia de inhibidores de amplificación etc. Basic QC Practice,3er edicion. Westgard
43 INCORPORACIÓN DE NUEVO ENSAYO MOLECULAR POR DONDE EMPIEZO? Revisar bibliografía disponible Establecer la población a la que se le realizara la prueba Seleccionar metodología apropiada para la enfermedad o condición a evaluar Establecer las especificaciones analíticas y determinar el procedimiento de control de calidad Implicancias del ensayo y limitaciones Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and Conditions CDC. MMWR June 12, 2009
44 INCORPORACIÓN NUEVO ENSAYO MOLECULAR Validación/ Verificación analítica Validación clínica
45 CONTROL DE CALIDAD :DISEÑADO PARA CONTROLAR Integridad de la muestra (DNA, RNA) Preparación de la muestra, amplificación, detección. Calibradores y controles Documentación, Documentación, interpretación e informe interpretación informe
46 ETAPA PRE ANALÍTICA SOLICITUD DEL TEST- TIPO Y TOMA DE MUESTRA-TRANSPORTE PLANILLAS: INFORMACIÓN PACIENTE O CONSENTIMIENTO PARA TEST GENÉTICOS TOMA DE MUESTRA: TUBOS, MEDIOS DE TRANSPORTE, HISOPO. ALMACENAMIENTO HASTA EL PROCESADO (SEPARACIÓN DE PLASMA) TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA: TEMPERATURA Y CONDICIONES PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: TEMPERATURA Y VELOCIDAD DE CENTRIFUGADO Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and Conditions CDC. MMWR June 12, 2009
47 ETAPA ANALÍTICA PROCESAMIENTO DE MUESTRAS- EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS, PREPARACIÓN Y EVALUACIÓN;- REACCIÓN ENZIMÁTICA O AMPLIFICACIÓN - DETECCIÓN DE ANALITOS - REGISTRO DE RESULTADOS CONTROL AMPLIFICACIÓN: CONTROL POSITIVO, NEGATIVO Y CUANTIFICADOS (DOS CONCENTRACIONES) PARA TEST CUANTITATIVOS CONTROL DE EXTRACCIÓN ÁCIDOS NUCLEICOS CONTROL DE INHIBICIÓN: CONTROL INTERNO CONTROL DE CONTAMINACIÓN O DE REACTIVOS CONTROL DE INSTRUMENTAL Eileen Burd. Clin Microbiol Rev.23 (3)
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49 FALSOS NEGATIVOS/ POSITIVOS FALSOS NEGATIVO TOMA DE MUESTRA Y/O CONSERVACIÓN INADECUADA FALLA EN LA EXTRACCIÓN / AMPLIFICACIÓN : CONTROL INTERNO PROBLEMAS TÉCNICOS: REACTIVOS O INSTRUMENTOS FALSOS POSITIVO CONTAMINACIÓN: CONTROL BLANCO DE REACTIVOS Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and Conditions CDC. MMWR June 12, 2009
50 ETAPA ANALÍTICA FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS, REACTIVOS Y PERSONAL Objetivo: minimizar la contaminación de reactivos y de las muestras
51 ETAPA ANALÍTICA FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS, REACTIVOS Y PERSONAL
52 Etapa analítica A M P L I C O N E S
53 ETAPA POST ANALÍTICA INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO INFORME DE RESULTADOS TIEMPO DE ENTREGA DEL RESULTADO REGISTRO DE RESULTADOS CRÍTICOS NUEVAS MUTACIONES DETECTADAS
54 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
55 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO DEFINICIÓN ISO SISTEMA QUE CONTROLA OBJETIVAMENTE LOS RESULTADOS DE LABORATORIO POR MEDIO DE UNA AGENCIA EXTERNA, INCLUYENDO LA COMPARACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL LABORATORIO A INTERVALOS CON LOS DE OTROS LABORATORIOS, SIENDO SU MAYOR OBJETIVO EL ESTABLECIMIENTO DE LA VERACIDAD
