MICOLOGÍA A 2011 ASPERGILOSIS. Dra. Marisa Biasoli Centro de Referencia de Micología

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1 MICOLOGÍA A 2011 ASPERGILOSIS Dra. Marisa Biasoli Centro de Referencia de Micología

2 Son un conjunto de enfermedades producidas por hongos del género g Aspergillus Alérgicas Patogénicas Interacción del hospedero sensibilizado con Ag fúngico inmunológicamente reactivo Manifestación de base infecciosa donde los agentes causales son los conidios, en este caso de un hongo oportunista

3 CLASIFICACIÓN N DE LAS MICOSIS Micosis superficiales Micosis cutáneomucosas Piedra Pitiriasis versicolor Tiña nigra Otitis externa Dermatofitosis Onicomicosis Intertrigo blastomicético tico Candidiasis mucocutánea Queratitis Micosis subcutáneas Micetoma Esporotricosis Cromoblastomicosis Hialohifomicosis subcutánea Feohifomicosis subcutánea Sinusitis micótica

4 CLASIFICACIÓN N DE LAS MICOSIS Micosis profundas Paracoccidioidomicosis Histoplasmosis Coccidioidomicosis Criptococosis Aspergilosis Candidiasis sistémica Zigomicosis Feohifomicosis cerebral y diseminada Hialohifomicosis sistémica Infecciones diseminadas por hongos levaduriformes (Trichosporonosis, Malasseziosis, Geotricosis)

5 Las micotoxicosis,, producidas por metabolitos secundarios tóxicos t (micotoxinas)) no están n incluidas dentro de las Aspergilosis Agentes Etiológicos: - Aspergillus fumigatus - Aspergillus flavus - Aspergillus niger - Aspergillus terreus - Aspergillus nidulans

6 Hábitat natural: son hongos ambientales, se pueden aislar de cualquier sustrato que contenga materia orgánica y humedad: suelo, vegetales en descomposición, alimentos enlatados abiertos, sistemas de ventilación, n, bolsas de diálisis, pintura fresca, etc. Vía a de ingreso : inhalatoria inhalatoria,, aunque puede llegar por otras vías v como inoculación n directa a córnea (queratitis), piel (micetoma( micetoma), vía v intravenosa (drogadictos) Sitio de infección n más m s frecuente: vías respiratorias

7 Factores de virulencia en A. fumigatus: Latgé JPl, Clin Microb Rev 1999

8 Cuadros Clínicos Pulmonar No invasiva - Alérgica - Aspergiloma Invasiva -Traqueobronquitis -Aspergilosis Pulmonar Invasiva -Aspergilosis Necrotizante Crónica Extra Pulmonar SNC Cutánea Ótica Genitourinaria Oftálmica

9 Aspergilosis Pulmonar Alérgica Alveolitis extrínseca: Exposiciones reiteradas con altas cc de Ag o conidios de Aspergillus Disnea, tos, fiebre, escalofríos os Puede haber fibrosis con daño o pulmonar irreversible Existen Ac séricos Aspergilosis Broncopulmonar Alérgica rgica: Asma Eosinofilia periférica y aumento de Ig E Reacción cutánea (+) a extractos de Aspergillus Tapones mucosos conteniendo hifas Ac séricos

10 Aspergilosis Pulmonar Alérgica Sinusitis alérgica: Pólipos nasales Tapones mucosos con eosinofilia e hifas Reacción n cutánea (+) para extractos de Aspergillus Ac séricos Aspergilosis Pulmonar no invasiva: Aspergiloma Involucra cavidades preformadas (Por TBC) Formación n de masas fúngicas f semejantes a micetomas Síntomas similares a ABPA + hemoptisis Reacción n cutánea (+) y Ac séricos

11 Aspergilosis Pulmonar Invasiva (API) Infección n oportunista Causas predisponentes -Neutropenia o N deficientes -Neoplasia, -Enf hematológicas malignas, -Transplantes, -Coticoterapia, -VIH? -Peq.. tamaño conidios Patogenia de Aspergillus -Sust inh fagocitosis y lisis de MØM y N - Invasión n de hifas del parénquima pulmonar (elastasas( elastasas) - Infarto y necrosis de tejido y vasos sanguíneos neos - Diseminación n hematógena

12 Aspergilosis Invasiva (AI) Traqueobronquitis: Frecuente en pacientes con SIDA y transplantados Disnea, tos fiebre, escalofríos os Puede evolucionar a una API o diseminarse Aspergilosis pulmonar invasiva (API) Forma grave y frecuentemente fatal Neumonitis necrotizante con invasión n de vasos sanguíneos. neos. Puede presentarse como: -Neumonía -Bronconeumonia necrotizante -Infarto hemorragico -Abscesos pulmonares Síntomas: tos, fiebre, infiltrados pulmonares, hemoptisis

