Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios. Escalante Guzmán, Rocío Miluska. 8. ANEXOS

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1 8. ANEXOS 8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE CULTIVO CALDO ACETATO MINERAL Fosfato ácido di sódico dodecahidratado. Fosfato diácido monopotásico Sulfato de Magnesio heptahidratado Cloruro de Amonio Acetato de Sodio Bicloruro de Calcio dihidratado Solución de elementos traza Carbonato de Sodio al 0.05% Agua destilada ph final Esterilización a 121 ºC por 15 min g g 0.05 g 0.25 g g g 0.75 ml 0.11 ml 250 ml 7.0 MEDIO AUXILIAR ( AUX MEDIUM) Sulfato amoníaco Base Aminoácidos. Vitaminas y sustancias nutritivas Tampón fosfato Agar ph final Esterilización a 121 ºC por 15 min. 2 g 82.8 mg 250 mg 35.9 g 0.04 M ph= ml 1.5 g

2 CETRIMIDE AGAR Peptona de gelatina Cloruro de Magnesio Sulfato potásico N-cetil-N,N,N,-trimetilamoniobromuro(Cetrimide) Agar-agar Glicerina Petróleo al 1 % Esterilización a 121 ºC por 15 min. AGAR KING-B Peptona de carne Glicerol Fosfato diácido de Potasio Sulfato de Magnesio Agar Agua destilada ph final 20 g 1.4 g 10 g 0.3 g 13 g 10 ml 4 g 2 g 0.3 g 0.3 g 3 g 200 ml 7.0 Esterilización a 121 ºC por 15 min. MEDIO MINERAL Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio Fosfato diácido de Potasio Sulfato de Magnesio heptahidratado Fosfato ácido di sódico Nitrato de Amonio Agua destilada Petróleo crudo ph final Esterilización a 121ºC por 15 minutos. 24 g 0,7 g 2,0 g 1,0 g 3,0 g 1,0 g 1000 ml 10 ml 7.0

3 MEDIO MÍNIMO DE GOLDMAN Fosfato ácido di potásico Fosfato diácido de Potasio Sulfato de Magnesio Sulfato diamónico Etanol Agua destilada. ph final Esterilización a 121ºC por 15 minutos. Extracto de levaduras al 3%. 18 g 6 g 0.02 g 4 g 20 ml 1000 ml 7.0 MEDIO PALLERONI Fosfato ácido di sódico Fosfato diácido de Potasio Cloruro de Sodio Cloruro de Amonio. Sulfato de Magnesio heptahidratado Citrato amónico férrico Cloruro de Calcio Agua destilada ph final 9.37 g g 1.7 g 0.2 g 0.1 g 0.01 g g 200 ml 6.8 Esterilización a 121 ºC por 15 min., excepto el Citrato amónico férrico y Cloruro de Calcio el cual se esteriliza por filtración y se adiciona en condiciones estériles a partir de una solución concentrada.

4 8.2 CARACTERÍSTICAS DEL DESTILADO DE CRUDO DE PETRÓLEO A 200 ºC CUADRO Nº 01 Nº Tiempo de retención (T R) Componentes n-pentano n-hexano n-heptano 2 metil pentano 3 metil hexano 1,1,2trimetil ciclohexano 1-hexeno 2 metil hexano 2 etil hexano 2 metil decano 4 metil decano n-nonano 2 metil undecano 3,5 dimetil octano 2 metil undecano dodecano n-tridecano n-tetradecano tetradecano 2 metil tridecano n-pentadecano pentadecano n-hexadecano n-heptadecano n-octadecano octadecano n-eicosano n-heneicosano n-dodocosano n-pentacosano n-octacosano n-nonacosano n-triacontano n-dotriacontano Peso molecular (PM) Fórmula % C5H12 C6H14 C7H16 C6H14 C7H14 C9H28 C6H12 C7H16 C8H18 C11H24 C12H26 C9H20 C12H26 C10H22 C12H26 C12H26 C13H28 C14H30 C14H30 C14H30 C15H32 C15H32 C16H34 C17H36 C18H38 C18H38 C20H42 C21H44 C22H46 C25H52 C28H58 C29H60 C30H62 C32H

