Algoritmos y actualizaciones en el diagnóstico de las Hepatitis en el Laboratorio. Marta Morito Aguilar. Residente 2º año. Área de laboratorio.

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1 Algoritmos y actualizaciones en el diagnóstico de las Hepatitis en el Laboratorio Marta Morito Aguilar. Residente 2º año. Área de laboratorio.

2 Introducción. - Es una enfermedad inflamatoria que afecta al hígado. - Causas -Infecciosa (viral o bacteriana). - Inmunológica (por autoanticuerpos). - Tóxica (alcohol, venenos o fármacos). - Infección viral - Virus hepatotropos (A-E). - Virus no específicos ( VEB, CMV).

3 Hepatitis A: Características y epidemiología. - Familia Picornaviridae. - ARN cadena lineal sencilla y polaridad positiva. - Hepatitis viral más frecuente. - Transmisión fecal-oral o vehiculizado.

4 Hepatitis A: Evolución de la enfermedad. - Incubación: días. - Periodo prodrómico: 1 día- 2 semanas. - Síntomas gastrointestinales e ictericia. - 1% cronifica. - Replicación en el intestino. - Viremia y replicación en hepatocitos. - Viriones se liberan con la bilis. - Infectividad entre 3-12 días antes de la aparición de los síntomas.

5 Detección en el laboratorio: - Transaminasas y bilirrubina. - Actividad protrombina. - VHA-IgM: - Detección 3-7 semanas. - Pico tras un mes de aparición. - Desaparición a los 4 meses. - VHA-IgG: - Detección 8-10 días tras la aparición de los síntomas. - Máximo a las pocas semanas. -Permanecen indefinidamente. Inmunidad.

6 Hepatitis E: Características y epidemiología: - Calicivirus. - Simetría cúbica, sin envoltura. - ARN cadena simple, positiva y lineal. - Transmisión fecal- oral o vehiculizado. - India, URSS, China, áfrica y México.

7 Hepatitis E: Características y epidemiología. - Incubación días. - Letalidad del 1-3%. - Infección aguda leve salvo embarazadas, sobre todo del 3º trimestre. - No cronifica. - Estudios recientes sugieren la existencia de un reservorio animal en cerdos.

8 Detección en el laboratorio: - VHE-IgM - Aparición precoz. - Desaparecen a los 3 meses. - VHE- IgG -Aparición durante el cuadro agudo. - Persisten años. - No tiene utilidad en los laboratorios de rutina.

9 Hepatitis B: Características: - Familia hepadnaviridae. - Virus ADN de doble cadena con porciones de ADN de cadena simple. - Cápside icosaédrica y envuelta lipídica. - Lleva en su interior una ADN polimerasa con actividad retrotranscriptasa.

10 Hepatitis B: Epidemiología: millones de personas padecen infección crónica. - Décima causa de muerte. - Mayor endemicidad en Asia, África subsahariana y Pacífico. - Transmisión es por vía parenteral, exposición de mucosas a sangre o fluidos infectados y transmisión vertical.

11 Hepatitis B: Estructura: HB s Ag: Ag de superficie. Proteína situada en la envuelta lipídica. HB c Ag y HB e Ag: Ambos situados en la nucleocápside.

12 Hepatitis B: Evolución a través de sus marcadores.

13 Hepatitis B: Evolución a través de sus marcadores. Cronificación. Infección resuelta, inmunización HBs Ac ó Anti HBs, Hbc Ac ó Core+ Core + aislado Infección pasada, crónica? Infección aguda HBsAg+ IgM HBc Ac ó Core IgM+ Infección crónica HBsAg+ > 20 semanas Hbe Ag peor pronóstico Estudio inicial Hbs Ag + HBc Ac Estudio post vacunación HBs Ac ó Anti HBs,

14 Hepatitis B: Marcadores serológicos en los distintos estadíos de la infeción.

15 Hepatitis B: Algoritmos diagnósticos.

16 Hepatitis B: Detección en el laboratorio. HB s Ag: Inmunoensayo tipo sandwich que utiliza tecnología quimioluminométrica directa. El reactivo lumínico incluye un ac de captura monoclonal de ratón anti HBs biotilinado y un ac de monoclonal de ratón anti-hbs marcado con éster de acridinio. La muestra se incuba simultáneamente con el reactivo lumínico y la fase sólida. Falsos negativos (menos 1%): durante el primer més del periodo de incubación, en la fase de resolución de la infección, en caso de mutación del virus. HB e Ag: inmunoensayo quimioluminométrico directo de micropartículas de captación de anticuerpos. El HBs Ag está unido por enlaces covalentes a partículas magnéticas de látex en la fase sólida. En el reactivo lumínico el HBs Ag está marcado con éster de acridinio. La muestra se incuba simultáneamente con el reactivo lumínico y la fase sólida. DNA-VHB:Método: PCR a tiempo real, COBAS TaqMan. Rango dinámico: UI/ml. Sensibilidad: 10 UI/ml

17 Hepatitis B: Detección en el laboratorio. Anti-HB c : EIA. Positivo (único marcador): FP, infección oculta VHB, infección pasada. Anti-HB c IgM: EIA.Sensibilidad del 100%. Su negatividad descarta infección aguda. Puede ser positivo en crónica ( menos especificidad). Anti-HB s : EIA. Infección pasada junto Ac core (no antes de cuatro meses), vacunados. Anti-Hbe:EIA. Indicativo de baja o nula replicación., salvo cepas mutantes. Utilidad en la identificación de la cepa.

