Diagnóstico y control de piroplasmosis

Transcripción

1 Diagnóstico y control de piroplasmosis Colegio de Veterinarios de Lérida Date Lérida, 18 junio 2014 Laura Elvira Partida Gerente Técnico Rumiantes MSD Animal Health laura.elvira@merck.com Índice Diagnóstico laboratorial: confirmación Técnicas directas Técnicas indirectas Hemograma en la propia clínica Remisión de muestras Herramientas de control de piroplasmosis Terapéutica de las piroplasmosis 2 1

2 Árbol de decisiones en diagnóstico Definir bien el problema Tener en mente lista completa de diagnósticos diferenciales Elegir técnica/s en función de las características del proceso/ patógeno: Afectación sistémica/local Externa/interna Bacteriemia, viremia, parasitemia Se excreta??? Actuación por pasos en función del coste y probabilidades de diagnóstico. 3 Técnicas de laboratorio PODEMOS Podemos ENCONTRAR encontrar el EL AGENTE?? agente??? Detección directa. Detección indirecta. Produce anticuerpos?? Identificación en frotis sanguíneo Otros: ELISAd, IFD, PCR ELISAi, IFI, IHA Existen otros parámetros?? Cultivo e identificación Diagnóstico presuntivo Esperar a la necropsia, promete ser interesante 4 2

3 Otros: detección indirecta. Anticuerpos. ELISAi, IFI, IHA Presencia de anticuerpos indica historia (reciente, pasada??). Un animal enfermo presenta seroconversión?? No siempre!!! ELISAi: Robusto, fiable, económico, kits preparados. Dos grandes limitaciones (a veces insalvables): Kits específicos especie Reacciones cruzadas entre distintos agentes IFI, IHA: mayor manejo = más costes; > nivel interpretativo = personal cualificado = más costes. 5 Métodos de detección directa Hemograma Si lo identificamos en el frotis, está ahí y está vivo!!! El gold standard: es tan gold y tan standard?? Sin embargo: Está produciendo el cuadro patológico o es agente secundario/ especie apatógena??? Siempre contrastando resultados con el cuadro clínico y/o anatomía 6 patológica 3

4 Otros métodos de detección directa Otros: ELISAd, IFD, PCR Técnicas moleculares basadas en la reacción en cadena de la polimerasa: Muy sensibles, rápidas, ya no tan caras Muy abiertas, PCR multiplex para varios tipos a la vez!! Permite la posibilidad de taxonomía y epidemiología molecular. 7 Otros métodos de detección directa Aproximaciones moleculares. Qué es la PCR? Reacción en Cadena de la Polimerasa: Amplificación de un fragmento de ADN repetidas veces, empleando la polimerasa. Específico Ciclos- sensible Enzimático 8 4

5 Árbol filogenético tras PCR 9 Posibilidades. Envío a un laboratorio Lo hago en el laboratorio de mi clínica (lo hago yo ) 10 5

6 Si lo enviamos a un laboratorio Ideal: Muestra de sangre en EDTA refrigerar y enviar en el día!!! Hemograma y frotis Cuando lleguemos ya a la necropsia Sangre si es posible en EDTA Muestras de bazo hígado, riñón, cerebro 11 Si lo hacemos nosotros!!! Hemograma completo Valor hematocrito Proteínas séricas Proteínas plasmáticas Concentración del fibrinógeno plasmático Relación proteínas totales: fibrinógeno (PTT:F) Recuento de leucocitos Frotis sanguíneo Estudio de la serie roja Observación de plaquetas Recuento diferencial de leucocitos 12 6

7 Qué veremos en piroplasmosis? Hematocrito: ANEMIA Biopatología clínica de la anemia ERITROCITOS Hematocrito < 26% Signos de regeneración Punteado basófilo Anisocitosis Policromasia Cuerpos de Howell Jolly Eritrocitos nucleados Hemoglobina Hemoglobina corpuscular media (HCM) Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) Cuerpos de Heinz Aglutinación PROTEÍNAS PLASMÁTICAS Hipoproteinemia Hiperproteinemia Hiperglobulinemia Hiperfibrinogenia Bilirrubina total Directa Indirecta 14 7

8 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr El Hto es el parámetro más exacto pero requiere conocer estado de hidratación Clasificación grado anemia: Ligera: Hto 20-26% Moderada: Hto 14-19% Grave: Hto 10-13% Muy grave: Hto <10% <8-12% : indicación de transfusión sanguínea + anorexia 15 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr CLASIFICACIÓN EN BASE AL ESTUDIO DEL FROTIS 16 8