13 Aspergilosis Invasiva (API) Aspergilosis Semiinvasiva Necrotizante Inflamación n del parénquima pulmonar sin invasión n de vasos sanguíneos neos Enfermos pulmonares crónicos Síntomas: tos, expectoración, fiebre, pérdida p de peso0 Localizaciones extra-pulmonares Aspergilosis del SNC Aspergilosis cutánea 1º 1 y 2º 2 Localización ótica Localización n genitourinaria Localización n oftálmica

14 Aspergilosis Invasiva (API) Aspergilosis Semiinvasiva Necrotizante Inflamación n del parénquima pulmonar sin invasión n de vasos sanguíneos neos Enfermos pulmonares crónicos Síntomas: tos, expectoración, fiebre, pérdida p de peso0 Localizaciones extra-pulmonares Aspergilosis del SNC Aspergilosis cutánea 1º 1 y 2º 2 Localización ótica Localización n genitourinaria Localización n oftálmica

15 Interaction of Aspergillus with the host A unique microbial-host interaction Frequency of aspergillosis Acute IA Subacute IA Tracheobronchitis Aspergilloma Chronic cavitary Chronic fibrosing ABPA Allergic sinusitis Frequency of aspergillosis Immune dysfunction Normal immune function. Immune hyperactivity

16 1-Muestra: 2- Examen directo ESTUDIOS MICOLÓGICOS Muestra: esputo seriado, LBA, biopsias, hemocultivos, lavados sec. nasal, punción abcesos, secresión ótica, raspado ojo, piel, etc Observación n en fresco 3- Cultivos Medios generales Medios selectivos 5- Estudios complementarios Observación n por fijación n y tinción 4- Identificación de género g y especie: Macro y Micromorfología - Detección n de Ac, - Detección Ag, - Detección ADN 6- Interpretación n e informe de los resultados

17 ESTUDIOS MICOLÓGICOS Examen directo en fresco ED en fresco con gueguén de material rinosinusal 400x

18 ESTUDIOS MICOLÓGICOS Examen directo por coloración Coloración Grocott de abceso cerebral 400x

19 ESTUDIOS MICOLÓGICOS Examen directo por coloración Coloración Grocott de abceso cerebral 400x

20 ESTUDIOS MICOLÓGICOS - Cultivos Esputo seriado,, LBA, biopsia, punción, n, etc. Hisopado de mucosa Hemocultivos Escamas de piel Sb, Sb Cl, CCS. Incubar a 28 ºC C y 37ºC, 1 mes Sb, Sb Cl Incubar a 28 ºC,, 1 semana En caldo Lisis-centrifugaci centrifugación Sb, Sb Cl, CCS. Incubar a 28 ºC y 37ºC,, 1 mes Sb, Sb Cl Incubar a 28 ºC,, 2 semanas

21 Caracterización n taxonómica del género Aspergillus

22 Características micromorfológicas de especies de Aspergillus

23 Macro y micromorfología de Aspergillus fumigatus A. fumigatus, baja frecuencia de resitencia a los azoles

24 Macro y micromorfología de Aspergillus flavus A. flavus -algunas cepas son resistentes a la anfotericina B

25 Macro y micromorfología de Aspergillus niger

26 Macromorfología de Aspergillus terreus

27 Micromorfología de Aspergillus terreus A. terreus resistente a Anf B

28 Macromorfología de Aspergillus nidulans

29 Macro y micromorfología de Aspergillus nidulans

30 Micromorfología de Aspergillus nidulans

31 La frecuencia relativa de las especies asociadas con aspergilosis invasiva es la siguiente: % de A. fumigatus, 10.5 % A. flavus, 3-77 % A. niger 1 1 % A. nidulans. Hay aproximadamente otras especies de Aspergillus que han causado la enfermedad en los seres humanos..

