MANUAL PARA TOMA Y REMISIÓN DE MUESTRAS AL LABORATORIO NACIONAL DE REFERENCIA PARA LAS ENCEFALOPATÍAS ESPONGIFORMES TRANSMISIBLES (EETs).

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1 MANUAL PARA TOMA Y REMISIÓN DE MUESTRAS AL LABORATORIO NACIONAL DE REFERENCIA PARA LAS ENCEFALOPATÍAS ESPONGIFORMES TRANSMISIBLES (EETs). LCV ALGETE REV. ABRIL

2 E presente Manua es un documento de trabajo para os Servicios Veterinarios Oficiaes de as Comunidades Autónomas. E objetivo de este documento es procurar a Coordinación entre os diferentes agentes impicados en a vigiancia y diagnóstico de as EETs, estabeciendo unos criterios uniformes para a toma de muestras y su posterior remisión a Laboratorio Naciona de Referencia (Laboratorio Centra de Veterinaria de Agete). 2

3 LABORATORIO CENTRAL DE VETERINARIA (LCV) DE ALGETE CCAA: MADRID Provincia: MADRID Municipio: Agete Dirección: Crta. M106 pkm. 1,4 D.P.: Teéfono: Fax: Directora: Montserrat Agüero García 3

4 SECRETARÍA DE I. VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA DE LAS EETs 1.- VIGILANCIA EN GANADO BOVINO (EEB). A.- VIGILANCIA ACTIVA. La vigiancia activa recogida en e Programa Naciona de 2013, se adapta a os cambios normativos tanto comunitarios como nacionaes reativos a as modificaciones de as edades de os animaes objeto de muestreo obigatorio. E programa de seguimiento activo, va encaminado a a búsqueda efectiva de a enfermedad, mediante e contro de determinadas pobaciones de animaes de consumo y animaes de riesgo, no comunicados como sospechosos de una infección por una EET. Además, e objetivo de a vigiancia activa es determinar a evoución y a prevaencia de a EEB. En e año 2013 se reaizará un seguimiento de as subpobaciones de animaes que se describen a continuación mediante a reaización de pruebas de diagnóstico rápido en os aboratorios autorizados por as CCAA. A.1. Animaes sacrificados para consumo humano: Se reaizarán pruebas de EEB a: A Todos os animaes nacidos en países incuidos en e Anexo de a Decisión 2011/358/UE y modificaciones por a que se autoriza a determinados Estados Miembros a revisar su programa anua de seguimiento de a EEB, de os siguientes grupos de edad: a) Mayores de setenta y dos (72) meses siempre que se trate de: 1º.- Animaes sacrificados de manera norma para e consumo humano, 2º.- Animaes sacrificados en e marco de a ejecución de Rea Decreto 2611/1996, de 20 de diciembre, por e que se reguan os programas nacionaes de erradicación de 4

5 enfermedades de os animaes, siempre que en este útimo caso no presenten signos cínicos de a enfermedad. b) Mayores de treinta y seis (36) meses de edad si se trata de animaes que sean sometidos a un sacrificio de urgencia, o aqueos que muestren aguna sintomatoogía cínica de aguna enfermedad en a inspección ante-mortem, o sean sospechosos de padecer una enfermedad o haarse en un estado de saud que pueda perjudicar a a saud de as personas savo os previstos en e párrafo a).2º anterior. A Todos os animaes nacidos en países no incuidos en e Anexo de a Decisión 2011/358/UE y modificaciones y por o tanto son países no autorizados a revisar su programa anua de seguimiento de a EEB, de os siguientes grupos de edad: de: a) Mayores de treinta meses (30) de edad siempre que se trate 1º.- Animaes sacrificados de manera norma para e consumo humano, o 2º.- Animaes sacrificados en e marco de a ejecución de Rea Decreto 2611/1996, de 20 de diciembre, por e que se reguan os programas nacionaes de erradicación de enfermedades de os animaes, siempre que en este útimo caso no presenten signos cínicos de a enfermedad. b) Mayores de veinticuatro (24) meses de edad si se trata de animaes que sean sometidos a un sacrificio de urgencia, o aqueos que muestren aguna sintomatoogía cínica de aguna enfermedad en a inspección ante-mortem, o sean sospechosos de padecer una enfermedad o haarse en un estado de saud que pueda perjudicar a a saud de as personas savo os previstos en e párrafo a).2º anterior. Este muestreo es e vigente en a fecha de eaboración de programa (abri 2012). Podrá sufrir modificaciones para adaptarse a os nuevos dictámenes científicos de EFSA y a os cambios en a normativa europea y naciona. Se entiende como sacrificio especia de urgencia, a todo sacrificio ordenado por un veterinario a raíz de un accidente o de trastornos fisioógicos y funcionaes graves de anima. E sacrificio especia de urgencia podrá tener ugar fuera de matadero 5 Amagro, 33

