DIPLOMADO DE CROMATOGRAFIA

Transcripción

1 DIPLOMADO DE CROMATOGRAFIA Objetivos 1.-Brindar elementos teórico-prácticos de la cromatografía partiendo desde los principios fundamentales hasta la aplicación de las técnicas cualitativas y cuantitativas. 2.- Este diplomado permitirá a los participantes conocer, actualizar y fortalecer sus conocimientos en la cromatografía haciendo énfasis en la cromatografía HPLC. 3.- El contenido del programa permitirá a los participantes realizar prácticas de cromatografía, Cromatografía HPLC con aplicaciones en el análisis cualitativo, cuantitativo y purificación de analitos. Equipos de ultima generación. Alcance El Diplomado está dirigido a profesores, profesionales, estudiantes de pregrado y postgrado de Farmacia, Química, Biología, Medicina y carreras afines, técnicos químicos y personal operativo de la industria que utilizan la técnica de HPLC con aplicaciones en quimica analítica, control de calidad e investigación y desarrollo. Descripción general El diplomado trata los aspectos teórico -prácticos de la cromatografía haciendo énfasis en cromatografía HPLC, Cromatografía de Gases y espectrometría de masas con un componente práctico enfocado a la cromatografía HPLC. Temario 1 Sesión (8h) Introducción: Separaciones cromatográficas, Equilibrios heterogéneos: Extracción liquidolíquido. Historia de la cromatografía. Descripción general, clasificación de los métodos cromatográficos. Aspectos instrumentales de la cromatografía: el cromatograma, relación entre tiempo de retención y coeficiente de reparto. Eficacia de la separación: resolución, difusión, factores que influyen en la resolución, ensanchamiento de bandas y eficiencia de la columna. Ecuación de Van Deemter. Desarrollos cromatográficos. Cromatografía en

2 columna abierta. Introducción. Columnas y empaquetamiento. Aplicación de la muestra y Elución. Cromatografía Flash. Cromatografía plana. Cromatografía en capa delgada. Consideraciones teóricas. Fases estacionarias. Fase móvil. Aplicación de la muestra. Sistemas mixtos. Desarrollos en CCD. Detección. CCD preparativa. CCD de alta resolución. Cromatografía en papel. Consideraciones teóricas. Preparación de la muestra. Fase estacionaria. Fase móvil. Equilibrio. Aplicación de la muestra. Detección. Identificación. Cuantificación. Aplicaciones. Electroforesis. Consideraciones teóricas. Técnicas de electroforesis. Electroforesis plana. Electroforesis capilar. Instrumentación. Teoría y principios. Segunda sesión 8h Primera Sesión Práctica.- Cuantificación del contenido de un analítico en una muestra problema utilizando los métodos estándar interno. Adición de estándar. Tercera sesión 8h Análisis y discusión de resultados de la primera práctica. Cromatografía de Gases. Consideraciones teóricas. Cromatografía Gas-Sólido. Cromatografía Gas-Líquido. Parámetros cromatográficos. Resolución. Factor de selectividad. Eficiencia. Número de separación. Asimetría de pico. Ancho de pico Instrumentación. Fase móvil. Clasificación y propiedades de los Gases. Sistemas de Inyección. Preparación de muestras para análisis por CG: análisis estáticos (SHE) análisis dinámico (MHE). Derivatización. Inyectores automáticos. Fase estacionaria. Columnas empacadas. Columnas capilares. Temperatura de columna. Detección. Consideraciones teóricas. Factores de respuesta. Detector de ionización de llama. Detector de captura de electrones. Detector de conductividad térmica. Detector de Fósforo y Nitrógeno.

3 Cromatografía de gases de alta velocidad, sistemas miniaturizados. Aplicaciones de la cromatografía de gases. Cuarta sesión 8h Cuantificación. Exactitud. Precisión. Linealidad. Limite de detección. Limite de cuantificación. Media de de la señal. Ruido. Altura del pico. Área del pico. Altura Vs área del pico. Métodos de cuantificación. Normalización del área del pico. Estándar Externo. Estándar interno. Adición de estándar. Taller teórico de métodos cuantitativos. Errores en la cuantificación. Análisis de trazas. Cromatografía Liquida. Qué es HPLC? Introducción, reseña histórica. Métodos de separación cromatográficos: fase reversa (RP), fase Normal (NP), fase reversa no acuosa (NARP), Interacción hidrofílica (HILIC), Intercambio iónico (IEC), Par iónico (IPC), Exclusión por tamaño (SEC), afinidad, cromatografía Quiral. Parámetros Cromatográficos. Retención. Eficiencia de columna. Ancho de pico. Efectos de la temperatura y difusión. Quinta sesión 8h Instrumentación HPLC. Equipos modulares. Equipos compactos. Reservorios. Tuberías. Desgasificadores. Formadores de gradiente. Bombas, test de mantenimiento: test del gradiente lineal y por pasos, test de proporcionalidad de las válvulas. Sistemas de inyección. Horno de la columna. Detectores. Propiedades de los detectores. Detección UV. Arreglo de diodos. Detectores universales. Detectores de fluorescencia. Detección electroquímica. Inducción manejo de cromatógrafos HPLC de última generación. Sexta sesión 8h.