9 17 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr NO REGENERATIVA: Ausencia de signos de regeneración Ausencia de reticulocitos ANEMIA POR ENFERMEDAD INFLAMATORIA CRÓNICA ANEMIA FERROPÉNICA (deficiencia crónica de hierro) ANEMIA POR DEFICIENCIA OLIGOELEMENTOS (Co y Cu) ANEMIA POR APLASIA MEDULAR 18 9

10 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr REGENERATIVA: Punteado basófilo Anisocitosis Policromasia C. Howell Jolly Eritrocitos nucleados Cuándo comienzan a aparecer signos de regeneración? Hallazgos 72horas en frotis tras indicadores inicio de de regeneración la causa Recuento de reticulocitos >1%: nueva tinción de azul pico máximo de de metileno respuesta 7-10 días Aumento del VCM, HCM 19 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr REGENERATIVA: HEMORRÁGICA: AGUDA CRÓNICA HEMOLÍTICA Cómo los diferenciamos? Mediante las proteínas plasmáticas totales PPT 20 10

11 Determinación proteínas Valores fisiológicos: Proteínas plasmáticas (PTT): 5,7-8,1 g/dl Proteínas séricas (PS): 5,5-7,9 g/dl 21 2 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr REGENERATIVA: POR HEMORRAGIA AGUDA: PPT y Ht disminuidos 4-12h posthemorragia Aumento Rec Plaquetar y neutrofilia 1 as horas POR HEMORRAGIA CRÓNICA Menores signos de regeneración PPT disminuidas o normales 22 11

12 Hematocrito: ANEMIA ANEMIA. Disminución del valor Hto <26%, Hgb, nºgr REGENERATIVA: HEMOLÍTICA PPT normales o aumentadas Hemoglobinemia/ hemoglobinuria si hemolisis intravascular Posible causa de hemólisis en frotis: parásitos intraeritrocitarios 23 Estudio del frotis: serie roja Parásitos intraeritrocitarios: Theileria annulata: merozoitos intraeritrocitarios Babesia protozoo piriforme único o doble Babesia bovis (2µm) Babesia bigémina (2-4µm) Anaplasma marginale: rickettsia intraeritrocitaria localizada en el margen eritrocitario 24 12

13 Diagnósticos diferenciales de anemias Anemia Htc<26% No regenerativa Regenerativa Médula ósea anormal Hemorragia o hemólisis agudas Hemorragia (Proteínas ) Hemólisis (Proteínas bilirrubina ) Enfermedad crónica Intravascular (Hemoglobinurina) Extravascular 25 Y la serie blanca, se verá afectada??? 13

14 Theileriosis Esporozoito Repr asexual en linf en el ganglio Esferas azules de Kock garrapata macroesquizonte invasión de los GR mitosis linfocitos y esquizontes 27 2 Estudio del frotis: serie blanca Leucograma Tipos de células: Agranulocitos Linfocitos: B y T Linfocitos grandes Linfocitos pequeños Monocitos Granulocitos Neutrófilos:» Segmentados» Cayado Eosinófilos Basófilos Linfocitos activados Neutrófilos tóxicos 28 14

15 Diferencial de blancos Técnica de la muralla almenada Contar leucocitos y determinar el % de cada tipo (fórmula leucocitaria) Nº absoluto de cada tipo= % de cada tipo x Nº total GB Técnica muralla almenada 29 Leucograma: valores fisiológicos Htc (%) G. Blancos (cel/µl) 4-12 x 10 3 Tipos de células (%) Totales /μl Linfocitos Neutrófilos segmentados Neutrófilos cayados Eosinófilos Basófilos Monocitos Formas jóvenes

16 Recuento leucocitario: LEUCOPENIA Leucopenia <4.000/μL Entre /μL se puede diferenciar entre linfopenia o neutropenia Infecciones víricas y bacterianas agudas por Gram ( ) Theileriosis Muy grave <2.000/μL Aplasia medular: Theileriosis hiperaguda (reproducción asexual: macroesquizontes en linfocitos) + formas intraeritrocitarias 31 Leucograma: LINFOCITOS Linfopenia Theileriosis Infecciones víricas agudas Vacas recién paridas 32 16

17 Lectura del frotis sanguíneo Escoger zona donde los eritrocitos estén en monocapa cerca unos de otros y movimientos en S por los bordes Su estudio, combinado con los resultados anteriores es de gran valor diagnóstico, pronóstico y de evolución del animal Técnica muralla almenada 33 Estudio del frotis: serie blanca 34 17

