RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT±

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1 RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT± Inordertopromotepubliceducationandpublicsafety,equaljusticeforal, abeterinformedcitizenry,theruleoflaw,worldtradeandworldpeace, thislegaldocumentisherebymadeavailableonanoncommercialbasis,asit istherightofalhumanstoknowandspeakthelawsthatgovernthem. NTE INEN 1703 (1990) (Spanish): Alimentos zootécnicos. Pasta o harina de algodón. Determinación del gosipol libre y total

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3 CDU: : AL Norma Técnica Ecuatoriana Obligatoria ALIMENTOS ZOOTECNICOS. PASTA O HARINA DE ALGODÓN. DETERMINACIÓN DE GOSIPOL LIBRE Y TOTAL INEN OBJETO Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN Casilla Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro Quito-Ecuador Prohibida la reproducción 1.1 Esta norma establece el método de ensayo para la determinación del contenido de gosipol libre y total, sustancias químicamente relacionadas con los alimentos para animales. 2. ALCANCE 2.2 Este método se aplica para semilla de algodón, harina de semilla de algodón, pasta (torta) y alimentos compuestos para animales que contienen en su composición estas sustancias. El límite de detección para gosipol libre es 20 mg/kg y para gosipol total es de 50 mg/kg. 3. FUNDAMENTO 3.1 Extracción del gosipol en presencia de 3-aminopropan-1-ol, ya sea con una mezcla de 2-propanol y hexano para la determinación de gosipol libre o con dimetilformamida para la determinación de gosipol total. Conversión del gosipol en gosipol-dianilina usando anilina. Medir la absorbancia en la longitud de onda de máxima absorbancia (entre 435 y 445 nm). 4.1 Equipos de laboratorio usuales y en particular: 4. INSTRUMENTAL Agitador-mezclador, que proporcione una frecuencia rotacional de aproximadamente 35 min -1, u otro agitador Expectómetro, apropiado para hacer mediciones de longitud de onda entre 435 y 445 nm, con celdas de 10 mm de longitud de espacio óptico Balones aforados, de capacidad 25, 50 cm Matraces Erlenmeyer, de capacidad 50, 100 y 250 cm REACTIVOS 5.1 Todos los reactivos deben reconocerse como de grado analítico. El agua usada debe ser agua destilada o agua de al menos pureza equivalente. 5.2 Mezcla de 2-propanol / n- hexano, en volumen. 5.3 Solvente A. Colocar en un balón de aforo de cm 3 aproximadamente 500 cm 3 de la mezcla de 2- propanol/hexano (5.2), 2 cm 3 de 3-aminopropan-1-ol, 8 cm 3 de ácido acético glacial y 50 cm 3 de agua. Llevar a volumen con la mezcla 2-propanol/hexano. Este reactivo es estable solamente por una semana. (Continúa) -1-

