LABORATORIO N 10 DETERMINACIÓN DE VIH 1 Y 2

Transcripción

1 LABORATORIO N 10 DETERMINACIÓN DE VIH 1 Y 2 1

2 Prevalencias de VIH en la Región Mesoamericana País No. De personas con VIH+ Belice Costa Rica Salvador 35, Guatemala 59, Honduras 28, Nicaragua Panamá 20, Rep. Dominicana 62, México 200, Prevalencia 2

3 Inmunodeficiencias: Grupo de enfermedades que comprenden diversos estados caracterizados clínicamente por aumento en la susceptibilidad a las infecciones con la consiguiente enfermedad aguda, grave, recurrente y crónica debido a uno o más defectos en el sistema inmunitario. Inmunodeficiencia Secundaria: Pérdida de inmunidad causada por un proceso patológico o efecto tóxico de una mediación, en lugar de fallo o defecto en los linfocitos T y B Inmunodeficiente: Relativo al trastorno del sistema inmune en el que la inmunidad humoral o celular es infrecuente y está disminuida la resistencia a la infección. Inmunorregulación: Control de funciones de respuesta inmunológica, como en el caso de la manipulación de los circuitos de linfocitos supresores y antisupresores 3

4 Clasificación de las Inmunodeficiencias 1. Inmunodeficiencia Combinada de cel T y B. 2. Inmunodeficiencia de Ac. 3. Otros Síndromes bien Definidos Asociados a Inmunodeficiencias. 4. Enfermedades por Disregulación Inmunológicas. 5. Defectos Congénitos en número y / o función de Fagocitos. 6. Defecto en la Inmunidad Innata. 7. Desórdenes Autoinflamatorios. 8. Deficiencias de Complemento 4

5 Inmunodeficiencias: Deficiencia Hematopoyética general. Deficiencia fagocítica mixta con normalidad linfocitaria. Enfermedad de Chediak Higashi. Deficiencias de Mieloperoxidasa en los polimorfonucleares. Defectos selectivos de los neutrófilos. Deficiencias asociadas a los linfocitos T y B. Deficiencias de Linfocitos B. (agamaglobulinemia primaria enfermedad de Burton.) Defecto de Maduración de Linfocito B. Deficiencia de linfocitos T (Síndrome de Di George, Síndrome de Nezelof, Ataxia telangiectaxia). Deficiencia de Maduración de los linfocitos T (deficiencia en linfoquinas, MIF). Disfunción asociada de linfocitos T y B, atribuida a defectos de los Macrófagos (Wiskott-Aldrich) Deficiencia del CMH- deficiencia primaria autosómica 5

6 Nombres Relacionados con el VIH LAV: Virus Relacionado a Linfoadenopatias. : Dr. Luc Montaigne HTLVIII: Virus Linfotrópico de las Células Humanas Tipo III.: Dr. Robert Gallo. ARC: Complejo Relacionado al SIDA. VRS: Virus Relacionado al SIDA. VIH: Virus de la Inmunodeficiencia Adquirida. SIDA: Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida:

7 Origen: Mono Africano: Pan troglodytes troglodytes Cercocebus atys Creado en Lab. Comida de Mono. Aparece en Ier Caso Sero-Positivo 1959 Emerge como AIDS o SIDA : 1981 Se identifica en : 1983 el HIV-1 Se identifica en : 1986 el HIV-2 Se inicia la Terapia Anti Retro Viral Actualmente: Se sigue buscando una Vacuna 7

8 Ciclo de un Virus Cualquiera: 8

9 Generalidades: Agente Causal: Virus de la Inmunodeficiencia Humana. Familia: Retroviridae. Forma: Esférica. Tamaño: Aproximadamente 1000 Amsgtron ( 1 milésima de milímetro.) Se compone de 3 capas: Capa Externa o Envoltura: compuesta por una bicapa lipídica en la misma se enclavan glicoproteínas a las que se unen azúcares. Ejm: GP 41 y GP120. Capa Intermedia: La cual contiene la nucleocápside icosahédrica, contiene las proteínas denominadas p24 y p18. 9

10 Generalidades: Capa Interna: Contiene una especie de nucleoide donde se encuentra el RNA viral, juntamente con varias copias de la enzima denominada retrotanscriptasa, la cual cataliza el ensamblaje del DNA viral. Posee Genes Estructurales y Genes Reguladores: Genes Estructurales: 1. GAP de grupo : forma parte del Core, función: Síntesis de DNA e integración, ensamblaje de partículas víricas y salida de células. 10

11 Generalidades: 2. Pol: de Polimerasa:, transcriptasa inversa y proteasas, su función: síntesis de DNA e integración en genoma celular. 3. Env: de Envoltura:. Interviene en la asociación y entrada del virus en la célula, se le denomina también antígeno de entrada. o Genes Reguladores: o Posee 7 genes reguladores los más importantes son el tat de la transactivadora de todas las proteínas y el rev que es procreadora del ARNm y su transporte selectivo en el citoplasma. 11

