Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos

Transcripción

1 Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos Sesión nº 3 Muestras Utilizadas durante el Curso M. Querci, N. Foti WORLD HEALTH ORGANIZATION REGIONAL OFFICE FOR EUROPE WELTGESUNDHEITSORGANISATION REGIONALBÜRO FÜR EUROPA ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE ORGANIZACIÓN BUREAU REGIONAL MUNDIAL DE LA L'EUROPE SALUD OFICINA REGIONAL PARA EUROPA ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЕВРОПЕЙСКОЕ РЕГИОНАЛЬНОЕ БЮРО

2 Muestras Utilizadas durante el Curso 2 Índice Sesión nº 3 Muestras Utilizadas durante el Curso Muestras utilizadas durante el curso 3 Material de Referencia Certificado 3 Composición de las materias primas y procesadas distribuidas entre los participantes 4 Lista de muestras distribuidas durante el curso. 6 Resultados previstos por PCR 6 Bibliografía 7

3 Muestras Utilizadas durante el Curso 3 Muestras utilizadas durante el curso En el curso se ensayarán distintos métodos para detectar la presencia de maíz MON810 y soja Roundup Ready en diversas materias. Con este fin se utilizarán mezclas de maíces y sojas no GM y GM (MON810 en el caso del maíz y Roundup Ready en el de la soja) respectivamente, en distintos grados de concentración. Se utilizarán dos tipos de materiales: materiales de referencia certificados diversas materias primas y procesadas distribuidas entre los participantes. Material de referencia certificado Las materias primas vegetales utilizadas en el curso son los materiales de referencia certificados IRMM-410S (soja Roundup Ready) e IRMM-413 (maíz MON810). El IRMM-410S y el IRMM-413 consisten en dos series de CRM de polvo desecado de soja y maíz, respectivamente, con distintas fracciones de masa (0; 0,1; 0,5; 1; 2; y 5 %) de polvo desecado preparado a partir de soja Roundup Ready y maíz MON810 modificados genéticamente. Los CRM se produjeron en el Instituto de Materiales y Medidas de Referencia ( para Fluka Chemie AG (Buchs, Suiza) en el marco de la colaboración con el Instituto de la Salud y la Protección de los Consumidores ( del Centro Común de Investigación de la Comisión Europea (Ispra, Italia) (Trapmann et al., 2002 y 2001) y están concebidos para la validación de métodos de detección de alimentos modificados genéticamente. Dado que la cuantificación de ADN y/o proteínas puede variar en función de las variedades, las conclusiones cuantitativas de las mediciones de muestras desconocidas deben extraerse con las debidas precauciones. El polvo de soja desecado con soja GM Roundup Ready se ha elaborado a partir de semillas completas de una línea de soja no modificada (Asgrow A1900) y la soja modificada genéticamente Roundup Ready (línea Asgrow AG5602 RR). El polvo de maíz desecado con maíz GM MON810 se ha elaborado a partir de granos completos del cultivar no modificado DK512 y el cultivar MON810 DK513.

4 Muestras Utilizadas durante el Curso 4 Composición de las materias primas y procesadas distribuidas entre los participantes Se comprobarán distintas materias: galletas, leche en polvo, migas de aperitivos secos y harina. Materias primas Mezcla de harinas. A fin de obtener un 0,5 % de cada OGM (peso en seco total), se puso soja RR (IRMM-410S) al 1 % junto a harina con un 1 % de MON810 (IRMM- 413). Se pesaron 50 GM de ambas harinas y se introdujeron directamente en tubos de reacción preparados para la extracción de ADN. La harina con un 1 % de MON810 es el material de referencia certificado IRMM-413 (con un 1 % de maíz MON810). Migas de aperitivos secos La muestra se extrajo de un programa de comprobación de la idoneidad de OGM (Programa GeMMA, ronda 06, material de ensayo GMO-06B). El material se preparó a partir de aperitivos secos a base de soja no modificada genéticamente disponibles en el mercado y aperitivos con soja modificada genéticamente. Migas de aperitivos secos g de aperitivos a base de soja no modificada genéticamente y 28 g de aperitivos con soja modificada genéticamente Antes de proceder a la mezcla, cada material se molió y tamizó hasta obtener un conjunto de migas homogéneo, tras lo cual se mezclaron en un tambor durante una noche. Por último, los materiales se mezclaron durante aproximadamente una hora utilizando un mezclador giratorio y se guardaron a 20 C. Galletas El material se produjo en el Instituto de la Salud y la Protección de los Consumidores del CCI y se utilizó para validar un método de PCR para soja Roundup Ready y maíz Maximizer (Bt-176) en fracciones de alimentos transformados (Lipp et al., 2001). Las harinas desecadas de soja y maíz se pesaron y mezclaron con los otros ingredientes en la proporción indicada a continuación.