6 cuando e veterinario considere que e transporte de anima resuta imposibe o supondría sufrimientos inúties para e anima. Se entiende como animaes que muestren signos cínicos de aguna patoogía detectada en a inspección ante mortem, aqueos animaes que, tras sufrir a inspección ante mortem, presenten síntomas, estén afectados o sean sospechosos de aguna enfermedad transmisibe a hombre o a os animaes (excuyendo as EETs, en cuyo caso se considerarían sospechosos de EETs), así como os animaes con síntomas de una enfermedad o perturbación de su estado genera que pueda motivar que sus carnes sean inadecuadas para e consumo humano. La consideración que tengan estos animaes de aptos para consumo humano será determinada por os servicios veterinarios de matadero, en base a a normativa en vigor. Se exceptuaran de esta consideración, os animaes sin síntomas cínicos de a enfermedad, sacrificados en e marco de una campaña de erradicación de enfermedades de as estabecidas en e Rea Decreto 2611/1996, que serán considerados en e epígrafe que corresponde en función de destino fina de esas canaes. A.2. Animaes muertos y no sacrificados para consumo humano mayores de cuarenta y ocho (48) meses: Se reaizarán pruebas de a EEB a todos os animaes bovinos mayores de cuarenta y ocho meses de edad que hayan muerto o hayan sido sacrificados, pero que no fueron sacrificados en e marco de una epidemia, como es e caso de a fiebre aftosa. No obstante, si se trata de animaes nacidos en países no recogidos en e anexo de a Decisión 2011/358/UE y modificaciones, se reaizarán pruebas de a EEB a todos os animaes bovinos mayores de veinticuatro meses. Se incuyen específicamente as siguientes subpobaciones: - Animaes bovinos muertos en expotación o durante e transporte. - Animaes bovinos que hayan sido sacrificados, pero no para consumo humano ni en e marco de una epidemia, bien en expotación o, excepcionamente, en matadero hasta que se disponga de estabecimientos o instaaciones específicas, incuidos animaes de campañas de erradicación de enfermedades de as estabecidas en e 6 Amagro, 33

7 Rea Decreto 2611/1996, desvieje o simiares no destinados a consumo humano. NOTA: Todo anima que, habiendo mostrado síntomas compatibes con a EEB, muera o se sacrifique en a expotación, será casificado dentro de a subpobación de anima sospechoso, y por o tanto se tratará como se describe en e apartado B a continuación. Los animaes bovinos sacrificados como apicación de as medidas de erradicación de un foco de EEB, y pertenecientes a a pobación de riesgo (descendientes y cohorte de edad) se muestrearán todos en base a a investigación epidemioógica que se reaice en ese foco. En caso de que e resutado de as pruebas rápidas reaizadas fuera positivo o dudoso, se remitirá a muestra para su anáisis mediante pruebas de confirmación a Laboratorio Naciona de Referencia para as EET (LCV Agete). B.- VIGILANCIA PASIVA. La vigiancia pasiva de a enfermedad consiste, básicamente, en a detección de animaes positivos debido a a comunicación por parte de veterinarios o ganaderos/responsabes de os animaes o de a aparición de animaes con sintomatoogía cínica compatibe con EETs. Todos os animaes sospechosos por sintomatoogía (definidos en e apartado 4.6. B de Programa Naciona de Vigiancia para a EEB) se someterán a contro, independientemente de su edad, mediante pruebas de confirmación en e Laboratorio Naciona de Referencia para as EET (LCV Agete). Se someterán a contro mediante pruebas de confirmación, estabecidas en e Manua OIE: B.1.- Todos os animaes sospechosos por sintomatoogía (todo anima vivo, sacrificado o muerto que presente o haya presentado anomaías neuroógicas o de comportamiento o trastorno de SNC, con respecto a os cuaes no se pueda estabecer otro diagnóstico a tenor de un examen cínico, de a respuesta a un tratamiento, de un examen post mortem o tras un anáisis de aboratorio ante o post mortem). 7 Amagro, 33

