Título de la gráfica: Crecimiento/ No crecimiento

Transcripción

1 Resultados de la semana anterior (TSB) Título de la gráfica: # tubo TSB 1-24 Crecimiento/ No crecimiento Descripción del crecimiento

2 Resultados de la semana anterior (TSA slant) Título de la gráfica: tubo TSA slant Crecimiento/ No crecimiento Descripción del crecimiento

3 Lab #3 Técnicas de cultivos puros

4 Objetivos Diferenciar entre ciertos medios de cultivo Describir cómo preparar un medio Diferenciar las distintas técnicas de aislación: esparcido, estriado y vertido en plato Llevar a cabo un estriado del tubo de transferencia de la semana anterior Hacer una dilución de agua y vertir en platos

5 Qué contiene un medio? Aquellos requerimientos nutricionales que los microorganismos necesitan para crecer. Depende del ambiente en donde viven.

6 Algunos Requerimientos nutricionales: Carbono (C) Nitrógeno (N) Elementos no metálicos: azufre (S) y fósforo (P) Elementos metálicos: Ca ++, Na ++, K +, Cu ++, Mg ++, Mn ++, Fe +2,+3 y trazas de Zn ++ Vitaminas H 2 0

7 Factores físicos que afectan el crecimiento Temperatura ph ** ambas afectan las actividades enzimáticas Disponibilidad de oxígeno oxígeno atmosférico Formación de ATP fermentación anaerobia

8 MEDIOS DE CULTIVO Clasificación: 1. Físicamente Medio %Agar Ejemplo Líquido 0 Caldo Nutritivo Semisólido 0.5 a 1 Medio Movilidad Sólido 1.5 a 2 Agar Nutritivo 2. Químicamente Definido: Composición quím. definida (Sales) Complejo: Composición quím. difícil de definir (Peptona, Extr. levadura, etc).

9 3. Usos Líquido (caldo) Semisólido Sólido

10 3. Usos (cont) Líquido (caldo) Crecimiento de gran # microorganismos Estudios fermentación

11 3. Usos (cont) Semisólido: Crecimiento anaerobio (fermentación) Motilidad

12 3. Usos (cont) Sólido: Crecimiento superficial Cultivo puro (transferencia) Agar slant

13 Medio para el crecimiento de una bacteria fastidiosa Ejemplo de los componentes: Components Amount Function of components Beef extract 1.5 g Source of vitamins and other growth factors Yeast extract 3.0 g Source of vitamins and other growth factors Peptone 6.0 g Source of amino acids, N, S, and P Glucose 1.0 g C and energy source Agar 15.0 g Inert solidifying agent Water ph ml

14 Clasificación de medios de cultivo: A. Medio no selectivo Es un medio en el cual puede crecer una gran variedad de microorganismos; tanto G+ como G-. Ej.: Plate count Agar, Tryptic Soy Broth, Tryptic Soy Agar TSA

15 Clasificación de medios de cultivo: B. Medio Selectivo Seleciona a un grupo de microorganismos Ej.: Brain Heart Infusion (BHI) 6.5% NaCl, Crecimiento en Sal Enterococcus Lauryl Broth con Antibiotico, Microorganismos resistentes

16 Clasificación de medios de cultivo: C. Medio Diferencial No limita el crecimiento de microorganismos solo permite diferenciar a los organismos que crecieron. Importante en ambiente clínico para diagnostico de patógenos. Blood Agar Hemolisis Beta, Alfa y Gamma (observar propiedades hemolíticas)

17 Clasificación de medios de cultivo: D. Medio Selectivo Diferencial Ej. :MacConkey Agar Selectivo: Bacilos gram negativo Diferencial: Fermentadores de lactosa/no fermentadores Organismos: Escherichia, Salmonella Ej. :Bile Esculin Agar Selectivo: Sales biliares Diferencial: Hidrolizacion de Esculina Organismos: Enterococcus, Streptococcus Ej. :Mannitol Salt Agar Selectivo: Alto contenido de sal Diferencial: Fermentadores de Mannitol Organismos: Staphylococcus

18 Clasificación de medios de cultivo: E. Medio Enriquecido Posee características nutricionales específicas para estimular la producción de algún componente

19 Preparación de Medios Medios comerciales deshidratados Recipientes: Tubos y Platos de Petri Esterilización: Depende de la naturaleza del material y su estado físico!! Calor húmedo: autoclave (121º C 15 lbs. presión 15 min.) Calor seco Luz ultravioleta Óxido de etileno (gas) Filtración: Filtros bacteriológicos (0.1 a 0.22 µm, 0.45 µm)

20 Dilución

21 Dilución Permite el aislamiento de colonias discretas que pueden ser subcultivadas en cultivos puros. Técnicas a. Estriado en plato b. Vertido en plato c. Esparcido en plato A. B. C.

22 ESTRIADO EN PLATO

23 Estriado en plato (Resultado)

24 Esparcido en plato

25 Dilusiones En Serie

26 Vertido en Plato

27 Recuento de Bacterias Unidades Formadoras de Colonias (UFC) UFC/ml = # de colonias x 1/ factor de dilución Consideraciones: Contar platos con 25 a 250 colonias Platos con <25 reportar como TFTC Platos con >250 reportar como TNTC

28 Parte Experimental

29 A. Estriado en Placas Con una aguja de inocular loop tome una muestra del tubo de la bacteria que transfirió la semana pasada (TSA slant) y transfiera al plato de TSA provisto. Repita este procedimiento con el tubo del desconocido. Solo tomará la muestra del tubo al inicio del estriado

30 Recuerde utilizar las técnicas acépticas necesarias para que evite contaminación de la muestra. 1 Desconocido!!! Esterilice la aguja antes de tocar la muestra y después de pasarla por el medio

31 B. Esparcido en Plato La mitad del grupo se lavará las manos con agua y jabón la otra mitad no. Todos los estudiantes se enjuagarán las manos en los envases previamente identificados (los que tienen las manos lavadas en uno y la otra mitad del grupo en el otro) Se hará una dilución en serie utlizando esa agua.

32 Esparcido en plato Grupo con manos lavadas Grupo con manos sin lavar Envase con Agua Envase con Agua 0.1 ml 1 ml 1 ml 0.1 ml 1 ml 1 ml ml ml 0.1 ml 0.1 ml

33 Dónde crees que vas a ver más crecimiento de bacterias? Porqué?

34 Recapitulación Cómo se clasifican los medios? Cuáles son los tipos de medio? Cuáles son los métodos de esterilización más comunes? Cuáles son las técnicas de dilusión en serie?

35 Preguntas