5 Muestras Utilizadas durante el Curso 5 Galletas # g de maíz (0 % OGM), 250 g de soja (0 % OGM), 300 g de trigo, 200 g de azúcar, 100 g de mantequilla, 10 g de sal, 16 g de levadura artificial con aroma de vainilla y 2 huevos Los ingredientes se mezclaron minuciosamente con 600 ml de agua y la masa se homogeneizó, se extendió uniformemente en un bandeja de horno y se coció en un horno precalentado a 180 ºC con recirculación de aire durante 10 min. A continuación, el material se retiró del horno, se cubrió para evitar su contaminación y se dejó enfriar a temperatura ambiente. Posteriormente se guardó a 20 C. Leche de soja en polvo La muestra se extrajo de la ronda 05 del Programa GeMMA de comprobación de la idoneidad g de leche de soja en polvo de EE.UU. se mezclaron en un tambor durante una noche con 300 g de aislado de proteínas de soja Roundup Ready, tras lo cual se repartieron distintas submuestras (10 g) en frascos de plástico taponados a rosca y se guardaron a temperatura ambiente antes de su distribución. Galletas MON810 Este material se produjo en la Unidad de biotecnología y OGM del CCI. La harina desecada de maíz se pesó y mezcló con los otros ingredientes en la proporción indicada a continuación. Galletas MON g de harina de trigo, 100 g de harina de maíz* (2 * % OGM), 150 g de azúcar, 100 g de mantequilla y 1 huevo. *La harina de maíz con un 2 % de MON810 se obtuvo añadiendo harina de maíz silvestre a harina MON810 al 100 % y mezclándolas durante 30 minutos. Los ingredientes se mezclaron minuciosamente, se extendieron uniformemente en un bandeja de horno y se cocieron en un horno precalentado a 180 ºC con recirculación de aire durante10 min. A continuación, el material se retiró del horno, se cubrió para evitar su contaminación y se dejó enfriar a temperatura ambiente. Posteriormente se guardaron a 4 C hasta su utilización.

6 Muestras Utilizadas durante el Curso 6 Lista de muestras distribuidas durante el curso. Muestra Características % de OGM (ingrediente específico) Soja RR Maíz MON810 Galletas # 1 0 % 0 % Mezcla de harinas 1 % 1 % Harina MON810-1 % Migas de aperitivos secos 2,2 % - Leche de soja en polvo 8,9 % - Galletas MON810-2 % Resultados previstos por PCR MUESTRA zeína lectina 35S nos E35S/hsp7 0(b) CTP/EPSPS IRMM- 410S-0 (0 %) IRMM- 410S-1 (0,1 %) IRMM- 410S-2 (0,5 %) IRMM- 410S-3 (1 %) IRMM- 410S-4 (2 %) IRMM (0 %) IRMM (0,1 %) IRMM (0,5 %) IRMM (1 %) IRMM (2 %) Galletas # Mezcla de harinas Harina MON Migas de aperitivos secos Leche de soja en polvo Galletas MON

7 Muestras Utilizadas durante el Curso 7 Bibliografía Lipp, M., Bluth, A., Eyquem, F., Kruse, L., Schimmel, H., Van den Eede, G. y Anklam, E. (2001). Validation of a method based on polymerase chain reaction for the detection of genetically modified organisms in various processed foodstuffs. European Food Research Technology 212, Lipp, M., Brodmann, P., Pietsch, K., Pauwels, J. y Anklam, E. (1999). IUPAC collaborative trial study of a method to detect genetically modified soy beans and maize in dried powder. Journal of AOAC International 82, Trapmann. S., Catalani, P., Conneely, P., Corbisier, P., Gancberg, D., Hannes, E., Le Guern, L., Kramer, G. N., Prokisch, J., Robouch, P., Schimmel, H., Zeleny, R., Pauwels, J., Van den Eede, G., Weighardt, F., Mazzara, M. y Anklam, E. (2002). The certification of reference materials of dry-mixed soya powder with different mass fractions of Roundup Ready soya. Certified Reference Materials IRMM- 410S. ( chements/erm-bf410_report.pdf). (Último acceso enero de 2010) Trapmann, S., Le Guern, L., Prokisch, J., Robouch, P., Kramer, G. N., Schimmel, H., Pauwels, J., Querci, M., Van den Eede, G. y Anklam, E. (2001). The certification of reference materials of dry-mixed maize powder with different mass fractions of MON810 maize. Certified Reference Materials IRMM-413. ( chements/erm-bf413_report.pdf) (Último acceso enero de 2010) GeMMA Scheme-GMO analysis Round 06. GMO Proficiency Testing (octubre de 2001). Report N. GMO 06. GeMMA Scheme-GMO analysis Round 05. GMO Proficiency Testing, (octubre de 2001). Report N. GMO 05.