ESTUDIO DEL CONTENIDO DE HIDROCARBUROS AROMÁTICOS POLICÍCLICOS (HAPs) CARCINOGÉNICOS EN PESCADO Y MARISCO DE LA COMUNIDAD AUTÓNOMA VASCA
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- Alberto Reyes Vera
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1 ESTUDIO DEL CONTENIDO DE HIDROCARBUROS AROMÁTICOS POLICÍCLICOS (HAPs) CARCINOGÉNICOS EN PESCADO Y MARISCO DE LA COMUNIDAD AUTÓNOMA VASCA I.P.: Mª Dolores Guillén Lorén Ponente: Patricia Sopelana Garay Grupo de Investigación PROCAYSEAL (Procesado, Calidad y Seguridad Alimentaria) UPV/EHU
2 OBJETIVOS 1. Determinar el contenido de HAPs en los productos de la pesca más consumidos en la CAPV, incluyendo HAPs ligeros y pesados, así como sus derivados alquilados. Contribución a la valoración del grado de exposición de la población vasca a HAPs derivada del consumo de pescado y marisco
3 Objetivos 2. Avanzar en el desarrollo metodológico para la determinación y control de HAPs en pescado y marisco, estudiando las posibilidades de la Microextracción en Fase Sólida (SPME) seguida de Cromatografía de Gases/Espectrometría de Masas (CG/EM) para la extracción y determinación de estos contaminantes en productos de la pesca. Contribución al desarrollo de una metodología que permita estimar, de un modo sencillo y rápido, el grado de contaminación por HAPs de pescado y marisco, facilitando así su control
4 MUESTRAS OBJETO DE ESTUDIO PESCADO AZUL PESCADO BLANCO MOLUSCOS BIVALVOS MOLUSCOS CEFALÓPODOS Calamar-Sepia-Pulpo CRUSTÁCEOS Atún-Bonito-Salmón-Chicharro- Anchoa-Sardina-Salmonete Merluza-Gallo-Bacalao- Rape-Besugo-Lubina Mejillón-Almeja- Berberecho-Navaja Langostino-Gamba-Buey-Nécora- Cigala
5 METODOLOGÍA 1. Determinación de HAPs mediante SPME-CG/EM Extracción de HAPs mediante SPME aplicada al espacio de cabeza de las muestras (HS-SPME)
6 Metodología Tipo de fibra: PDMS/DVB, 65 µm Condiciones de extracción: 70 ºC - 55 min Desorción de los compuestos extraídos En el inyector del cromatógrafo de gases A 250 ºC durante 5 min Separación, identificación y semicuantificación de HAPs (CG/EM) Columna: HP-5-MS (60 m x 0,25 mm x 0,25 µm) Modo de adquisición: SIM y scan a la vez Identificación: SIM Semicuantificación: SIM
7 Metodología 2. Determinación de HAPs empleando una METODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CON DISOLVENTE (ED-CG/EM) TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA (KOH, metanol) Filtración EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO) Clarificación del extracto AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL) SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)
8 Metodología 2. Determinación de HAPs empleando una METODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CON DISOLVENTE (ED-CG/EM) TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA (KOH, metanol) Filtración EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO) Clarificación del extracto AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL) SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)
9 Metodología 2. Determinación de HAPs empleando una METODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CON DISOLVENTE (ED-CG/EM) TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA (KOH, metanol) Filtración EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO) Clarificación del extracto AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL) SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)
10 Metodología 2. Determinación de HAPs empleando una METODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CON DISOLVENTE (ED-CG/EM) TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA (KOH, metanol) Columna: HP-5-MS (60 m x 0,25 Filtración mm x 0,25 µm) Modo de adquisición: SIM Identificación: SIM EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO) Clarificación del extracto Cuantificación: SIM (patrones internos deuterados) AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL) SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)
