HISTOLOGÍA. Ciencia que estudia las células, tejidos y órganos, desde el punto de vista microscópico, relacionando la estructura con la función.

Transcripción

1 HISTOLOGÍA

2 HISTOLOGÍA Ciencia que estudia las células, tejidos y órganos, desde el punto de vista microscópico, relacionando la estructura con la función.

3

4 MICROSCOPIOS

5 TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

6 1.Pie Microscopio óptico Tubo Ocular Revólver Objetivo Pinzas Condensador Fuente de luz Brazo / soporte del tubo Platina macrométrico y micrométrico Ajuste de altura de platina Pie

7 Microscopio óptico Microscopio electrónico de transmisión

8 Preparación de tejidos para microscopia óptica Fijación. * Detiene el metabolismo celular y conserva la estructura del tejido para permitir el tratamiento ulterior. * Fijadores: uno de los más usado es la Formalina.

9 Preparación de tejidos para microscopia óptica Deshidratación. * En soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta llegar a alcohol 100%.

10 Preparación de tejidos para microscopia óptica Aclaramiento. Luego de deshidratar se utilizan soluciones como el xileno o tolueno, que son miscibles tanto en alcohol como en parafina fundida.

11 Preparación de tejidos para microscopia óptica Inclusión. * Necesaria para poder realizar cortes muy delgados, de 5 a 15 µm. * Luego de deshidratar y aclarar se incluye el tejido en parafina, se espera que enfríe, se forma un taco y luego procede a realizar los cortes.

12 Preparación de tejidos para microscopia óptica Cortes. * Microtomo.

13 Preparación de tejidos para microscopia óptica Coloración. * Se fundamenta en la afinidad química entre el tinte y las sustancias presentes en la muestra. * El método de tinción más empleado en histología es el de hematoxilina y eosina (HE). * En el microscopio, las estructuras ricas en ácidos nucleicos, como los núcleos celulares, tienen el color azul de la hematoxilina, mientras que las regiones ricas en proteínas del citoplasma muestran la tinción roja de la eosina.

14 Preparación de tejidos para microscopia óptica Montaje.

15 Preparación de tejidos para microscopia óptica Otras coloraciones: * Orceína y fucsinaresorcina para el material elástico. * Impregnación argéntica para las fibras reticulares y las membranas basales.

16 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Inclusión. Cortes. Montaje.

17 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Glutaraldehído Tetróxido de osmio

18 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Inclusión. Resinas epoxi Materiales plásticos

19 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Inclusión. Cortes.

20 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Inclusión. Cortes. no exceder de nm

21 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Deshidratación. Inclusión. Cortes. no exceder de nm Ultramicrotomo

22 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Inclusión. Cortes. Montaje.

23 Preparación de tejidos para microscopia electrónica Fijación. Inclusión. Cortes. Montaje. Sobre reticulado de cobre, denominado Grilla

24 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Se basan en procedimientos químicos específicos que pueden proporcionar información detallada acerca de la función de las células y los componentes extracelulares de los tejidos. Fundamento: * En la unión específica a un colorante. *El uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente dirigido hacia un componente celular en partcular. *La actividad enzimática inherente de un elemento constitutivo de las células. *Radioautografía: en la cual precursores moleculares marcados radiactivamente se incorporan en las células y tejidos antes de la fijación.

25 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Acidofília y Basofília. Metacromasia. Métodos basados en la reacción de Schiff para grupos aldehído. * Método del ácido peryódico-schiff (PAS). * Método de Feulgen. Determinación histoquímica de lípidos. Determinación histoquímica de enzimas. Métodos inmunohistoquímicos.

26 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Acidofília y Basofília. Las uniones entre colorantes ácidos (aniónicos) y básicos (catiónicos) y los grupos tisulares de acuerdo a su afinidad. A ph neutro el ADN y el ARN presentan fuerte basofilia. Las mayoría de las proteínas citoplasmáticas son acidófilas.

27 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Metacromasia. Cuando se tiñen ciertos componentes tisulares, ejemplo, la matriz cartilaginosa, con el colorante azul de toluidina, se modifica el color azul a púrpura o rojo violáceo por unión con el tejido. La variación cromática se denomin a Metacromasia Colorantes metacromáticos; azul de toluidina y tionina Componentes celulares que se colorean por metacromasia: matriz cartilaginosa y mastocitos del tejido conectivo

28 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Métodos basados en la reacción de Schiff para grupos aldehído. * Método del ácido peryódico-schiff (PAS). Se emplea para determinar a presencia de macromoléculas ricas en hidratos de carbono como el glucógeno y las glucoproteínas. * Método de Feulgen. Método específico para la determinación histoquímica de ADN, sobre la base del contenido de desoxirribosa en el ADN.

29 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Métodos basados en la reacción de Schiff para grupos aldehído. * Método del ácido peryódico-schiff (PAS). Se emplea para determinar a presencia de macromoléculas ricas en hidratos de carbono como el glucógeno y las glucoproteínas. * Método de Feulgen. Método específico para la determinación histoquímica de ADN, sobre la base del contenido de desoxirribosa en el ADN

30 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Determinación histoquímica de lípidos. Colorantes Sudan, tiñen los triacilgliceroles. Tinción de adipocitos con rojo Sudán.

31 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Determinación histoquímica de enzimas. A B+C A BR + C

32 MÉTODOS HISTOQUÍMICOS Métodos inmunohistoquímicos. La técnica requiere anticuerpos específicos de la sustancia en estudio junto con una manera de localizar el anticuerpo usando un marcador fluorescente u otro marcador.