> NT-32 rev. 2 ENAC Tipo III: Métodos basados en métodos de referencia Tipo IV: Otros métodos.

Transcripción

1 > NT-32 rev. 2 ENAC Tipo III: Métodos basados en métodos de referencia. Métodos descritos en procedimientos internos del laboratorio, que están basados claramente en métodos de referencia y que no suponen una modificación técnica. Tipo IV: Otros métodos. Son aquellos métodos desarrollados por el propio laboratorio o por cualquier otra parte que no disponen del reconocimiento de los métodos de referencia o de los métodos alternativos. 21/182

2 > Norma UNE EN ISO 17025:2005 y NT-32 ENAC En cualquier de los casos anteriores, y suponiendo que el método alternativo está validado de forma correcta (esté o no certificado) el laboratorio siempre debe: confirmar que puede aplicar correctamente los métodos antes de utilizarlos para los ensayos 22/182

3 Esquema de Validación y Comprobación de Métodos Alternativos 23/182

4 MÉTODO ALTERNATIVO > Árbol de decisión VALIDADO? SI CERTIFICADO? NO CERTIFICADO VALIDAR (ISO 16140) CUALITATIVO Nivel detección Relativa Exclusividad/Inclusividad Eficacia, sensibilidad y especificidad Desviación negativa y positiva SI NO Es completa la validación? SI NO VALIDACIÓN CUANTITATIVO Límite detección y cuantificación. -Linealidad y precisión. -Sensibilidad COMPROBAR EL FUNCIONAMIENTO CUALITATIVO Nivel detección Relativa Registros y evaluación del funcionamiento CUANTITATIVO Recuperación Precisión Matrices Analistas Equipos Reactivos Criterios Control de Calidad Interno TAREA DEL LABORATORIO DE ANÁLISIS 24/182

5 Validación de Métodos Alternativos Acorde a ISO 16140:2003 (Laboratorio Experto + Intercomparativo) 25/182

6 El protocolo utilizado para validar los métodos alternativos se encuentra en la Norma UNE-EN ISO 16140:2003 que contempla: Términos y Definiciones Principios generales Validación de métodos cualitativos Validación de métodos cuantitativos Anexos (muestras, Diseño de experiencias, tratamiento estadístico, estudios colaborativos) Además, existen otros protocolos desarrollados para métodos microbiológicos de aguas que pueden servir de referencia como ISO/TR 13843:2000 y UNE-EN ISO 17994:2004) 26/182

7 Definiciones Validación: Confirmación mediante el examen y la aportación de evidencias objetivas que demuestren el cumplimiento de ciertos requisitos para el uso específico previsto (ISO apdo ) Desviación positiva: Se produce cuando el método a validar da un resultado positivo y el valor de referencia es negativo. Una desviación positiva se convierte en una falso positivo cuando se puede demostrar que el resultado verdadero es negativo. Desviación negativa: Se produce cuando el método a validar da un resultado negativo y el valor de referencia es positivo. Una desviación positiva se convierte en una falso negativo cuando se puede demostrar que el resultado verdadero es positivo. 27/182

8 > Desviaciones positivas y negativas MÉTODO A MÉTODO B 28/182

9 Definiciones Sensibilidad relativa: Capacidad del método a validar de detectar el microorganismo cuando está presente en la muestra a analizar o no diferir de manera significativa del valor de referencia. Especificidad relativa: Capacidad del método a validar para no detectar el analito cuando no es detectado por el método de referencia. Eficacia relativa: Grado de concordancia entre la respuesta obtenida por el método a validar y el valor verdadero obtenido en muestras idénticas. 29/182

10 Definiciones Nivel de detección: Menor número de microorganismos que puede detectarse en una muestra. Inclusividad: Capacidad para detectar el analito entre un amplio grupo de cepas diana. Exclusividad: Ausencia de interferencia en el método de un grupo de cepas no diana. Linealidad: Aptitud del método para dar resultados que están en proporción con la cantidad de microorganismos presentes en la muestra Exactitud relativa: Grado de concordancia entre un resultado de análisis y el valor de referencia aceptado. 30/182

11 Definiciones Sesgo: Diferencia entre el resultado esperado del análisis y un valor de referencia aceptado. Limite de cuantificación: La menor cantidad de microorganismos que puede ser medido con una precisión y exactitud definidas Repetibilidad: Realización de los ensayos en las mismas condiciones (mismo analista, equipos, medios de cultivo ) Reproducibilidad: Realización de los ensayos en las condiciones más diversas (distinto analista, equipos, dias, medios de cultivo ) 31/182

12 Definiciones Ejemplos de precisión y exactitud. Valores estadísticos de dispersión (desviación estándar y coeficiente de variación) 32/182

13 Definiciones Distribución de población: 33/182

14 Definiciones Incertidumbre: Parámetro, asociado al resultado de medida, que caracteriza la dispersión de los valores que pueden ser atribuibles de forma razonable a los valores al recuento obtenido. 34/182

15 Alcance de la validación ISO Métodos presencia/ausencia Especificidad Sensibilidad Eficacia Desviación positiva y negativa Limite de detección Inclusividad y exclusividad Métodos cuantitativos Precisión Exactitud Linealidad Desviación positiva y negativa Limite de cuantificación 35/182

16 Puesta a punto del método Planificación Personal Matrices Cepas de referencia VALIDACIÓN Ejecución Evaluación de resultados Reproducibilidad Contaminación cruzada Estadística Obtención de parámetros. Informe de validación Control de calidad Resultados Registros primarios Fechas de ejecución Personal implicado 36/182

17 Validación por comparación de métodos Se requiere disponer de un método de referencia con el que comparar el método a validar X g de alimento + 9x ml. De diluyente Homogenización Primera etapa de cultivo Inoculación (si procede) División Duplicado 1 Duplicado 2 DUPLICACIÓN DE MUESTRAS CUANDO AMBOS MÉTODOS TIENEN UNA PRIMERA ETAPA COMÚN 37/182

18 Validación por comparación de métodos Productos sólidos X g de alimento + x ml. De diluyente Inoculación (si procede) Homogenización X ml. Productos líquidos División Método de referencia Método alternativo 2x g de homogeneizado (x ml. para productos líquidos) + 18x ml. De diluyente (9x ml diluyente en prod. Líquidos) 2x g de homogeneizado (x ml. para productos líquidos) + 18x ml. De diluyente (9x ml diluyente en prod. Líquidos) DUPLICACIÓN DE MUESTRAS CUANDO AMBOS MÉTODOS TIENEN DIFERENTES ETAPAS 38/182

19 Matrices a emplear Carnes y producto cárnicos Aves de corral Productos lácteos Otros productos (especias, salsas, huevos, pastas, cereales, bebidas) Pescados y mariscos Frutas y verduras Chocolate/productos panadería Alimentación animal El anexo B de la ISO incluye recomendación de matrices vs microorganismos 39/182

20 Inoculación 1º.-MUESTRAS NATURALMENTE CONTAMINADAS 2º.-CONTAMINACIÓN POR MEZCLA 3º.-MUESTRAS CONTAMINADAS ARTIFICIALMENTE 4º.-MATERIALES DE REFERENCIA Tipo de muestras a emplear para la validación 40/182