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15 Generalidades: Variabilidad Genética: 2 tipos VIH 1 y VIH 2 (clínicamente indistinguible) genéticamente y antigénicamente diferente. VIH 1: responsable de la Pandemia. Subtipo N, M y O. Subtipo M: A,B,C,D, F,G,H,J,K. Sub-Subtipos: A y F. Formas Recombinantes: CRFs y URFs VIH 2 : Endémico en África Oriental. Diagnóstico: Período Asintomático: Laboratorio: Se busca Ac Títulos Altos. Presentes por ELISA y se confirma por Western blot.- Viremia y Número de Linfocitos CD4+ son variables. 15

16 Generalidades: Período Agudo: Exantema, fiebre, adenopatías, mialgias, etc. Laboratorio: ELISA no sirve, hay que buscar p-24, cultivo, PCR, o Carga viral Hay una alta viremia en ausencia de Ac. Período de SIDA: Inmunosupresión e Infecciones oportunistas. Laboratorio: ELISA Western Blot, para comprobar infección y demostrar los agentes causales dela infecciones oportunistas. Alta viremia y bajo número de linfocitos CD4+. 16

17 Generalidades: Células Blanco del VIH: Macrófagos y monocitos, células foliculares Dendríticas, Linfocitos T. Ciclo Replicativo: 1- Infección de células en el sitio de entrada Interacción ligando viral con receptor celular Ligando del VIH: gp120 Receptor celular: CD4 y CCR5 o CXCR4 Integración genómica y generación de viriones 2- Migración de las células infectadas 3- Replicación viral en ganglios linfáticos Receptor CCR5: Es un receptor de citoquinas presente en la membrana de los macrófagos. El receptor de CCR5 juega un papel crucial para la entrada del VIH1 al macrófago. Existe tropismo del VIH a los receptores CXCR4 de las células T. 17

18 Reconocimiento: 18

19 Adhesión y Fusión: 19

20 Producción de Cadenas de Proteínas: 20

21 Integración al ADN celular: 21

22 Ensamblaje Viral: 22

23 Transcripción: 23

24 Transcripción: 24

25 Formación de un nuevo Virus: 25

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28 Ciclo del Virus del VIH + 28

29 Principales Síntomas del VIH+ Fiebres inexplicables. Sudor y escalofrío nocturno. Inflamación de los ganglios linfáticos. Diarreas de mas de 15 días. Perdida de peso. Dificultad al comer. Fatiga. Apatía. Depresión. Disminución ocasional de la libido e impotencia. Multiplicidad de Enfermedades Oportunistas. 29

30 Clasificación del paciente de SIDA según el CDC Atlanta Se clasifican en 4 grandes grupos. Y el 4 grupo en 5 subgrupos. Características: Grupo I: Cuadro Clínico muy similar a una mononucleosis - de corta duración implica el paso de serología negativa a positiva. Grupo II: Paciente completamente asintomático, aunque puede presentar alteraciones en los exámenes de Laboratorio. Grupo III: Presenta linfoadenopatías Generalizadas Persistentes en 2 o más sitios extra inguinales. 30

31 Clasificación del paciente de SIDA según el CDC Atlanta Grupo IV: Es el Paciente de SIDA Subgrupo A: Enfermedad constitucional presentan perdida de peso, diarreas de más de 15 días, fiebre prolongada. Subgrupo B: Enfermedad neurológica Demencia. Subgrupo C: Enfermedad infecciosa, se subdivide en C1 y C2; C1: invasión sistémica de una o más de las siguientes infecciones: Pneumocystes carinii, Cristosporidium, Toxoplasmosis, Isospora, Candidiasis esofágica y broncopulmonar, Criptococos, Histoplasma, Micobacterias Atípicas, CMV, Herpes Simple, Leucoencefalopatía multifocal y Estrongiloidiasis. 31

32 Clasificación del paciente de SIDA según el CDC Atlanta. C2: Pacientes con las enfermedades siguientes: Leucoplaquia oral velluda, Herpes Zoster multidérmico, sepsis por Salmonella, Nocardiosis, Tuberculosis, Cándida Oral. Subgrupo D: Cánceres Secundarios: Sarcoma de Kaposi, linfomas de Hodgking, linfoma primario del cerebro y cualquier otro cáncer asociado. Subgrupo E: Otras condiciones enumerada anteriormente y que en la actualidad o en el futuro pueda ser atribuida al SIDA 32