32 Características macro y micromorfológicas de especies de Aspergillus CARACTERISTICAS A.fumigatus A.nidulans A.flavus A.niger A.terreus Colon ia Aspecto Plano, aterciopelado, algodonoso Plano, aterciopelado Pulverulento Punteado negro Aterciopelado, flocoso Color Verde botella, blanco-gris grisáceo Verde amarillento Verde amarillento Blanco amarillento, negro Marrón amarillento Reverso Incoloro, Rojo amarillento Rojo púrpurap Incoloro, café amarillento Incoloro, amarillento Incoloro, beige Repro ducci ón asexu ada Conidióforo Vesícula Corto, liso, incoloro, 300 µm Mazo o domo Muy corto, liso, café (marrón), 600 µm Hemiesfèrica Regular, pared rugosa Esfèrica Largo, mm Globosa Regular,hialino liso Subesférica Fialides Una serie, paralelas Dos series, paralelas Una a dos series radiadas Dos series radiadas Dos series Ligeramente colunnar Conidios Globosos, equinulados, verdes Globosos, equinulados, verdes Piriformes o globosos, verde amarillentos Globosos, negros Globosos, estriados, amarronados Repro ducci ón sexua da Cleistotecios Ascosporas Células en avellana Globosos, cafè (marròn)) 130 µm Rojizas 20 µm Esclerotes Blanco o negro Otros Temperatura de desarrollo óptimo 37 a 50 ºC 30 a 37 ºC 37 ºC 37 ºC 37 ºC

33 ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias Detección n de Anticuerpos Técnicas utilizadas: - ID - CIE Antígenos utilizados: - Ag específicos de especie - Ag metabólicos Resultados de la ID: - ABPA: 4 o más m s bandas - Aspergiloma: : hasta 18 bandas - AI: 1 o ninguna banda 4 mm Ac Ag 4 mm

34 ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias Detección n de Antígenos Antígenos detectados: Ag galactomanano (GM) Anticuerpos utilizados: Ac Monoclonal de rata EBA-2 Técnica: ELISA doble sandwich Tratamiento del suero: con calor + EDTA para disociación n de inmunocomplejos y pptación de proteínas Platelia Aspergillus (Bio-rad): GM (+) : 2 pruebas consecutivas positivas. Punto de corte: 1,5 ng/ml Utilidad diagnóstica: pacientes neutropénicos nicos adultos (<100 N/mm3 >3 semanas ó <500 N/mm3 >5 semanas)

35 ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias Detección n de Metabolitos fúngicosf (1-3)-ß-D-glucano -Componente de pared celular de la mayoría a de los hongos excepto Cryptococcus neoformans y Mucorales -No existe en tej.. de mamíferos,cel feros,cel. proc.. y virus -Su eliminación n es lenta (no hay glucanasas en suero) Buen marcador de IFI -Es un marcador panfúngico ngico combinar con otras técnicas t para la identificación n a nivel de génerog Se han detectado falsos (+): tratamientos de hemodiálisis con membrana de celulosa, tratamiento con albúminas, agentes anti-cancerosos y ciertos ATB. -Existen disponibles 4 equipos comerciales: Fungitell, Fungitec G, Wako, B-G B G Star

36 ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias - Utilidad diagnóstica de (1-3) 3)-ß-D-glucano: Una prueba (+) indica un criterio microbiológico de IFI Tiene una S del 87,5%, una E de 89,6 % para la AI Desventajas: : al ser marcador panfúngico ngico debe combinarse con otras pruebas que permitan identificar la especie fúngica f infectante. La deteccion conjunta de ambos marcadores, GM y BG, realizadas en suero bisemanalmente, permite: 1-aumentar la E y el valor predictivo (+) a un 100 %; 2- predecir la evolución n en los enfermos con AI y 3- detectar los falsos positivos para ambos tests.

37 ESTUDIO MCOLÓGICO DE UN CASO MUESTRA: Punción n Nódulo N pulmonar de paciente con transplante de MO realizado hace 10 días. Examen directo en fresco (KOH 20%): Se observan filamentos tabicados hialinos Cultivos: Se obtuvo desarrollo de un hongo filamentoso en todos los tubos

38 ESTUDIO MICOLÓGICO DE UN CASO Estudio macromorfológico gico: : Se obtuvo desarrollo de colonia de color ocre, aspecto aterciopelado, acuminada, bordes radiados, de desarrollo regular a abundante

39 ESTUDIO MICOLÓGICO DE UN CASO Estudio micromorfológico de la colonia: : Se observan hifas tabicadas hialinas. Conidióforos de pared gruesa, vesículas globosas, 2 hileras de fialides, conidios pequeños, cabezas aspergilares columnares (con lupa)

40 ESTUDIO MICOLÓGICO DE UN CASO MUESTRA: Punción n Nódulo N pulmonar de paciente con transplante de MO realizado hace 10 días. d - Identificación n del hongo? - Porqué es importante la identificación n de la especie? - Repetiría a la toma de muestra? - Qué estudios complementarios realizaría? a? - si le interesa saber más m s acerca del tratamiento consulte: aspergilosis.reviberoammicol.com/

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