4 -Segunda Sesión Práctica: Purificación de muestras por extracción en fase sólida-fase reserva utilizando gradientes de concentración y caracterización de los productos purificados por HPLC-PR Séptima sesión 8h Discusión y análisis de resultados de la Segunda practica. Columnas para HPLC. Materiales de soporte, partículas y monolitos: soportes de sílice, soportes poliméricos, soportes inorgánicos. Fases estacionarias: enlazadas, funcionalización. Selectividad de la columna. Modelo de la sustracción hidrofóbica. Selección de columnas equivalentes u ortogonales. Monitoreo de la reproducibilidad de las columnas. Cuidados con las columnas. Moléculas neutras. Cromatografía en fase reversa (RP). Mecanismo de retención en Cromatografía en fase reversa, polaridad y temperatura. Separación y selectividad como función de la fuerza del solvente (fase móvil). Optimización de variables. Cromatografía en fase reversa no acuosa (NARP). Octava sesión. 8h Análisis de moléculas iónicas. Cromatografía en fase reversa (retención como función del ph), Cromatografía de par iónico (aditivo de par iónico, concentración y naturaleza); Cromatografía de intercambio iónico. Cromatografía en fase Normal. Mecanismo de retención de la fase unida en Cromatografía en fase normal. Consideraciones teóricas. Localización de la muestra y del solvente. Fase móvil. Fuerza del solvente. Selectividad. Tipos de columna. Efectos de la temperatura. Fase móvil acuosa. Separación de compuestos no iónicos. Elección de la columna. Elección de la fase móvil. Ajustando la retención. Optimizando selectividad. CromatografÍa de interacción hidrofílica (HILIC). Novena Sesión 8h Análisis de biomoléculas (péptidos y proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos) por HPLC en fase reversa, cromatográfia de intercambio iónico, interacción hidrofóbica.

5 Cromatografía líquida multidimensional en proteómica. Cromatografía HPLC acoplada a espectrometría de masas. Espectrometría de masas. Consideraciones teóricas. Sistemas de ionización. Ionización EC, EI, API, Electro espray, MALDI, LDI, Bombardeo atómico e iónico, etc. Analizadores. Magnéticos, Cuádruplo, octapolo, Trampa de iones, Ciclotrón, Tiempo de vuelo. Detectores. Detectores de punto y de área. Teoría del Análisis de espectros de masas. Aplicaciones de la espectrometría de masas. Decima sesión 8h Separación de enantiómeros. Métodos indirectos y directos. Preparación de la muestra. Tipos de muestras. Tratamiento preliminar de muestras solidas y semisólidas. Reducción de tamaño de partícula. Secado. Filtración. Tratamiento de muestras sólidas. Métodos de extracción. Tratamiento preliminar de muestras liquidas. Extracción liquida-liquida (LLE). Aspectos teóricos y prácticos. Extracción en Fase sólida (SPE). SPE Vs LLE. SPE Vs HPLC. Aplicaciones. Instrumentación. Consideraciones prácticas. Desarrollos de métodos para SPE. Separaciones por membranas. Cromatografía multidimensional. Derivatización Onceava sesión 8h Elución Isocrática. Elución de gradiente. Aplicaciones. Análisis rutinario. Rango de retención. Elución isocrática Vs Gradiente. Selección de las mejores condiciones isocráticas. Selección de las mejores condiciones de gradiente. Rango del gradiente. Forma del gradiente. Desarrollo de un gradiente de elución. Consideraciones experimentales. Solución de problemas. Calificación de Equipos HPLC. Doceava Sesión 8h -Tercera Sesión Práctica. El objetivo de esta practica es la resolución enantiomerica de una mezcla racémica y evaluación de un medicamento en cuanto a pureza enantiomerica. Los

6 participantes trabajaran dos muestras una mezcla racémica y un medicamento comercial a la cual se le determinara la pureza enenatiomerica por cromatografía HPLC. Treceava sesión 4h Análisis de resultados de la practica 3 y clausura del diplomado. Profesores Responsables del Diplomado Javier Eduardo García C., Doctor en ciencias Químicas de la Universidad nacional de Colombia. Profesor Asociado de dedicación exclusiva del Departamento de Farmacia. Zuly Jenny Rivera Monroy, Doctora en Ciencias químicas, Universidad Nacional de Colombia, Profesor Asistente de dedicación exclusiva del Departamento de Química. Jaiver Eduardo Rosas P., Doctor en Ciencias Farmacéuticas de la Doctorado Universidad Del Pais Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea. Profesor Asociado de dedicación exclusiva del Departamento de Farmacia.