8 B.2.- Todos os animaes de os grupos A1 y A2 antes especificados, cuya muestra haya resutado positiva o dudosa a test rápidos en os aboratorios autorizados. En todo momento, os animaes descritos como sospechosos de padecer una EET (apartados B1 y B2) se someterán a contro mediante métodos y protocoos de confirmación, estabecidos en e Manua OIE. Cuando e resutado de examen histopatoógico sea dudoso o negativo, o cuando e materia se haya autoisado, os tejidos se someterán a examen según uno de os otros métodos de diagnóstico estabecidos en e citado Manua (inmunocitoquímica, inmunotransferencia, demostración de as fibrias características mediante microscopía eectrónica o una combinación de tests rápidos) definidos en e punto C.2,, descrito a continuación. Estas muestras han de remitirse a Laboratorio Naciona de Referencia de EETs. C. PRUEBAS A REALIZAR EN LA ESPECIE BOVINA. C.1. PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO. Las autorizadas para a especie bovina en e punto 4 de Capítuo C de Anexo X de Regamento 999/2001. prueba de inmunotransferencia basada en un procedimiento de Western bot para a detección de fragmento PrP Res resistente a a proteinasa K (Prionics-Check Western test), prueba ELISA de quimiouminiscencia con un procedimiento de extracción y una técnica ELISA donde se utiice un reactivo quimiouminiscente intensificado (Enfer test y Enfer TSE Kit version 2.0, preparación de a muestra automatizada), inmunoanáisis basado en una micropaca para a detección de PrP Sc (Enfer TSE version 3), inmunoanáisis de dobe anticuerpo (método sándwich) para a detección de a PrP Res (protocoo de ensayo corto), efectuado tras una fase de desnaturaización y otra de concentración (Bio-Rad TeSeE SAP Rapid test), 8 Amagro, 33

9 inmunoanáisis basado en una micropaca (ELISA) para a detección de PrP Res resistente a a proteinasa K con anticuerpos monoconaes (Prionics-Check LIA test), inmunoanáisis en e que utiice un poímero químico para a captura seectiva de PrP Sc y un anticuerpo de detección monocona dirigido contra regiones conservadas de a moécua PrP (IDEXX HerdChek BSE Antigen Test Kit, EIA e IDEXX HerdChek BSE-Scrapie Antigen Test Kit, EIA), inmunoanáisis de fujo atera que utiice dos anticuerpos monoconaes diferentes para a detección de fracciones de PrP resistentes a a proteinasa K (Prionics Check PrioSTRIP), inmunoanáisis de dobe anticuerpo que utiice dos anticuerpos monoconaes diferentes dirigidos contra dos epitopos presentes en a PrP Sc bovina en estado muy despegado (Roboscreen Beta Prion BSE EIA Test Kit), prueba ELISA de dobe anticuerpo (método sándwich) para a detección de PrP Sc resistente a a proteinasa K (Roche Appied Science PrionScreen). C.2. PRUEBAS DE CONFIRMACIÓN. Se someterán inmediatamente a métodos y protocoos de confirmación todos os animaes de os grupos A1 y A2 de vigiancia activa cuyo resutado haya sido dudoso o positivo así como todos os animaes sospechosos por sintomatoogía definidos en e apartado 4.6_B, siendo os métodos de confirmación os descritos en a útima edición de Manua OIE y en e regamento de a Unión Europea 162/2009: método inmunohistoquímico, inmunotransferencia SAF o una aternativa autorizada por a OIE, observación de as fibrias características por microscopía eectrónica, examen histopatoógico o combinación de pruebas de diagnóstico rápido. Cuando e resutado de examen histopatoógico sea dudoso o negativo, o cuando e materia se haya autoisado, os tejidos se someterán a examen según uno de os otros métodos de diagnóstico estabecidos en e citado Manua. 9 Amagro, 33

