DEFINICIÓN Y CARACTERÍSTICAS DE LA TÉCNICA:

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1 EQUIPO AUTOMÁTICO PARA LA DETECCIÓN DE PATÓGENOS minividas-vidas DEFINICIÓN Y CARACTERÍSTICAS DE LA TÉCNICA: Sistema automático de inmunodetección rápida de patógenos basado en la técnica ELFA (Enzyme Linked Fluorescent Assay) (Ensayo de fluorescencia ligado a enzima, una técnica ELISA ligada a fluorescencia) y en técnicas de inmunoconcentración. La metodología ELFA es una técnica ELISA en "sandwich" de alta sensibilidad y especificidad para la detección de antígenos, con lectura final en fluorescencia, proporcional a la cantidad de antígeno presente en la muestra. Los anticuerpos están fijados en la fase sólida de la reacción, que consiste en un cono, el cual actúa como pipeta. El interior del cono se encuentra recubierto de anticuerpos. Los reactivos, listos al empleo, están dispuestos en un cartucho identificado por código de barras que es automáticamente reconocido por el equipo. Una vez depositada la muestra (pretratada o no, según el análisis) en este mismo cartucho, el sistema VIDAS está programado para cada tipo de test y para efectuar así las reacciones, lavados, incubaciones, etc., necesarios hasta la lectura y emisión de los 1

2 resultados, sin necesidad de dispensar reactivos, uso de agujas de muestreo ni contacto entre reactivos e instrumento u operario. El equipo realiza la técnica ELFA automáticamente en 45 minutos -1 hora sin intervención de personal, tal y como se describe a continuación: - Los antígenos presentes en el medio de cultivo se fijan a los anticuerpos del interior del cono. - Los elementos libres son eliminados por lavado. - Los anticuerpos conjugados marcados con fosfatasa alcalina son aspirados dentro del cono y se fijan sobre los antígenos ya unidos a los anticuerpos de la pared del cono. - Nuevas etapas de lavado eliminan el conjugado no fijado. Un substrato, el 4 metil-umbeliferil-fosfato, es introducido en el cono. - La enzima que queda en las paredes del cono cataliza entonces la transformación del substrato en una molécula fluorescente, la 4-metil-umbeliferona. - La intensidad de la fluorescencia es medida a través del sistema óptico del sistema VIDAS a 450 nm. Al terminar la técnica, los resultados son analizados automáticamente por el ordenador, que suministra un valor de test para cada muestra. Este valor es comparado con las referencias internas (umbrales) y cada resultado es interpretado como positivo o negativo. También se puede utilizar el robot minividas como un sistema de inmunoconcentración que permite eliminar los sucesivos pases de enriquecimiento selectivo que se emplean en las técnicas tradicionales. PRINCIPALES VENTAJAS: El equipo presenta las siguientes ventajas frente a la microbiología tradicional y frente a otras técnicas rápidas : Equipo compacto multiparamétrico de inmunoanálisis. Sistema completamente automatizado a partir de la inoculación de la muestra en el equipo hasta la lectura e interpretación de resultados. Reactivos listos al empleo en un formato exclusivo, desechable y práctico: a) Un cartucho que contiene los reactivos ya preparados para procesar automáticamente la muestra. b) Un cono recubierto de anticuerpos que realizaran de forma selectiva la inmunoconcentración y/o detección del patógeno. Reducción de las etapas de manipulación a la fase de preparación de la muestra. El resto del ensayo se realiza automáticamente en el sistema. Impresión automática de resultados al concluir cada análisis. Posibilidad de exportar resultados y datos a un sistema informático externo de gestión de datos de laboratorio (LIMS). 2

3 Lo que se consigue con el sistema minividas es agilizar los controles microbiológicos y a la vez acortar el periodo de obtención de los resultados, lo que permite la liberación del producto controlado con plenas garantías al estar sometida la técnica a validaciones oficiales. CALIDAD DE LOS MATERIALES: En el procesado de las muestras por el sistema minividas, no existe contacto entre el reactivo y la máquina, ni válvulas de succión/expulsión de líquidosreactivos, con lo que se disminuyen los riesgos y desgastes derivados de la contaminación (circulación de las muestras por el interior del sistema). El MTBF (tiempo medio de intervención entre fallo y fallo del sistema) es de días sin averías (actualizado 2008), demostrando la gran robustez de los materiales utilizados. CAPACIDAD DE ANÁLISIS: La sensibilidad del método permite detectar a partir de 2-3 UFC en la muestra original. En algunos protocolos las muestras se tratan térmicamente para inactivarlas y a la vez favorecer la unión antígeno anticuerpo. CALIBRACIONES : No necesita ni calibradores ni controles cada vez que se realiza un ensayo. No es necesario introducir un estándar para la calibración, cada vez que se realiza un test. Las calibraciones se realizan una vez para cada lote y/o cada 15 días y son archivadas en el software, para la realización de la totalidad de las muestras en los días sucesivos. Por este mismo motivo tampoco es necesario poner controles positivos y negativos cada vez que se realiza un ensayo. Los estándares y controles positivos y negativos vienen incluidos en cada caja de reactivos, por si fuera necesario proceder a controles de calidad del reactivo. PARÁMETROS : Salmonella Listeria Monocytogenes Listeria spp Campylobacter Toxina de S.aureus E.coli 0157:H7 3