4 NTE INEN Solvente B. Colocar en un balón de aforo de 100 cm 3, 2 cm 3 de 3-aminopropan-1-ol y 10 cm 3 de ácido acético glacial. Enfriar a la temperatura del cuarto y llevar a volumen con N,N-dimetilformamida. Este reactivo es estable solamente por una semana. 5.5 Anilina. Si la absorbancia determinada en la prueba en blanco excede de 0,022, destilar la anilina sobre zinc en polvo, descartar las primeras y el 10% último de las fracciones del destilado. Guardar en un frasco de vidrio oscuro perfectamente tapado, y colocar en un refrigerador (0 a 4 C). El reactivo es estable por varios meses. 6. MUESTREO 6.1 Tomar la muestra para análisis de laboratorio de acuerdo con la Norma INEN PROCEDIMIENTO 7.1 Preparación de la muestra de ensayo Preparar la muestra de ensayo de acuerdo con el método de ensayo INEN Porción de ensayo. La masa de la porción de ensayo depende del contenido de gosipol esperado. Para la determinación del gosipol libre en la semilla de algodón, harina de semilla de algodón y pasta, la masa de la porción de ensayo no debe ser mayor de 1 g; para alimentos compuestos, ésta debe ser alrededor de 5g. Para la determinación de gosipol total la masa de la porción de ensayo debe estar entre 0,5 y 5g. (Ver Nota 1) 7.3 Determinación Determinación del gosipol libre Transferí la porción de ensayo (7.2) en un matraz Erlenmeyer de 250 cm 3 y agregar perlas de vidrio para cubrir el fondo. Adicionar, por medio de una pipeta, 50 cm 3 de solvente A (5.3); tapar el matraz y mezclar, usando el agitador-mezclador (4.1.1), por 1 h. Filtrar a través de papel filtro seco y recoger el filtrado en el matraz Erlenmeyer de 100 cm 3. Durante la filtración, cubrir el embudo con un vidrio de reloj Transferir, por medio de una pipeta, idéntica porción alícuota del filtrado, para dos balones de aforo de 25 cm 3 (6.3) (C y D) que contengan 50 a 100 µg de gosipol. Si es necesario, llevar a 10 cm 3 con sol vente A (5.3). NOTA 1: La masa de la porción de ensayo debe ser lo suficientemente grande como para dar la cantidad de gosipol libre indicado en la cantidad de gosipol total indicado en , en cada porción de la alícuota del filtrado. -2- (Continua)

5 NTE INEN Llevar a volumen el contenido del balón de aforo (C) con la mezcla de 2-propanol/hexano (5.2) y mezclar. Esta solución debe usarse como la solución de referencia contra la cual la solución de ensayo será medida Transferir, por medio de una pipeta, 10 cm 3 del solvente A (5.2) dentro de cada dos balones de aforo de 25 cm 3 (E y F) Llevar a volumen el contenido del matraz E con la mezcla de 2-propanol/hexano (5.2) y mezclar. Esta solución debe usarse como la solución de referencia contra la cual la solución de ensayo será medida Adicionar 2,0 cm 3 de la anilina (5.5) a los balones de aforo D y E. Calentar por 30 minutos en un baño de agua hirviendo para desarrollar el color Enfriar a la temperatura ambiente del laboratorio, y llevar a volumen con la mezcla de 2-propanol/ hexano (5.2) mezclar y dejar en reposo por una hora Medir la absorbancia de la solución de ensayo en blanco (balón de aforo F; ) contra la solución de referencia (balón de aforo E; ) y la absorbancia de la solución de ensayo (balón de aforo D; ) contra la solución de referencia (balón de aforo C; ), usando el espectómetro (4.1.2) a la longitud de onda de máxima absorbancia (entre 435 y 445 nm) Sustraer la absorbancia de la solución de ensayo en blanco de la solución de ensayo para obtener la absorbancia corregida Determinación del gosipol total Transferir la porción de ensayo (7.2) dentro del balón de aforo de 50 cm 3 y adicione 10 cm 3 de solvente B (5.4) Transferir 10 cm 3 de solvente B (5.4) a un segundo balón de aforo de 50 cm 3 (4.1.3) Calentar los dos balones de aforo ( y ) por 30 minutos en un baño de agua hirviendo. Enfriar a la temperatura ambiente del laboratorio y llevar a volumen con la mezcla de 2- propanol/hexano (5.2). Mezclar y dejar en reposo por 10 a 15 min., luego filtrar y recolectar el filtrado en el matraz Erlenmeyer de 50 cm 3 (4.1.4) Transferir, por medio de una pipeta, 2,0 cm 3 del filtrado obtenido de la porción de ensayo, conteniendo 40 a 200µg de gosipol, dentro de cada dos balones de aforo de 25 cm 3 y 2,0 cm 3 del filtrado obtenido del segundo balón dentro de cada otros dos balones de aforo de 25 cm 3. Llevar a volumen los contenidos de los balones conteniendo la solución de ensayo y la del balón de ensayo del blanco, con la mezcla de 2-propanol/hexano (5.2). Estas soluciones podrían usarse como soluciones de referencia Adicionar 2,0 cm 3 de anilina (5.4) al remanente de ensayo y a la solución de ensayo en blanco. Calentar por 30 min. en un baño de agua hirviendo para desarrollar el color. Enfriar a la temperatura ambiente de laboratorio, llevar a volumen con la mezcla de 2-propanol/hexano (5.2), mezclar y dejar en reposo por 1 h. (Continua) -3-