10 Las muestras para confirmación se remitirán a LNR para as EETs (LCV Agete). Si e resutado es negativo, e anima será considerado negativo. En e LNR de Agete se reaizarán simutáneamente as pruebas de confirmación que se consideren necesarias entre as que pueden encontrarse: Histopatoogía, Inmunohistoquímica, Inmunotransferencia SAF o una aternativa autorizada por a OIE o combinación de tests rápidos. Cuando e resutado de uno de dichos anáisis en e LNR para as EETs (LCV Agete) sea positivo, se considerará a os animaes examinados como positivos a EEB. En e caso de animaes positivos a EEB, será necesario discriminar a cepa de EEB que es afecta, casificándoos en: EEB tipo Cásico, EEB tipo Low (L) o EEB tipo High (H). Esta discriminación será reaizada en e LNR para as EETs (LCV Agete) mediante as pruebas moecuares que sean necesarias. Confirmación de casos sospechosos por tests rápidos. Los tests rápidos de diagnósticos podrán empearse para un cribado en supuestos casos sospechosos, en caso de ser e resutado positivo o dudoso, y para su subsiguiente confirmación, se seguirán as siguientes pautas dictadas por e Laboratorio de Referencia Comunitario (LR-UE): - La confirmación se reaizará en e Laboratorio Naciona de Referencia para EETs. - E segundo test rápido usado debe de incuir tejido de bovino positivo y negativo como contro. - E segundo test rápido usado debe de ser diferente (dos resutados por e mismo test, son insuficientes para a confirmación de caso) - Si e primer test usado ha sido uno basado en inmunotransferencia, e resutado debe ser documentado y presentado a LCV. 10 Amagro, 33

11 - Uno de os dos test rápidos reaizados debe de estar basado en inmunotransferencia. - Cuando os resutados de os test rápidos reaizados no sean concordantes, a muestra debe ser sometida a uno de os métodos de confirmación anteriormente descritos. En caso de reaizarse un examen histopatoógico y e resutado es negativo o no concuyente o cuando e materia se haya autoisado, os tejidos serán anaizados por aguno de os otros métodos de confirmación. Todo anima será considerado como caso positivo si e resutado de os test rápidos ha resutado positivo o no concuyente, y a menos uno de os métodos confirmatorios es positivo. En e Cuadro 1. se presenta e esquema de fujo de muestras hasta e LNR EET. VIGILANCIA ACTIVA VIGILANCIA PASIVA (SOSPECHAS CLÍNICAS) LABORATORIO AUTONOMICO PARA PRUEBAS RÁPIDAS NEGATIVO POSITIVO O DUDOSO LNR EET (LCV ALGETE) Cuadro 1. Esquema de fujo de muestras hasta e LNR. 11 Amagro, 33

12 En e Cuadro 2 se presenta e diagrama de anáisis que se reaizan en e LNR de EETs de Agete para a especie Bovina. Diagrama de Anáisis en Bovino Toma de muestra Laboratorio Autorizado Centro Naciona de Referencia de EETs Anáisis por pruebas rápidas Anáisis por pruebas rápidas Negativo Positivo / Dudoso Positivo / Sospechoso / Dudoso Negativo Centro Naciona de Referencia de EETs Rechazada TÉCNICAS DE CONFIRMACIÓN Western Bot Confirmatorio Combinación Test Rápidos* Inmunohistoquímica Histoogía Negativo Positivo / EEB Cásico Negativo Negativo Positivo Positivo / EEB Negativo No No Cásico Concuyente Concuyente Positivo TÉCNICAS DE DISCRIMINACIÓN No Apta Western Bot con varios Acs Tratamiento PK * Eección habitua EEB Cásica EEB Tipo Low EEB Tipo High Cuadro 2. Diagrama de fujo de anáisis reaizados en e LNR de EETs para a especie bovina. 12 Amagro, 33

