materno-hereditaria Dra. Graciela Meza Ruiz Investigadora Titular C del Instituto de Fisiología Celular UNAM
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- Pablo Castellanos Domínguez
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1 El Genoma mitocondrial y la sordera materno-hereditaria Dra. Graciela Meza Ruiz Investigadora Titular C del Instituto de Fisiología Celular UNAM 29 de Octubre del 2009
2 Localización citogenética de genes para la sordera Figure 2: Localización citogenética de genes para sordera sindrómica y no sindrómica ilustradas en un cariotipo masculino humano. Hearing loss occurring as an isolated disorder is referred to as nonsyndromic whereas it is referred to as syndromic when co-segregating with any non-auditory abnormalities. Gene symbols for independently mapped hearing loss loci that are discovered to be due to allelic mutations are separated by a slash (/). For example, the families used to map DFNB21, DFNA8 and DFNA12 on chromosome 11q are all segregating alleles of TECTA, which encodess-tectorin 10, 11. An online compendium of mutations of many of these genes can be found at the Human Genetics Mutations Database uk/uwcm/mg/hgmd0 html Additional unpublished information about DFNA and DFNB loci can be found on the Hereditary Hearing Loss web site
3 SORDERA SINDRÓMICA SORDERA NO SINDRÓMICA Cursa con daño a otros Existe daño solo en el órganos o sistemas oído, también llamada SORDERA PURA
4 Mutaciones de mitdna humano asociadas a sordera. * * 0/ * * * * no-sindrómica
5 a) A nivel RNA. Es interesante que la SORDERA NO SINDRÓMICA es causada por mutaciones en el DNA mitocondrial que codifica al RNA mitocondrial 12S o a los RNA de transferencia, pero No en el DNA codificante de las proteínas. b) Por lo tanto, es evidente que los mecanismos de procesamiento y traducción del RNA se alterarán por esas mutaciones y hará mas sensible al daño a las células del oído, mas que a los otros tejidos puesto que es el único órgano que se altera.
6 ΔT 961 Cn DEAF A1555G A7445G Genes del complejo I (NADH dehidrogenasa) Genes del complejo IV (citocromo c oxidasadehidrogenasa) Genes del complejo III (ubiquinol: citocromo c oxidoreductasa) d Genes del complejo V (ATP sintasa) Genes de la trna s Genes de los RNA ribosomales g
7 La mitocondria
8 Microscopia Electrónica de a) célula completa y b) célula dañada a b
9
10 OÍDO INTERNO Y MODELO DE TRANSDUCCIÓN
11 Mutaciones de mitdna humano asociadas a sordera. * * 0/ * * * * no-sindrómica
12 12S rrna del DNA mitocondrial ( 951bp) SEQ PCR-RFLP/SEQ pb SEQ A827G T961insCn C C1494T 1601pb A663G T1095C A1116G A1555G SEQ PCR-RFLP/SEQ
13 ESQUEMA EXPERIMENTAL 1. El ADN total se extrajo de muestras individuales de sangre periférica de una población mexicana entre los 5 y 70 años de edad pero mayormente entre los 21y 39 años, de los servicios de Audiología del INER y del INN. 2. Se realizó por PCR la amplificación de la region 12s rrna del DNA mitocondrial y se visualizó la banda correspondiente por electroforesis de agarosa al 1% Desnaturalización ió 98 C 5 min Desnaturalización 98 C 30s Alineamiento 60 C 25s Extensión 72 C 45s 3. Las posibles mutaciones se identificaron en un gel con gradiente desnaturalizante y se comprobaron por secuenciación. 4 Las secuencia obtenida se comparó con las secuencias conocidas 4. Las secuencia obtenida se comparó con las secuencias conocidas globalmente y con las de los haplogrupos ya publicados.