4 ÚLTIMOS DESARROLLOS Y MEJORAS : VIDAS LMX: investigación de Listeria monocytogenes en 24 horas con un único paso de pre-erniquecimiento VIDAS SLMX: investigación de Salmonella en 24 horas con un único paso de pre-enriquecimiento VIDAS LSX (Listeria spp Express) :investigación de Listeria spp en 28 horas QCVs: Cartuchos de autocontrol y verificación del sistema minividas VIDAS LDUO: investigación de Listeria spp y Listeria Monocytogenes en el mismo cartucho. VIDAS EASY SALMONELLA: disminución de la manipulación en el procolo de Salmonella. Protocolo e 48 horas LECTOR DE CODIGO DE BARRAS EXTERNO: facilita la incorporación y actualización de los nuevos parámetros o mejoras al equipo minividas Blue. BLOQUE CALEFACTOR HEAT AND GO: facilita el paso final de la termización. ACTUALIZACIÓN DEL EQUIPO: Al tratarse de un robot el equipo evoluciona con las nuevas técnicas. Equipo abierto que utiliza las técnicas de inmunoconcentración e inmunodetección, asi como la técnica de detección por fagos. BENEFICIOS Y REPERCUSIÓN: Los beneficios y repercusión del sistema minividas en el Laboratorio son los siguientes: - La prevención de irregularidades, la anticipación de situaciones adversas por el control de materias primas y procesos productivos y la obtención de la información necesaria que nos permite el camino hasta un estándar de calidad óptimo de nuestro producto, nos garantiza la ausencia de fallos en el punto de venta. - El rápido análisis de los parámetros de medida incide de forma importante en la detección precoz de anomalías y facilita y acelera la toma de decisiones en temas tan importantes como: - Gestión de los ciclos de producción. - Gestión de stock y reducción del inmovilizado con una disminución del tiempo de análisis a menos de 24h en el caso de Salmonella y un máximo de 48h en el caso de otros patógenos como Listeria monocytogenes. - Seguridad en la detección de microorganismos ya que el sistema realiza un procedimiento ELISA automático de la muestra, lo que elimina los posibles errores de manipulación humana y posteriormente emplea técnicas altamente selectivas de detección por inmunoensayo combinado con fluorescencia. De ahí que los parámetros utilizados se hayan sometido a validación por entidades mundialmente reconocidas (AOAC, AFNOR) que han establecido la sensibilidad, especificidad y reproducibilidad del test. 4

5 - Sencillez en el manejo del equipo combinado con rapidez en la obtención de resultados y facilidad en la interpretación de los mismos debido a que el sistema realiza un tratamiento automático e informatizado de datos, mejorando globalmente la gestión e imagen en el departamento de control de calidad. - Repetitibilidad y reproductibilidad de los ensayos superior a los métodos tradicionales de recuento en placa. - Fiabilidad en el espectro de detección, en la sensibilidad, en los tiempos de preincubación y análisis, reduciendo así los riesgos de resultados de falsos negativos. La fiabilidad de resultados garantizada por la utilización de material desechable sometido a normas de garantía de calidad y por los medios y reactivos listos para el empleo. - Productividad elevada en el tratamiento de muestras ya que el aparato está adaptado a grandes series (80 test por día). - Reducido espacio de laboratorio debido a las pequeñas dimensiones del equipo. - Respuesta cualitativa: Positivo o negativo (presencia o ausencia). - El equipo compacto minividas dispone de dos secciones de 6 posiciones cada una que permite procesar 12 muestras de forma simultánea de uno o varios parámetros distintos al mismo tiempo (por ejemplo Salmonella y Listeria monocytogenes simultáneamente). - El tiempo de realización de los ensayos es de minutos desde la introducción de la muestra en el equipo, hasta la impresión automática de resultados, lo que permite procesar un total de muestras en una jornada laboral, con el equipo compacto minividas. POLITICA biomerieux: biomerieux es una compañía con certificación ISO 9001 en sus centros de producción e ISO 9002 en sus filiales de distribución con la garantía que ello conlleva en la fiabilidad y confianza de nuestros clientes. Nuestro equipo humano asegura: - Asistencia técnica y soporte continuado en cuanto a la metodología y área analítica del cliente. - Ponemos a su disposición la certificación de todos los equipos y medios utilizados. - Instalación del sistema conforme a las necesidades del laboratorio: biomérieux impartirá la formación necesaria y quedará a disposición de los técnicos del laboratorio para posibles aclaraciones. La formación mínima de puesta en marcha de la técnica es de dos días. 5

6 VIDAS : Una referencia mundial Solution AOAC AFNOR / Health Canada EMMAS DIN Chinese Gov Japanese Gov SLM ICS Plate ICS2 Plate LIS LMO2 LDUO SET2 CAM ICS SLM ICS2 SLM SLMX LSX ECO ECPT 6

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