13 2.- VIGILANCIA EN GANADO OVINO / CAPRINO (Tembadera). A.- VIGILANCIA ACTIVA. Se reaizará un seguimiento de as subpobaciones de animaes que se describen a continuación mediante a reaización de pruebas de diagnóstico rápido en os aboratorios autorizados por as CCAA en una muestra de animaes que se determinará para cada CCAA en virtud de os requisitos estabecidos en os Programas anuaes de Vigiancia y Contro de EET. A.1 Animaes sacrificados para consumo humano, mayores de 18 meses o en cuya encía hayan hecho erupción 2 incisivos definitivos. A.2 Animaes no sacrificados para consumo humano, mayores de 18 meses o en cuya encía hayan hecho erupción 2 incisivos definitivos: 2.1. Animaes muertos en expotación Animaes que hayan sido sacrificados, pero no para consumo humano ni en e marco de una campaña de erradicación de enfermedades de as estabecidas en e Rea Decreto 2611/ Animaes ovinos/caprinos de sacrificio de erradicación pertenecientes a a pobación de riesgo (descendientes y cohorte de edad). La muestra será representativa para cada región y temporada. La seección de a muestra estará destinada a evitar una representación excesiva de cuaquier grupo por o que se refiere a origen, a especie, a edad, a raza, e tipo de producción o cuaquier otra característica. La edad de anima se estimará en función de a dentadura, signos evidentes de madurez u otra información fiabe. Se evitará, siempre que sea posibe, reaizar un muestreo mútipe en e mismo rebaño. 13 Amagro, 33

14 NOTA: Todo anima que, habiendo mostrado síntomas compatibes con a EET, muera o se sacrifique en a expotación, o sea detectado en matadero será casificado dentro de a subpobación de anima sospechoso, y por o tanto se tratará como se describe en e apartado B a continuación. En caso de que e resutado de as pruebas rápidas reaizadas fuera positivo o dudoso, se remitirá muestra para anáisis mediante pruebas de confirmación a Laboratorio Naciona de Referencia para as EET (LCV Agete). B.- VIGILANCIA PASIVA. La vigiancia pasiva de a enfermedad consiste, básicamente, en a detección de animaes positivos mediante a comunicación por parte de veterinarios o ganaderos/responsabes de os animaes o de a aparición de animaes con sintomatoogía cínica compatibe con EETs. Todos os animaes sospechosos por sintomatoogía (todo anima vivo, sacrificado o muerto que presente o haya presentado anomaías neuroógicas o de comportamiento o trastorno de SNC, con respecto a os cuaes no se pueda estabecer otro diagnóstico a tenor de un examen cínico, de a respuesta a un tratamiento, de un examen post mortem o tras un anáisis de aboratorio ante o post mortem) se someterán a contro mediante pruebas de confirmación en e Laboratorio Naciona de Referencia para as EET (LCV Agete). En e apartado II de este manua para a vigiancia epidemioógica de EET, se describe con detae e procedimiento de toma, remisión y anáisis aboratoria de as muestras de ovinos y caprinos sospechosos a EET (paginas 20). Para conocer con más detae cómo detectar a os ovinos y caprinos que manifiestan un comportamiento o signos cínicos compatibes con encefaopatía espongiforme transmisibe se recomienda visitar a página de internet de aboratorio comunitario de referencia: La sintomatoogía es a menudo poco perceptibe y quienes mejor pueden identificara son as personas que se ocupan de os animaes a diario. Conviene advertir que hay casos de animaes que manifiestan 14 Amagro, 33

15 sóo agunos de estos signos, os cuaes pueden también variar en intensidad. E porcentaje de casos sospechosos variará según as situaciones epidemioógicas y, por tanto, no se puede predecir de manera fiabe. No obstante, esta subpobación demuestra tener una prevaencia eevada. La identificación, decaración y casificación precisa de estos animaes dependerá de programa permanente de concienciación de os ganaderos y veterinarios. Este programa y a caidad de os sistemas de investigación y anáisis en aboratorio que empeen os Servicios Veterinarios son esenciaes para a credibiidad de sistema de vigiancia. C. PRUEBAS A REALIZAR EN LAS ESPECIES OVINA Y CAPRINA PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO C.1.- PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO Las autorizadas para as especies ovina y caprina en e punto 4 de Capítuo C de Anexo X de Regamento 999/2001. inmunoanáisis de dobe anticuerpo (método sándwich) para a detección de PrPRes (protocoo de ensayo corto), efectuado tras una fase de desnaturaización y otra de concentración (Bio-Rad TeSeE SAP rapid test), inmunoanáisis de dobe anticuerpo (método sándwich) para a detección de PrPRes con e TeSeE Sheep/Goat Detection kit, efectuado tras una fase de desnaturaización y otra de concentración con e TeSeE Sheep/Goat Purification kit (Bio-Rad TeSeE Sheep/Goat rapid test), inmunoanáisis en e que se utiice un poímero químico para a captura seectiva de PrPSc y un anticuerpo de detección monocona dirigido contra regiones conservadas de a moécua PrP (IDEXX HerdChek BSE-Scrapie Antigen Test Kit, EIA), inmunoanáisis de fujo atera que utiice dos anticuerpos monoconaes diferentes para a detección de fracciones de PrP resistentes a a proteinasa K (Prionics Check PrioSTRIP SR (protocoo de ectura visua)). 15 Amagro, 33