6 NTE INEN Medir la absorbancia de las soluciones como lo especificado en y calcular la absorbancia corregida como lo especificado en CALCULOS 8.1 El contenido de gosipol libre y/o total, expresado en miligramos por kilogramo de producto tal cual se recibe, se calcula aplicando la siguiente ecuación: A x 1250 x 1000 a x m x V = A x 1,25 a m V 6 X10 Siendo: A = es la absorbancia corregida ( ó ); m = es la masa, en gramos, de la porción de ensayo (7.2); V = es el volumen, en cm 3, de la porción alícuota de filtrado tomado en ó ; a = es el coeficiente de absorbancia de la masa específica (62,5 cm -1. g -1.l en el caso de gosipol libre; y 60,0 cm -1. g -1. l en el caso de gosipol total). 9. ERRORES DEL METODO 9.1 La diferencia entre los resultados de las dos determinaciones llevadas acabo simultáneamente o en rápida sucesión en la misma muestra, no deberá exceder de: a) Cuando el contenido promedio de gosipol es menor de 500 mg/kg, el error relativo aceptable es de 15%. b) Cuando el contenido de gosipol se encuentra comprendido entre 500 mg/kg y 750 mg/kg, el error absoluto aceptable es de 75 mg/kg. c) Cuando el contenido promedio de gosipol es mayor de 750 mg/kg, el error relativo aceptable es de 10%. 10. INFORME DE RESULTADOS 10.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmética de las determinaciones realizadas por duplicado El reporte del ensayo deberá indicar el método empleado y el resultado obtenido. Deberá, además, mencionarse cualquier condición de operación no especificada en esta norma o considerada como opcional, así como cualquier detalle o incidente probable que pudo influenciar en el resultado El reporte del ensayo debe incluir toda la información necesaria para la completa identificación de la muestra. (Continua) -4-

7 NTE INEN APÉNDICE Z Z.1 NORMAS A CONSULTAR INEN Alimentos zootécnicos. Preparación de muestras de ensayo. Z.2 BASES DE ESTUDIO Norma International.- ISO 6866 (First edition).- Animal feeding stuffs.- Determination of free and total gossypol. International Organization for Standardization. Ginebra, Norma Colombiana.- ICONTEC 863 (1ra. edición). Semilla y torta de algodón.- Determinación del gosipol libre. Instituto Colombiano de Normas Técnicas,- Bogotá,

8 Documento: NTE INEN 1703 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA TITULO: ALIMENTOS ZOOTECNICOS. PASTA O HARINA DE ALGODÓN DETERMINACION DE GOSIPOL LIBRE Y TOTAL Código: AL ORIGINAL: Fecha de iniciación del estudio: REVISIÓN: Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo Oficialización con el Carácter de por Acuerdo No. de publicado en el Registro Oficial No. de Fecha de iniciación del estudio: Fechas de consulta pública: de a Subcomité Técnico: AL Alimentos zootécnicos Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: Integrantes del Subcomité Técnico: NOMBRES: Dr. César Narváez (Presidente) Ing. Amable Villacrés Sr. Patricio Palacios Ing. Guillermo Abad Ing. Leonardo Pérez Dr. Gilberto Tenesaca Dr. Horacio Morales INg. Alberto Espinosa (Secretario Técnico) INSTITUCIÓN REPRESENTADA: MAG PRONACA C.A. CASTOR ECUATORIANA ACEITES FAVORITA ALES C.A. BALANFARINA CENDES INEN Otros trámites: 4 Esta norma sin ningún cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, según Resolución de Consejo Directivo de y oficializada mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de publicado en el Registro Oficial No. 321 del El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de Oficializada como: OBLIGATORIA Por Acuerdo Ministerial No. 154 del Registro Oficial No. 433 del

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