18 Hepatitis B: Hepatitis B oculta. - Pacientes con perfil serológico de hepatitis B resuelta, con ausencia de marcadores de VHB, en los que se detecta la presencia de DNA-VHB integrado o libre en el suero o en hígado. - Reaparición de actividad viral en inmunodeficiencia, o transmisión de la infección en caso de transplante. Posibles explicaciones: - Reordenamiento genético en proteína S que la hace indetectable. - Supresión de la replicación y de la expresión.

19 La transmisión del VHB a inmunodeprimidos receptores de trasplante hepático seguirán ocupando los intereses de los hepatólogos. La detección de hepatitis B oculta requiere ensayos de las más altas sensibilidad y especificidad, con un límite inferior de detección de menos de 10UI/ml para ADN del VHB y <0,1 ng / ml Ag de superficie. Esta condición encubierta es relativamente común en pacientes con hepatitis C crónica que parece ejercer cierta influencia en la capacidad replicativa y la latencia del VHB.

20 Virus hepatitis D. Características: - Cápsula icosaédrica y envuelta del VHB. - Sólo puede replicarse en presencia del virus de la hepatitis B. - Más patógeno e infeccioso. Coinfección: Raramente cronifica. Sobreinfección: Un portador crónico se infecta posteriormente con VHD. Alto riesgo de evolocionar hacia hepatitis fulminante.

21 Virus hepatitis D: Diagnóstico de laboratorio: -Ag delta: Elisa sobre suero.aparece fugazmente durante primoinfección, forma crónica intermitente. No utilidad clinica. - Anti VHD IgM:Elisa. Marcador de infección aguda/ infección activa - Anti VHD total: Suele coincidir con IgM. Contacto previo con el virus. - ARN-VHD: Control del tratamiento.

22 Hepatitis C: Características -Flavivirus. - Simetría icosaédrica, envuelta lipídica con espigas. - ARN de cadena simple con polaridad positiva. - Trasmisión parenteral y en escasas ocasiones parenteral. - Causa más frecuente de transplante en países desarrollados.

23 Hepatitis C: Epidemiología. - Prevalencia del 2% de la población mundial. - Afecta 123 millones de personas.

24 Hepatitis C: Evolución de la enfermedad. -Infección aguda frecuentemente asintomática. - Cronifica entre 43-86% de los casos. -Después de varias décadas 50-60% de los crónicos desarrollan enfermedad hepática. -Fallecen 1-5% por complicaciones hepáticas.

25 Hepatitis C: Genotipos.

26 Discriminar entre sanos y enfermos. Precisión diagnóstica. Punto de corte. SENSIBILIDAD Probabilidad de que un enfermo dé POSITIVO ESPECIFICIDAD Probabilidad de que un sano dé NEGATIVO SANOS E PUNTO DE CORTE, umbral de patologia ENFERMOS S

27 Punto de corte : Criterios de Selección Prueba muy sensible - Enfermedad grave curable - Suceptible de tto. - Un falso positivo no supone traumatismo psicológico ni económico Prueba muy específica - Enfermedad grave y prácticamente incurable - Implicaciones sanitarias y psicológicas el conocer si se padece la enf. - Minimizar Falsos Pos.

28 Hepatitis C: Algoritmos diagnósticos.

29 Hepatitis C: Detección en el laboratorio. Anti-HCV: Indica contacto previo con el virus. Prueba de elección para el screening. Inmunoblot: Se utiliza como test confirmatorio del cribado. Se basa en una tira de nylon con soporte de plástico, recubierta por Ag del VHC en forma de bandas. Las pruebas indeterminadas deben ser repetidad sobre nueva muestra y si persiste el resultado, realizar pruebas genéticas (PCR). PCR cuantitativa: Ag del core: Se han desarrollado técnicas para detectar en el mismo ensayo Ag y Ac.

30 Hepatitis C: Detección en el laboratorio. Genotipado: Se analizan determinadas secuencias del VHC, como NS5, core o 5` UTR. Se hibridan los productos de amplificación de la región 5` UTR con una variedad de sondas específicas unidas a una membrana de nitrocelulosa.

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