16 C.2.- PRUEBAS DE CONFIRMACIÓN Las muestras procedentes de Vigiancia Pasiva (sospechas cínicas) se someterán a contro mediante métodos de confirmación descritos en a útima edición de Manua OIE y en e Regamento 162/2009: método inmunohistoquímico, inmunotransferencia SAF o una aternativa autorizada por a OIE, observación de as fibrias características por microscopía eectrónica o examen histopatoógico. Si e examen histopatoógico es dudoso o negativo, os tejidos serán sometidos a otro examen uterior por uno de os otros métodos y protocoos de confirmación. En e caso de as muestras procedentes de a Vigiancia activa, cuando e resutado de a prueba rápida utiizada para e anáisis de as muestras fuera positivo o dudoso, se remitirá muestra para anáisis mediante pruebas de confirmación en os aboratorios autorizados de as CCAA para reaizar dichas pruebas o, en su defecto, en e Laboratorio Naciona de Referencia para as EETs (LCV Agete). En estas circunstancias, a muestra se someterá a examen mediante uno de os métodos de confirmación descritos en a útima edición de Manua OIE y en e Regamento 162/2009: método inmunohistoquímico, inmunotransferencia SAF o una aternativa autorizada por a OIE, observación de as fibrias características por microscopía eectrónica, examen histopatoógico. Si con ta fin, se usa un examen histopatoógico que resuta dudoso o negativo, os tejidos serán sometidos a otro examen uterior por otro de os métodos y protocoos de confirmación. En e LNR se reaizarán simutáneamente as nuevas pruebas de confirmación necesarias Para os casos de muestras que necesitan confirmación y que proceden tanto de vigiancia activa como vigiancia pasiva, si e resutado de a prueba de confirmación es negativo (a excepción de anáisis histopatoógico), e anima será considerado negativo. En e supuesto de que un resutado de uno de os exámenes de confirmación mencionados sea positivo, os animaes se considerarán casos positivos 16 Amagro, 33

17 de EET y se procederá a a reaización de as pruebas discriminatorias autorizadas por a Unión Europea en e Regamento 999/2001. Si una CCAA dispusiera de aboratorio autorizado para reaizar pruebas de confirmación y se obtuviera un resutado dudoso o positivo a as mismas, a muestra se remitirá a LNR para as EETs (LCV Agete). En e Cuadro 3. se presenta diagrama de os anáisis reaizados en e LNR para as especies de ovino y caprino. Diagrama de Anáisis en Ovino / Caprino Toma de muestra Laboratorio Autorizado Centro Naciona de Referencia de EETs Anáisis por pruebas rápidas Anáisis por pruebas rápidas Negativo Positivo / Dudoso Positivo / Sospechoso / Dudoso Negativo Centro Naciona de Referencia de EETs Rechazada TÉCNICAS DE CONFIRMACIÓN Western Bot Confirmatorio Inmunohistoquímica* Histoogía Negativo Positivo Negativo Positivo / No Scrapie atípico Concuyente Negativo Positivo No Concuyente TÉCNICAS DE DISCRIMINACIÓN No Apta VLA CEA * Eección habitua EEB Scrapie cásico Scrapie atípico EEB Cuadro 3. Diagrama de fujo de anáisis reaizados en e LNR para as especies ovina/caprina 17 Amagro, 33