11 RESULTADOS 1. Análisis de las muestras por SPME-CG/EM HAPs detectados 2 anillos 3 anillos 4 anillos Naftaleno + derivados mono- y di-metilados Acenafteno Fluoreno Acenaftileno Fenantreno + derivados mono-metilados Fluoranteno Pireno En todas las muestras de moluscos En menos de la mitad de las muestras de crustáceos y pescado
12 Resultados - SPME Abundancia de HAPs en los diferentes tipos de muestra Área total HAPs
13 Resultados - SPME Proporciones de los distintos tipos de HAPs % Naftaleno + derivados alquilados % Acenaftileno + Acenafteno + Fluoreno Biv Cef Crus P. "azul" P. P. blanco "blanco" % Fenantreno + derivados alquilados ,50 2,00 1,50 1,00 0,50 Biv Biv Cef Cef Crus P. "azul" P. "blanco" P. blanco % Fluoranteno + Pireno (4 anillos) 0 Biv Cef Crus P. "azul" P. "blanco" P. blanco 0,00 Biv Cef Crus P. azul P. blanco Biv Cef Crus P. "azul" P. "blanco"
14 Resultados - ED 2. Análisis del PERFIL COMPLETO de HAPs de una serie de muestras seleccionadas (ED-CG/EM) HAPs detectados 2 anillos 3 anillos 4 anillos 5 anillos 6 anillos Naftaleno + derivados mono- y di-metilados Acenafteno Fluoreno Acenaftileno Fenantreno + derivados mono- y di-metilados Fluoranteno Pireno + derivados mono-metilados Benzo(a)antraceno Criseno + trifenileno Benzofluorantenos Benzo(e)pireno Benzo(a)pireno Indeno(1,2,3-cd)pireno Benzo(ghi)perileno
15 Resultados - ED Grado de contaminación de los diferentes tipos de muestra CONCENTRACIÓN TOTAL de HAPs (µg/kg) ,29 µg/kg (49,59-60,98) ,31 µg/kg (27,40-63,80) 0 Biv Cef Crus P. azul P. blanco Biv Cef Crust P. "azul" P. "blanco" 126,88 µg/kg (57,19-301,17) 65,17 µg/kg (50,65 86,89) 85,87 µg/kg (35,69-183,08)
16 Resultados - ED Proporciones de los distintos tipos de HAPs % Naftaleno + derivados alquilados Resto de HAPs con 2-3 anillos Bivalvos Cefalópodos Crustáceos Pescado "azul" 10 Pescado "blanco" anillos 4 anillos 5+6 anillos
17 Resultados - ED Presencia de HAPs carcinogénicos Productos de la pesca FRESCOS Sólo límites para moluscos bivalvos (Reglamento (UE) Nº 835/2011) 0,10 19,17 µg/kg Suma: Benzo(a)antraceno Criseno Benzo(b)fluoranteno Benzo(a)pireno < 30 µg/kg 0,18-2,52 µg/kg Benzo(a)pireno < 5 µg/kg
18 Resultados - ED Moluscos bivalvos Otros HAPs posiblemente carcinogénicos en humanos según la clasificación de la IARC (grupo 2B) Indeno(1,2,3-cd)pireno Naftaleno Resto de productos estudiados HAP mayoritario También HAPs incluidos en el grupo 2B Naftaleno Benzo(a)antraceno
19 Resultados - SPME-ED 3. Comparación de los resultados obtenidos por SPME y ED SPME ED Muestra Área fluoranteno Área pireno [BaP] (µg/kg) Mejillón ,21 Mejillón ,70 Mejillón ,34 Almeja ,18 Jibión no detectado Atún no detectado Rape no detectado
20 CONCLUSIONES 1. Aun cuando los niveles de HAPs carcinogénicos en las muestras de moluscos bivalvos estudiadas se encuentran dentro de los límites establecidos por la legislación europea, es importante señalar la presencia de HAPs carcinogénicos en otro tipo de muestras para las cuales no existen límites. 2. Debería prestarse especial atención a naftaleno, ya que no sólo es un HAP con un grado de carcinogenicidad equivalente al de otros para los cuales existen límites, sino que además es el compuesto mayoritario en todas las muestras estudiadas.
21 Conclusiones 3. Sería conveniente implementar medidas para tratar de reducir el grado de contaminación de los moluscos bivalvos ya que, además de los HAPs contemplados en la legislación, pueden contener otros también carcinogénicos. 4. La SPME-CG/EM podría ser útil como herramienta de cribado para valorar de un modo sencillo y rápido el grado de contaminación por HAPs en muestras de pescado y marisco.
22 ESTUDIO DEL CONTENIDO DE HIDROCARBUROS AROMÁTICOS POLICÍCLICOS (HAPs) CARCINOGÉNICOS EN PESCADO Y MARISCO DE LA COMUNIDAD AUTÓNOMA VASCA I.P.: Mª Dolores Guillén Lorén Ponente: Patricia Sopelana Garay Grupo de Investigación PROCAYSEAL (Procesado, Calidad y Seguridad Alimentaria) UPV/EHU
TOTAL PESCADO TOTAL MARISCO TOTAL SECTOR
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