33 Pruebas de Laboratorio Existen pruebas de screening (rápidas, tamizaje y confirmatorias.) P. Rápidas: Principio: Ensayos inmunocromatográficos lineales, para la detección cualitativa de anticuerpos de HIV 1/2. El suero o plasma se añade al pocillo, la superficie lo absorbe, mientras la muestra traspasa el conjugado se reconstituye y se mezcla con los antígenos recombinantes, al darse la reacción aparece una barra roja en el siguiente pocillo y luego la del control. Positivo: raya roja en control y muestra Negativo: raya roja sólo en control Invalidado: ninguna raya o sólo en la muestra. 33

34 Prueba de Casette (Prueba Rápida) 34

35 Prueba por ELISA Diagnóstico: EIA Ensayo Inmuno-enzimático EIA tercera generación: Ac EIA cuarta generación: Ag/Ac Ac GP 160 GP 120 P55 GP41 P 31 P 24 35

36 Prueba del Western Blot 36

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40 Determinación de VIH 1 y 2 en Laboratorio: Determinación de CD4+: IFA o Citometría. Carga Viral: Es la cantidad de Virus que puede ser medido en la sangre o en otro fluido corporal o en los tejidos. Sirve para pronosticar el índice de avance del VIH. Métodos existentes: Los 3 reconocidos y más aceptados. Amplicor HIV-1 monitor.-nasba HIV-1, QUANTIPLEX HIV-1. Principio: Los 2 primeros se basan en la amplificación del ARN del VIH-1, el último no amplifica el ARN sino que amplifica la señal obtenida mediante sondas de oligonucleótidos b-dna. 40

41 Determinación de VIH 1y 2 en Laboratorio. Metodología: compuesta de 5 pasos: 1-preparación de la muestra,2- transcripción inversa.3- Amplificación por PCR y amplificación selectiva del ADNc. 4- Hibridación de los productos amplificados con sondas oligonuclotídicas especificas. 5-Detección. Interpretación de los resultados: Niveles bajos y decrecientes son buenos resultados. Nivel alto puede indicar producción de virus y resistencia a la droga.- Carga viral baja: es aquella que se encuentra por debajo de las copias/ml.- Carga viral alta: es aquella que se encuentra por arriba de copias /ml. Importante tener el recuento de CD4+.- Si los resultados de CD4+, caen por debajo de 50 células disminuye la utilidad de la Carga Viral.- Un solo examen no indica una tendencia, es necesario repetir en casos de aproximación de resultados. 41

42 VIH- Inmunodeficiencias Pruebas de Laboratorio para evaluar resistencia.: Genotipaje o Genotipificación y Fenotipaje o Fenotipificación. Genotipaje: basado en la amplificación del material genético y secuenciamiento o hibridación. Este método determina la presencia de mutaciones en el genoma viral asociadas a resistencia a drogas antiretrovirales por medio del uso de métodos moleculares. Fenotipaje: Basado en el crecimiento del virus original (o de uno Recombinante ) y exposición del mismo a los agentes terapéuticos. Similar a un antibiograma o sea que involucra el cultivo del virus en presencia de diferentes drogas. 42

43 Tratamiento Va a estar dirigido a: 1-Disminuir la cantidad de virus : a) Inhibidores de la enzima Transcriptasa Inversa: Análogos de nucleósidos: AZT, 3TC, ddi. Análogos no nucleósidos: NVP, DLV. b)inhibir las Proteasas: Indinavir, Ritonavir, Nelfinavir, Saquinavir. c) Inhibidores de Fusión: Enfuvirtida, T-20 43

44 Tratamiento 2- Potenciar el sistema inmune: vacunas contra microorganismos prevalentes- Inmunomoduladores IL2. 3- Profilaxis y tratamiento de las infecciones oportunistas. Seguimiento del paciente clínico : búsqueda de signos de deterioro o aparición de infecciones oportunistas. Laboratorio: conteo de CD4 y Carga Viral. Prevención: Búsqueda de contactos, evitar contagiar a otras personas, Educación comunitaria, Vacuna (fase de estudio Clínico.) 44

45 Medicamentos utilizados Inhibidores de TI Análogos de Nucleósidos Zidovudina (AZT, ZDV) Didanosina (ddi) Zalcitabina (ddc) Estavudina (d4t) Lamivudina (3TC) Abacavir (ABC) Emtricitabina (FTC) Tenofovir (TDF) Inhibidores de TI No Análogos de Nucleósidos Nevirapina (NVP) Delavirdina (DLV) Efavirenz (EFV) Etravirina (TMC 125) Inhibidores de Integrasa Raltegravir (RAL) Inhibidores de Proteasa Saquinavir (SQV) Ritonavir (RTV) Indinavir (IDV) Nelfinavir (NFV) Amprenavir (APV) Fosamprenavir (FPV) Lopinavir (LPV/r) Atazanavir (ATV) Tipranavir (TPV) Darunavir (DRV) Inhibidores de Fusión Enfurvirtida (T-20, ENF) Antagonistas de CCR5 Maraviroc (MVC) 45

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