18 II. TOMA DE MUESTRAS La toma de muestras se reaizará por persona formado específicamente para eo. Las muestras se remitirán a aboratorio a a mayor brevedad, a ser posibe dentro de as 48 horas posteriores a a toma de muestras, y mediante un sistema que garantice a egada de a muestra en adecuadas condiciones de conservación. Las muestras deben remitirse en envases individuaes herméticos e irrompibes, perfectamente identificados y acompañadas de a hoja/s de toma de muestras correspondientes debidamente cumpimentadas. 1. VIGILANCIA PASIVA La toma de muestras consistirá en a extracción de encéfao competo y de no ser posibe, siempre e tronco encefáico competo vía foramen magnum, incuyendo cerebeo de acuerdo con e esquema de a Figura 1. Fig. 1 Una vez reaizada a extracción de tronco de encéfao, debe enviarse en fresco (4º C) a LNR para a reaización de as técnicas de confirmación, descritas en a útima edición de Manua OIE: combinación de test rápidos, western-bot de confirmación, histoogía e inmunohistoquímica; así como técnicas discriminatorias de cepas tanto de EEB como de Scrapie. 18 Amagro, 33

19 2. VIGILANCIA ACTIVA La TOMA DE MUESTRA consistirá en: 1. Extracción de tronco encefáico incuyendo e cerebeo, vía foramen magnum. 2. Reaizar una sección ongitudina de mismo siguiendo a ínea media, según e esquema de a Figura 2, obteniendo 2 secciones simétricas: a. Sección B1: Muestra en fresco para e diagnóstico mediante os tests rápidos en e aboratorio autorizado de cada Comunidad Autónoma. b. Sección B2: Muestra en fresco para enviar a LNR para a reaización de as técnicas de confirmación descritas en a útima edición de Manua OIE: combinación de test rápidos, western-bot de confirmación, histoogía e inmunohistoquímica; así como técnicas discriminatorias de cepas tanto de EEB como de Scrapie. B1 B2 Fig Amagro, 33

20 REMISIÓN de muestras: Sección B1: Muestra en fresco para e diagnóstico mediante os tests rápidos en e aboratorio autorizado de cada Comunidad Autónoma. Enviar a LNR e resto de muestra de esta sección siempre que sea posibe. Sección B2: Muestra en fresco (4º C) para a confirmación y/o para discriminación de cepas de EETs. Enviar a LNR para a confirmación mediante os métodos descritos en a útima edición de Manua OIE así como a discriminación de cepas tanto de EEB como de Scrapie. Cerebeo: en todos os casos. Enviar a LNR para a discriminación de cepas. SIEMPRE QUE SE ENVIEN MUESTRAS AL LCV DE ALGETE, TANTO EN EL CASO DE LA VIGILANCIA PASIVA COMO EN EL DE LA ACTIVA ES MUY IMPORTANTE RECORDAR QUE: De acuerdo con as indicaciones de Laboratorio Comunitario de Referencia (AHVLA Weybridge), para poder reaizar as diferentes pruebas confirmatorias y/o discriminatorias, a cantidad mínima requerida para a confirmación por técnicas de a OIE, será de 6 gramos. En e caso de ovinos donde a cantidad de muestra tomada es menor, a cantidad debe aproximarse o más posibe a a requerida. 20 Amagro, 33

21 DOCUMENTACIÓN DE ACOMPAÑAMIENTO DE LAS MUESTRAS. Las muestras irán acompañadas, como mínimo, de a documentación que a continuación se señaa. Cuando a muestra sea enviada de un aboratorio a otro, para confirmación de resutados, se adjuntara también copia competa de a documentación de a misma: Todas as muestras irán acompañados por a documentación estabecida como Modeo 1 o 2 (según especie). Además, para os animaes sospechosos se adjuntará a encuesta según e Modeo 3, que recoge os síntomas detectados. Cuando as muestras sean enviadas desde un aboratorio autorizado de a CCAA a LNR Laboratorio Naciona de Referencia, se adjuntará a documentación estabecida como Modeo 4. Todos estos modeos están disponibes en os programas nacionaes de vigiancia, contro y erradicación de a Encefaopatías Espongiformes Transmisibes en a dirección web: 21 Amagro, 33

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