GUÍA OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS Y USO DE TINCIONES

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Ana Belén Dolores Espinoza Montes
hace 7 años
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1 ESCUELA DE SALUD GUÍA OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS Y USO DE TINCIONES DIRIGIDO A ALUMNOS DE: Técnico de laboratorio Clínico y Banco de Sangre Técnico de Enfermería Técnico de Radiodiagnóstico y Radioterapia Informática Biomédica PRE-REQUISITO: No tiene

2 INTRODUCCIÓN Los microorganismos son demasiado pequeños para observarse a simple vista: Protozoos, algas, hongos, bacterias y virus. Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, estructura, tamaño, composición, entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico el que facilita notablemente la observación; principalmente de las bacterias al tratarlas con colorantes los cuales a la vez facilitan la observación de ciertas estructuras celulares. En este taller vamos a distinguir la estructura celular de algunos microorganismos, como por Ej.: Staphylococcus, Streptocococcus, bacilos etc. OBJETIVOS: Al finalizar el taller el alumno será capaz de: Observar al microscopio distintas tinciones Diferenciar las características generales de los microorganismos según su tinción. Trabajar en forma ordenada y limpia Trabajar con un lenguaje científico, de uso muy habitual. REALIZADO POR: Tecnólogo Médico, Bioquímico de laboratorio clínico, Medico laboratorista, Biólogo. DURACIÓN: 90 minutos NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE Máximo 20 alumnos

MARCO TEÓRICO El termino gram positivo y gram negativo son parte de un lenguaje común en salud y muchas veces solo se tendrá esta identificación de la bacteria antes de iniciar un tratamiento.

3 MARCO TEÓRICO El termino gram positivo y gram negativo son parte de un lenguaje común en salud y muchas veces solo se tendrá esta identificación de la bacteria antes de iniciar un tratamiento. Es también por esto habitual, que al tomar un cultivo de una muestra para su análisis microbiológico, se realice un extendido que se conoce como gram y está relacionado con estas técnicas que serán para algunos alumnos motivo de mayor estudio en sus ramos posteriores. Microorganismos Gram. Positivos Las eubacterias Gram. positivas son células con una gruesa pared celular de peptidoglicano. Estás células poseen una membrana citoplasmática con fosfolípidos y proteínas. Por fuera de la membrana citoplasmática se encuentra la pared celular que está compuesta por una ancha capa de peptidoglicano. A su vez, estas cadenas se encuentran unidas entre sí mediante péptidos, que son pequeñas cadenas de aminoácidos que se entrecruzan. Estos puentes peptídico son característicos de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto más completo sea el entrecruzamiento. El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la célula, y evita que la célula estalle en medios hipotónicos. Al ser porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalíticas y productos de secreción hacia el exterior de la célula. Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram. Positiva

Microorganismos Gram Negativos Las eubacterias Gram. Negativas son células con una delgada capa de peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa.

4 Microorganismos Gram Negativos Las eubacterias Gram. Negativas son células con una delgada capa de peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa. Las células se encuentran envueltas por una membrana citoplasmática formada por una bicapa fosfolipídica y proteínas. Por encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida a unas lipoproteínas de anclaje que fijan la membrana externa. Esquema de las envolturas de una eubacteria Gram. Negativa

Bacilos Ácido-Alcohol Resistentes Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las restantes eubacterias.

5 Bacilos Ácido-Alcohol Resistentes Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las restantes eubacterias. La pared de las Mycobacterias posee un alto contenido de lípidos que la hace impermeable a los agentes hidrofílicos, por lo tanto estos microorganismos no se tiñen adecuadamente con los reactivos utilizados en la coloración de Gram. y no pueden ser clasificados como Gram positivos o negativos. Las Mycobacterias son teñidas adecuadamente por el método de Ziehl-Neelsen (Tinción Ácido-Rápida o Acid-Fast Stain) que utiliza como solución decolorante una mezcla de etanol y ácido clorhídrico. Estos microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloración ácidoalcohólica y por eso se denominan Bacilos Ácido Alcohol Resistentes (BAAR). Esquema de las envolturas de una eubacteria Ácido-Alcohol Resistente La observación microscópica puede realizarse a partir de una muestra (examen directo) o bien a partir de cultivos y según como se haga la preparación se pueden clasificar en: 1.- Examen al Fresco. (Microorganismos vivos) Se utiliza normalmente para ver movilidad de las bacterias. En el caso de hongos y protozoos, permite determinar además características morfológicas.

