Clostridium perfringens

Transcripción

1 Clostridium perfringens Introducción Cuando se lanza un producto alimentario al mercado se deben tener en cuenta varios parámetros que le otorgan calidad al producto, uno de ellos es la inocuidad. Los alimentos son la fuente principal de exposición a agentes patógenos, tanto químicos como biológicos (virus, parásitos y bacterias), a los cuales nadie es inmune. Clostridium perfringens es una especie bacteriana perteneciente a la familia Bacillaceae. Está integrada por gérmenes de forma bacilar. Aparecen aislados o en cadenas cortas. Esporulados. Son capsulados, inmóviles, aerobios estrictos y gran positivos. Reducen nitratos a nitritos. Producen SH 2. Fermentan la lactosa. Elaboran toxinas A, B, C, D y E.

2 Objetivo General: Determinar la presencia de Clostridium perfringens en muestras de alimentos.

3 Revisión Bibliográfica El género Clostridium pertenece a la Familia Bacillaceae comprende a bacilos Gram positivos, esporulados, anaeróbicos estrictos, reductores de sulfitos a sulfuros. Están ampliamente distribuidos en la naturaleza, principalmente en el suelo, aguas, tracto intestinal de humanos y de varios animales. Las más importante en la microbiología de alimentos son Clostridium perfringens y Clostridium botulinum, ya que son productoras de varias toxinas, siendo causante de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA).

4 Clostridium perfringens es la especia que con más frecuencia se aísla en las muestras clínicas, excluyendo en heces. En los alimentos se encuentra por contaminación ambiental, y solo cuando alcanza cifras altas anormales, puede ser causa de enfermedad. Enfermedad: La enfermedad provocada por esta bacteria es relativamente benigna, manifestándose con dolor abdominal agudo y diarrea profusa. El periodo de incubación es, por lo general, de 6 a 24 horas, con una media de 12 horas.

5 Materiales y Medios de Cultivo Materiales Bisturí Espátulas Gradillas Jarra de anaerobiosis o bolsas de anaerobiosis Matraz Erlenmeyer Pipetas graduadas Pinza metálica Placas Petri Tubos de ensayo Equipos Balanza Baño de agua a 45º ± 1ºC Contador de colonias Estufa de incubación a 35º ± 1ºC Refrigerador Vortex Reactivos y Medios de Cultivo Ácido Sulfanilico α naftol Agar Nitrato-Movilidad Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiacina (SPS) Agua peptonada 0,1% Caldo Tioglicolato Gaspack (Anaerocult A y Anaerocult P) Indicador de Anaerobiosis (Anaerotest) Medio Lactosa-Gelatina

6 Diagrama de Flujo 1) Recuento de Clostridium perfringens Preparar diluciones decimales de la muestra en agua peptonada 0,1% Colocar las placas en la Jarra o Bolsas de anaerobiosis, sin invertir, y agregar el Gaspack e Indicador de Anaerobiosis. Cerrar la Jarra Incubar a 35 C por 24 hr Agregar por duplicado 1 ml de cada dilución en las placas rotuladas Después de solidificar, agregar una segunda capa de 6 ml de Agar SPS para favorecer la anaerobiosis. Deje solidificar Contabilizar entre 20 y 200 colonias de tonalidad negra Adicionar 15 ml de Agar SPS, el que se encuentra en baño de agua a 45 C Homogeneizar cada placa rótandolas (sin mojar bordes) Registrar la cantidad y la dilución respectiva

7 2) Pruebas Confirmativas Si hay colonias aisladas, tomar con un asa parte del cultivo e inocularlo en un tubo con Caldo Tioglicolato Incubar a 35 C por 24 hr Anareobiosis Para obtener colonias aisladas, sembrar por agotamiento en la superficie (en el mismo medio seleccionado) Inocular mediante picadura 5 a 10 colonias en Agar Nitrato-Movilidad y en el Medio Lactosa- Gelatina Incubar a 35 C por 24 hr en anaerobiosis Aplicar una segunda capa de Agar cubriendo toda la superficie Incubar a 35 C por 48 hr

8 3) Interpretación Reducción de Nitratos a Nitritos Movilidad Presencia de color rojo, al añadir 0,5 ml de Ac. Sulfanílico y 0,2 ml de α naftol Si no hay ningún cambio de color Desarrollo difuso alejado de la línea de inoculación Solo se presenta crecimiento en la línea de inoculación

9 Fermentación de Lactosa Hidrólisis de Gelatina Se reconoce por el cambio de color de rojo a amarillo No hay ningún cambio de color El medio permanece liquido, después de colocar por 1 hora los tubos al refrigerador El medio no permanece liquido, después de colocar por 1 hora los tubos al refrigerador

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11 Bibliografía Herranz, Carmen. (2008). VI Workshop sobre Métodos Rápidos y Automatización en Microbiología Alimentaria. Madrid (España). Leotta Gerardo A. (2009). Métodos rápidos: una herramienta útil y práctica para el análisis microbiológico de los alimentos. Buenos Aires (Argentina). Calderón V. Pascual M. (2000). Microbiología Alimentaria. Metodología Analítica para Alimentos y Bebidas. 2ª Edición. Pág Silva, Del Carmen, (2006). Técnico Especialista en Laboratorio del Servicio Gallego de Salud. 1ª Edición. Pág Pascual Anderson. Mª Del Rosario, (2005). Enfermedades de Origen Alimentario. Su prevención. España. Pág. 63.