GUIA DE TRABAJOS PRÁCTICOS MICOLOGÍA

Transcripción

1 GUIA DE TRABAJOS PRÁCTICOS MICOLOGÍA Departamento de Microbiología Facultad de Medicina UBA 2009 Guía de Trabajos Prácticos

2 Observación de escamas con micelios y levaduras. Digestión con KOH 40%. Colocar una gota de KOH 40% en el centro de un portaobjetos. Agregar la muestra y cubrir con un cubreobjetos. Digerir calentando la preparación suavemente a la llama hasta el desprendimiento de burbujas. Micelio filamentoso hialino tabicado con artroconidios Candida spp. Malassezia spp. Observación de exámenes directos de levaduras con la Tinción de Giemsa. Fijar la muestra con metanol 100% 1 minuto. Inundar el extendido con Giemsa 20 minutos. Lavar el preparado con agua y dejar secar al aire. No secar al calor. Fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum Guía de Trabajos Prácticos

3 Preparación de LCR con tinta china (TCH) y observación de levaduras capsuladas. Centrifugar previamente la muestra (10 min a 3000 rpm). Colocar una gota del sedimento en un portaobjetos. Agregar una gota de TCH sobre la muestra, mezclar y cubrir con un cubreobjetos. Examinar con objetivo de 10, 20X y confirmar con 40X. Cultivo de escamas observadas en la clase 1 en tubos conteniendo los medios Saboureaud/Cloranfenicol y Lactrimel/Cloranfenicol en pico de flauta. Cryptococcus neoformans Destapar el tubo cerca del mechero y flamear la boca del mismo. Utilizar un gancho previamente flameado al rojo y enfriado. Humedecerlo en medio estéril y tomar las escamas. Realizar tres puntos de siembra desde el fondo hacia el pico sobre la superficie del medio. Volver a tapar el tubo previamente flameado. Incubar en estufa a 28ºC. Tener la precaución de trabajar siempre cerca del mechero. Guía de Trabajos Prácticos

4 Descripción de las características de las colonias de: Histoplasma capsulatum fase levaduriforme en BHI (Agar infusión cerebro corazón). Alternaria spp. en medio Sabouraud. Aspergillus fumigatus en medio Sabouraud. Rhizopus spp. en medio Sabouraud. Candida spp. en medio Sabouraud y ChromAgar Candida. Microsporum canis y Trichophytum rubrum en medio de Lactrimel. Realizar preparaciones con azul de lactofenol para la observación microscópica. Describir las estructuras observadas. Observación de microcultivos. Tomar un portaobjeto, colocar en el centro una gota de azul de lactofenol. Con un gancho estéril tomar parte del micelio y disociarlo con ayuda de una aguja sobre la gota de azul de lactofenol Colocar un cubreobjeto y observar al microscopio óptico. Trichophyton rubrum Hongo antropófílo. Características macroscópicas: colonias de lento crecimiento, blanca aterciopelada, algodonosa con un pigmento rojo vinoso por el reverso. Características microscópicas: microconidios en forma de lágrima o pera (2-3 x 3-5 ), unidos en forma alterna a la hifa. En general los macroconidios son raros. En cepas muy esporuladas se pueden encontrar en forma de lápiz. Guía de Trabajos Prácticos

5 Microsporum canis Hongo zoófílo. Características macroscópicas: colonias de crecimiento rápido, mostrando hacia los días de incubación colonias con anverso lanoso o algodonoso blanco o de color gamuza.; puede existir algún surco radiado. Reverso con pigmento amarillo limón. Características microscópicas: macroconidios fusiformes de pared externa gruesa y rugosa, con extremos afilados ligeramente curvados, con 6-12 septos internos. Escasos microconidios claviformes o piriformes, sésiles. Alternaria alternata Características macroscópicas: colonias afelpadas o pulverulentas de color grisoliva. Características microscópicas: hifas septadas y pigmentadas. Conidióforos septados de longitud variable del que emerge un conidio elipsoidal grande, septado en forma transversal y longitudinal (moriforme) formando cadenas. Guía de Trabajos Prácticos

6 Aspergillus fumigatus Características macroscópicas: las colonias sobre agar Czapeck son blancas al principio y luego se tornan verde azulado a gris oscuro. Consiste en una densa felpa de conidióforos. Características microscópicas: conidióforo corto de pared lisa, a menudo verde en la parte superior. Cabeza conidial columnar, uniseriada, usualmente fértil sobre los dos tercios de la superficie de la vesícula. Conidios verrugosos, subesféricos de 2.5 a 3 µm de diámetro. Rhizopus spp. Características macroscópicas: colonia de crecimiento rápido y vellosa. Características microscópicas: micelio cenocítico con estolones y rizoides. Esporangióforos partiendo de los rizoides. Esporangio terminal con multiesporos, con columella, la misma es de esférica a ligeramente elipsoide. Esporangiosporos subesféricos, ornamentados. Guía de Trabajos Prácticos

7 Histoplasma capsulatum var. capsulatum Examen directo en materiales biológicos con tinción de Giemsa: levaduras pequeñas redondas u ovales con un brote, rodeado de una pared que no toma los colorantes, con una masa cromática en un polo en forma de media luna de color azul oscuro y el resto del citoplasma presenta color celeste. Se lo puede observar en el interior y/o afuera de macrófagos o células gigantes. Cultivos a 28 C en Saboureaud. Características macroscópicas: colonias de lento crecimiento (3 a 4 semanas), de aspecto granuloso a algodonoso, blancas y luego parduzcas (color canela). Reverso inicialmente de color crema y luego parduzco. Características microscópicas: microconidios hialinos, sésiles de pared lisa y delgada que salen de conidióforos cortos o a los lados de las hifas hialinas y tabicadas. Macroconidios esféricos de pared rugosa, con expansiones digitiformes, que salen de conidióforos cortos. Ambos conidios muy abundantes. Cultivos a 37 C en BHI. Características macroscópicas: colonias cerebriformes de aspecto cremoso (7días). Características microscópicas: levaduras monogemantes de 2-3 x 4-5 m. Guía de Trabajos Prácticos

8 Guía de Trabajos Prácticos