56 UN CONTROL DE CALIDAD EXTERNO EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE LA METODOLOGÍA HERRAMIENTA DE EDUCACIÓN CONTINUA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO ANALÍTICO Y SU RELACIÓN CON LA CLÍNICA SOPORTE PARA EL CONTROL DE CALIDAD INTERNO VALIDACIÓN DE RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
57 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO TIPOS TIPO 1 DISEÑADO PARA INFORMAR A TERCEROS EL DESEMPEÑO DE LABORATORIOS : AUTORIDADES, ORGANISMOS DE ACREDITACIÓN, SEGURIDAD SOCIAL, ETC. TIPO 2 DISEÑADO PARA REPORTAR DESEMPEÑO ANALÍTICO A LOS PARTICIPANTES TIPO 3 DISEÑADO PARA RESPALDAR SOLUCIONES DE PROBLEMAS EN LOS LABORATORIOS. TIPO 4 DISEÑADOS PARA EVALUAR MÉTODOS DE MEDICIÓN Y APARATOS IVDS DIAPOSITIVA Dra. Silvia Quiroga
58 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO OBJETIVOS ESTIMULAR LA FILOSOFÍA Y PRÁCTICA DEL CONTROL DE CALIDAD RESPALDAR LA CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOS DE LOS LABORATORIOS CON UNA EVALUACIÓN INDEPENDIENTE MEJORAR EL CONSENSO ENTRE LABORATORIOS CONTROLAR METODOLOGÍAS Y EQUIPOS DISPONIBLES COLABORAR EN LOS PROCESOS DE ACREDITACIÓN / CERTIFICACIÓN DE LOS LABORATORIOS VALIDAR LOS RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
59 OBJETIVOS DE CONTROL DE CALIDAD EXTERNO PARA ENSAYOS DE BANCO DE SANGRE DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE CONTROL DEL DESEMPEÑO DESEMPEÑO DEL MÉTODO HERRAMIENTAS MUESTRAS ADECUADAS? DISEÑO DEL ESQUEMA EVALUACIÓN APROPIADA SEGUIMIENTO COMUNICACIÓN CON LOS PARTICIPANTES
60 EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE UN MÉTODO INCLUYE REACTIVOS, CALIBRADOR Y EQUIPO ASPECTOS: TRAZABILIDAD, ESPECIFICIDAD, RANGO DINAMICO, LÍMITE DE DETECCIÓN, LIMITE DE CUANTIFICACIÓN INTERFERENCIAS, PRECISIÓN CONTROL DE CALIDAD DEBE CREAR GRUPOS HOMOGÉNEOS DE USUARIOS
61 DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE DESEMPEÑO DE LOS LABORATORIOS PARTICIPANTES VARIACIÓN INTRA LABORATORIO VARIACIÓN INTER LABORATORIO RELACIONES ENTRE PROCEDIMIENTOS DE RESULTADOS ANALÍTICOS Y: procedimientos analíticos adecuados reactivos comerciales instrumentos analíticos constituyentes del material de control de calidad
62 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO EDUCATIVO EL ORGANIZADOR EL OBJETIVO DEL CC DEBE SER DELINEADO ANTES DE COMENZAR LA RONDA Y PREPARAR LAS MUESTRAS LAS MUESTRAS DEBEN DAR INFORMACIÓN CORRECTA Y SER APROPIADAS PARA EL OBJETIVO LOS ORGANIZADORES DEL CC DEBEN BUSCAR EL ORIGEN DE RESULTADOS ABERRANTES Y ENCONTRAR EL REMEDIO APROPIADO
63 OBJETIVOS DEL PROGRAMA DE CC MONITOREO DE LOS PARTICIPANTES, SIN ESPECIFICAR LA CALIDAD ESPERADA COMPARACIÓN ENTRE LOS DISTINTOS GRUPOS COMPARACIÓN ENTRE DISTINTOS MÉTODOS EVALUACIÓN DE FACTORES DE CALIDAD
64 CUALES SON LAS DESVENTAJAS PARA REALIZAR UN CCE 1- LAS MUESTRAS A EVALUAR DEBEN PREPARASE CON UN ESTANDAR INTERNACIONAL 2- DISTINTOS TIPOS DE HERRAMIENTAS MOLECULARES 3- DNA ES MAS ACCESIBLE QUE RNA 4- NO EXISTEN MÉTODOS DE REFERENCIA
65 DONAR SANGRE NO ES DOLOROSO, NECESITARLA Y NO TENERLA SÍ GRACIAS
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