6 2.- Frotis Fijado (microorganismos muertos) Este método permite observar con mayor precisión detalles morfológicos y de agrupación de los microorganismos. INSUMOS Y EQUIPOS NECESARIOS PARA EL TALLER Laboratorio de ciencias básicas (mecheros y lavamanos). Microscopios ópticos (mínimo 1 cada 2 alumnos) Xilol Aceite de inmersión Papel filtro Papel tisúes o papel suave Porta objetos (3 por alumno) Cubre Objetos (2 por alumno) Asas de punta (20 unidades) Pipetas pasteur estériles y taponadas (3 por alumno) Pinzas metálicas (una por alumno) Cultivos de microorganismos (Placas de Agar Sangre sembradas en Taller de Realización de cultivos ) Set de tinción de Gram. Muestras Fijadas con BAAR. Positivos. ( solo para demostración) Jabón liquido. Clinic Cajas de bioseguridad Guantes (un par por alumno) DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO Actividad 1: El docente realiza y explica los tres procedimientos. Actividad 2: Los alumnos los divide en grupo y hace repetir uno de los procedimientos Actividad 3: Los alumnos rotan observando cada actividad. Procedimiento examen al fresco: A.-realizar una preparación húmeda entre portaobjeto y cubre objeto Si es de una colonia (material sólido) se debe suspender en pequeñas gotas de suero fisiológico.

7 Si es de un caldo de cultivo (material líquido) se deposita directamente una gota sobre el portaobjeto y se cubre con un portaobjeto. B.-se puede agregar una pequeña cantidad de colorante vital como: Azul de Metileno, que facilita la observación. Procedimiento Frotis fijado: A.- colocar una pequeña gota de agua en el centro del portaobjeto limpio. B.- flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. C.- remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar el secado. D.-Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. E.- Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el portaobjetos a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el portaobjeto pues las células pueden deformarse o romperse.

8 Tinción de Gram: Tinción del frotis bacteriano 1.- Cubrir la preparación con cristal violeta o violeta de genciana durante 1 minuto. 2.- Decantar el colorante y lavar suavemente con agua 3.- Cubrir con Lugol por 1 minuto lavar suavemente con agua 4.- Decolorar con alcohol-acetona.hasta que la preparación deje de perder color (30 segundos). 5.- Cubrir con fuccina o safranina por 30 segundos. 6.- Remover suavemente el exceso con agua corriente. 7.- Drenar el frotis y secarlo al aire en posición vertical o subvente con papel filtro. 8.- Limpiar el reverso. 9.- Examinar al microscopio BIBLIOGRAFÍA Procedimiento y técnicas de laboratorio, instituto de salud publica. Microbiología médica, José Ángel García-Rodríguez Enciclopedia Encarta 2004 METODOLOGÍA DE EVALUACIÓN:

9 El taller será evaluado mediante la realización de preguntas referente a lo observado y con tema revisado en clase anterior. Y de una pauta de evaluación

10 1.- Cuántos tipos de colonias observa en su muestra. Descríbalas. 2.- Describa la morfología encontrada en cada una de ellas. EJ. Cocaceas, bacilos etc. 3.- Que importancia le da usted al lavado de manos una vez que ha observado al microscopio. Nombre del alumno: Fecha: Puntaje: Nota: Observación de microorganismos y uso de tinciones 1.Cumple con una correcta presentación personal: -delantal -pelo tomado -uñas cortas y limpias 2. Describe las colonias 3. Describe la morfología 4. Fundamenta el lavado de manos 5. Ordena y limpia su unidad al finalizar el taller C MC NC C: Competente MC: Medianamente Competente NC: No Competente

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