14 Variantes encontradas pb A663G A827G T1189C 1601pb
15 Haplogrupos Mexicanos según el cambio de nucleótido Nativo Americano A663G A827G A2 + - B2 - + C1 - - D1 - -
16 Individuos no emparentados sanos DNA GENERO EDAD SORDERA TRATAMIENTO A827G A663G Haplogrupo Nativo Americano 7 M B2 61 F B2 9 M B2 2 F B2 60 F B2 46 F* B2 3 F B2 63 F B2 32 M B2 54 F A2 38 F A2 23 M A2 37 M A2 10 F A2 24 M A2 55 F A2 18 M A2 12 F A2 5 F A2 6 M A2 15 F A2 22 M C1 or D1 4 F C1 or D1 14 M C1 or D1
17 Individuos no emparentados con daño en el oído Género Edad Sordera Vestibular TX A827G A663G T1189C F 11 Profunda VA B2 M 23 Profunda VA B2 - M 12 Profunda Normal A2 M 18 Profunda Normal Haplogrupo Nativo Americano F 61 Profunda VA CI or D1 M 28 Profunda Normal CI or D1 F 28 Media HE ES y KA + - M* 5 Profunda Normal Amikacina + - F 30 Normal VA Gentamicina A2 M 54 Media VA ES y KA CI or D1 F 69 Profunda HE ES y KA CI or D1 F 52 Media HE ES CI or D1 M 28 Profunda Normal Gentamicina CI or D1 F 29 Normal VA Gentamicina CI or D1 - - A2 B2 B2
18 Individuos Emparentados Haplogrupo Nativo DNA Género Edad Sordera Vestibular Tratamiento A827G A663G Americano 46* F B2 Sanos 37 ** M A2 47* M Amikacina + - B2 Alterados 58** M A2 *madreehijo e **tío materno y sobrino 50 + F B2 Alterados 49 + M B2 + Hermanos
19 Alineamiento i de la variante A827G CAGTGATTAACCTTTAG Cambridge Sequence NC CAGTGATTAACCTTTAG Native American A2 EF CAGTGATTAGCCTTTAG G GCC G Native American B2 EF CAGTGATTAACCTTTAG Native American C1 AF CAGTGATTAACCTTTAG Native American D1 EU CAGTGATTAGCCTTTAG Paciente 46
20 Alineamiento i de la variante A663G TGGTCCTAGCCTTTCTA Cambridge Sequence NC TGGTCCTGGCCTTTCTA Native American A2 EF TGGTCCTAGCCTTTCTA Native American B2 EF TGGTCCTAGCCTTTCTA Native American C1 AF TGGTCCTAGCCTTTCTA Native American D1 EU TGGTCCTGGCCTTTCTA Paciente 58
21 Alineamiento de T1189C GCTTCATATCCCTCTAG C CCC C G Cambridge Sequences NC GCTTCATATCCCTCTAG Native American A2 EF GCTTCATATCCCTCTAG Native American B2 EF GCTTCATATCCCTCTAG Native American C1 AF GCTTCATATCCCTCTAG Native American D1 EU GCTTCATACCCCTCTAG Israel K1a4b DQ GCTTCATACCCCTCTAG Paciente 11
22 CONCLUSIONES En un grupo de pacientes estudiados audiológicamente en el Instituto de Enfermedades Respiratorias de la SSA y analizando la estructura de la región del mit RNA 12S por Biología Molecular se encontró que : 1. Hay cambios en los sitios A827G o A663G en números similares tanto en individuos id sanos como afectados, sin que estén emparentados 2. Se encontraron los mismos cambios en pacientes emparentados (sanos o afectados) y se pudieron relacionar genéticamente con los parientes, según el cambio 3. Se encontró un cambio en el sitio 1189, del nucleótido C en vez de T, no descrito anteriormente t en un individuo id dañado, d bajo tratamientot t con aminoglicósidos. 4. Este cambio es una posible mutación, pero también denotaría una ascendencia árabe israelí. 5. Los cambios encontrados A827G y A663G denotan un cambio existente ya en el grupo étnico, perteneciente a los haplogrupos A y B, ya descritos anteriormente por genetistas mexicanos
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