18 En resumen!! EN FROTIS Theilerias en el 70% de eritrocitos. Parasitación grave. Anemia regenerativa. Linfocitos reactivos

19 PCR para conocer la especie Otras formas clínicas de theileriosis Theileriosis clásica Curso más lento Primer síntoma: fiebre, agalaxia y anemia Theileriosis anaplasmoide En zonas endémicas, primeras fases de la theileriosis clásica o tras tratamiento (antes de prohibirse) Theileriosis secundaria a otros procesos en zonas endémicas, razas más resistentes En zonas endémicas y razas autóctonas más resistentes: avileñas, lidia, etc. Theileriosis hiperaguda

20 Theileriosis sobreaguda EN FROTIS Cuerpos azules de Kock (90% linfocitos) Linfocitos reactivos 50% GR parasitados Ausencia signos regeneración 39 eritroide Babesia bigemina Tropismo por la circulación periférica Gran tamaño Formas piriformes, aisladas o bigeminadas 40 20

21 Babesia bovis Pequeño tamaño Forma redondeada o lanceolada 41 4 Anaplasma marginale % situación marginal en eritrocitos Forma redondeada, densa y homogénea Pequeños corpúsculos intraeritrocitarios 42 21

22 Control y terapéutica Herramientas de control CONTROL DE VECTORES Vectores biológicos Vectores mecánicos Iatrogénica Ojo!!! Transmisión iatrogénica por agujas/jeringas 44 22

23 Ciclo evolutivo de Babesia Biológico Bovino Eritrócitos Divisão Hemólise Picada Picada Saliva Epitélio intestinal Carrapata Glândulas salivares da ninfa/larva TRANSMISSÃO TRANSOVARIANA Ovário Ovo Epitélio intestinal da larva 45 Ciclo evolutivo de Anaplasma Mecânico Picada de moscas ou agulhas (de um bovino para outro) Otros vectores Eritrócitos Divisão Corpúsculos de inclusão Bovino Picada Picada Saliva Epitélio intestinal Glândulas salivares da ninfa TRANSMISSÃO TRANSESTADIAL Ovário Ovo Carrapatas Biológico Epitélio intestinal da larva 46 23

24 Ciclo de T. annulata Otros vectores Hyalomma spp 47 Herramientas de control Transfusión de sangre Iatrogénica Garrapatas 48 Insectos picadores (Ej. Tábano) 24

25 Distribución Theileria: Hyalomma? Hyalomma spp 49 Control de vectores En EEUU se utilizó con éxito la eliminación de garrapatas para el control y erradicación de la babesiosis en algunos estados tratamientos cada 2-3 semanas (Pegram y col, 2000) Fundamental para reducir la incidencia de la enfermedad!!! 50 25

26 Control de vectores: acaricida Butox 7.5 pour on (deltametrina) protección duradera frente a garrapatas: Eficaz contra todas las fases del ciclo vital de las garrapatas. Inhibe la puesta e incubación de huevos Prolongada persistencia (4-5 semanas) 51 Terapéutica y profilaxis Imunidad co-infecciosa Sistema Imunológico ZONA ENZOÓTICA Cuándo tenemos casos clínicos? Equilíbrio Rotura equilibrio Agentes y/o Imunidad Agente 52 26

27 Terapéutica Cuándo tenemos casos clínicos? ZONA LIBRE Entrada animal infectado Afectación animales libres ZONA ENZOÓTICA Entrada animales no infectados a zona enzootica Equilíbrio 53 Quimioprofilaxis y terapéutica Babesiosis Imidocarb en terapéutica/ profilaxis Anaplasmosis Imidocarb en terapéutica Oxitetraciclina LA Theileriosis Buparvacuona Oxitetraciclina LA 54 27

28 Imidocarb Espectro de acción Prevención y terapéutica Actúa directamente sobre la glucolisis del parásito bloqueando la replicación del ADN Terapéutica Babesia argentina Babesia bigemina Babesia bovis Babesia divergens 55 Anaplasma marginale Imidocarb: dosificación Babesiosis: - Prevención: 2 mg imidocarb/kg p.v. 2,3 ml/100kg p.v. en dosis única SC. - Tratamiento: 1 mg imidocarb/kg p.v. 1 ml/100kg p.v. en dosis única SC. Anaplasmosis: - Tratamiento : 2,1 mg imidocarb /kg p.v. 2,5 ml/100kg p.v. en dosis única SC. Periodos de retirada: Carne: 213 días. Leche: 6 días

29 Imidocarb: uso profiláctico 57 Muchas gracias!!! 58 29