5 INTERPRETACIÓN: Saturados aciclicos Saturados cíclico Insaturados-olefínico Aromáticos 95.77% (37.38% parafínico) PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS GRAVEDAD API A 60º F 19.0 DESTILACIÓN Hasta 200 ºC Residuo pesado %DESTILADO CONDICIONES CROMATÓGRAFO DE GASES: GC/MS Columna: T. Horno: Injector:. Vol.inj: Split: Gas arrastre: Medianamente polar SUPELCO ºC (8,5 ); 45 ºC/min hasta 150 ºC (1 ) 8 ºC/min hasta 280 ºC (12 ) 80 ºC (0,2 ); 50 ºC/min hasta 100 ºC (5 ); 50 ºC/min hasta 300 ºC hasta el final de corrida. 1,5 µl [50:1] Helio 20.8psi (1,73 ml/min) NOTAS: TR: Tiempo de retención, secuencia en que se separan los componentes en el cromatograma. PM: Peso molecular

6 Gráfico Nº 01:Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo. Gráfico Nº 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo. g Grafico N 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo.

7 8.3 CARACTERISTICAS DEL SUELO DE CULTIVO. CUADRO Nº 02 Conductivida d (C.E) Ds/m P.S* Análisis Mecánico ph Carbonat o de Calcio CaCO3 Arena % Limo % Arcill a % Franco Arenoso Materia Orgánica (M.O) Fósforo P Óxido dipotásic o K 2 O Textura P.S % % ppm kg/ha (0.005% ) P.S*: Pasta Saturada (0.49%) Cationes Cambiables Cationes intercambiabl es (CIC) Cmol (+)/kg (0.038% ) Ca++ Mg++ K+ Na 3.20 (0.0077%) 0.46 (0.0017%) 0.17 (0.0004%)

8 INTERPRETACIÓN: CONDUCTIVIDAD : Muy ligeramente salino: Ligeramente salino: Moderadamente salino: Fuertemente salino: Extremadamente salino: MATERIA ORGANICA (M.O) Bajo: Medio: Alto: CALCAREO TOTAL CaCO3% Bajo: Medio: Alto: FÓSFORO P (ppm) Bajo: Medio: Alto: POTASIO K 2O (kg/ha) Bajo: Medio: Alto: REACCION DEL SUELO (ph) Fuertemente ácido: Moderadamente ácido: Ligeramente ácido: Neutro: Ligeramente alcalino: Moderadamente alcalino: EQUIVALENCIAS 1 mmhos/cm = 1 cmol (+) kg = C.E. (sales). Según respuesta de los cultivos (ds/m) < >16 < 2% 2-4% >4% < 1% 1-5% > 5% < 7% 7-14% >14 % < > ds/m 1 me/100g

9 8.4 BIODEGRADACIÓN DE CRUDO EN TERRARIOS FOTO Nº 01 CONSORCIO BACTERIANO EXÓGENO NATIVO CONSORCIO BACTERIANO CONTROL ABIÓTICO

10 8.5 DETERMINACIÓN DE LA REGRESIÓN MÚLTIPLE POR PASOS CON EL PROGRAMA SPSS 9.0 WINDOWS. Gráfico Nº 02. Ingreso de datos al SPSS.

11 Gráfico Nº 03. Selección de método de regresión lineal múltiple

12 Gráfico Nº 04.Selección de variables y del método de regresión lineal múltiple: Stepwise.

13 8.6 ESCALA TURBIDIMÉTRICA MC. FARLAND Tubo Cloruro de Ácido Millones de Bario (1%) sulfúrico(1%) m.o/ml Fuente: Microbiología de laboratorio (Bradshaw, 1976)

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