Control de Calidad en la Técnica de ELISA. Lic. Valentina Bastidas D.

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1 Control de Calidad en la Técnica de ELISA Lic. Valentina Bastidas D.

2 TÉCNICA DE ELISA DEFINICIÓN E L I S A Ensayo Inmunoabsorbente Ligado a Enzimas Enzime-Linked ImmunoSorbent Assay TIPOS DE ELISA: ELISA SANDWICH ELISA DIRECTO ELISA INDIRECTO ELISA COMPETITIVO

3 ELISA SANDWICH Anticuerpo secundario - Enzima Sustrato Antígenos Pozo sensibilizado

4 ELISA DIRECTO Anticuerpo - Enzima Sustrato Antígenos Pozo sensibilizado

5 ELISA INDIRECTO Anticuerpo secundario - Enzima Sustrato Anticuerpos primarios Pozo sensibilizado

6 ELISA COMPETITIVO Prueba Positiva Prueba Negativa

7 ELEMENTOS DEL ELISA FASE SÓLIDA ENZIMA SUSTRATO SOL DE PARADA Poliestireno Peroxidasa TMB Citrato sódico Polivinilo Fosfatasa alcalina NAPFB Cloruro de magnesio Estructura íntegra β-galactosidasa ONPG Fosfato sódico Fracción purificada Ureasa BP Hidróxido de sodio PG IS Gelatina

8 VENTAJAS DEL ELISA Alta sensibilidad Alta especificidad Baja toxicidad Procedimientos sencillos Diversidad de pruebas Bajos costos

9 REQUERIMIENTOS DEL ELISA Aire acondicionado, centrífuga Nevera Congelador a -20 C Estufa calibrada Espectofotómetro, Medidor de Ph Pipetas semi - automatizadas o automatizadas con rango de medición entre 0,1 µl hasta 1 ml Puntas nuevas para medición Agua destilada o desionizada Alcohol isopropílico 75 % Profesional capacitado

10 CONTROL DE CALIDAD EN LA TÉCNICA DE ELISA CALIDAD SINONIMO DE EXCELENCIA CONTROL DE CALIDAD ES SUPERVISAR EL CUMPLIMIENTO DE LOS PATRONES DE EXCELENCIA Y LOGRAR QUE ESTOS SE MANTENGA EN EL TIEMPO

11 CONTROL DE CALIDAD EN LA TÉCNICA DE ELISA CONTROL DE CALIDAD EXTERNO CONTROL DE CALIDAD INTERLABORATORIO CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO

12 CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD COVENIN- ISO 9001:2000 ISO 15189:2003 ISO/IEC 17025:1999

13 CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO LO QUE NO ESTA ESCRITO NO EXISTE!!!

14 CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO ACTUAR PLANIFICAR Evaluación Nuevas ideas Poner en práctica Concretadas SUPERVISAR HACER

15 RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA Control de Temperatura: Nevera Estufa Ambiente Mesón de trabajo desinfectado Pipetas y tubos de ensayo completamente limpios Puntas para pipetas destinadas a los reactivos deben ser nuevas RACKS Leer cuidadosamente instrucciones y recomendaciones del kit. Atención a las actualizaciones de la técnica y su interpretación.

16 RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA Preparación de la cámara húmeda 15 anticipados Dejar atemperar los reactivos: LUZ Placa de reacción Diluentes, Buffer Sustrato, Solución Stop Enzimas o Conjugados 30 antes 10 antes Descartar presencia de turbidez o contaminación en los reactivos

17 RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA CONCENTRACIÓN TOTAL Uso de guantes. Limpieza constante de guantes y pipetas. Uso de propipetas. Control del ph del agua destilada. Limpia obtención de la muestra. Paciente en ayuno Homogenización de muestras y reactivos antes de su uso. Conservación de muestras a 20 C Actualizar diariamente la hoja de reporte de calibración, controles y ensayos de pacientes

18 FALLO EN EL CONTROL DE CALIDAD DE LA TECNICA DE ELISA Pozos de reacción Solución de lavado Posible contaminación de reactivos Posible contaminación de las puntas Fallo en el pipeteo

19 RECOMENDACIONES FINALES LO QUE BUEN SED NO CONCENTRACION ESTA DE EQUIPO CONFIANZA CONOCIMIENTOS ESCRITO DE TRABAJO EXISTE!!!

20

21 GRACIAS!!!

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